用基于狂犬病病毒的疫苗感染和激活B细胞

<正>复制缺陷型狂犬病毒(RABV)可快速和有效激发在小鼠体内由T细胞依赖和非T细胞依赖机制产生的病毒中和抗体滴度,因此有望用于研制狂犬病毒暴露后疫苗。为了促进这种早期有效的B细胞激活,我们假设,活RABV研制的疫苗可直接感染B细胞,从而活化大量的抗原提呈细胞(APCs),APCs可在早期启动并且共同刺激CD4+T细胞。在本报道中,我们用活RABV研制的疫苗载体有效感染来自出生早期的小鼠和人类的B细胞。与感染模型或用灭活RABV疫苗处理细胞相比较,B细胞感染导致了B细胞激活和抗原呈递早期标志的明     

病毒复制能力,血源扩散的抗原可用性以及T_(FH):T_(FR)的比率驱动诱导有效中和抗体应答

<正>病毒活疫苗可引起长期保护性的体液免疫,但其潜在机制尚未完全阐明。亲和成熟的发生、长效的保护性抗体应答的产生涉及T滤泡辅助细胞,生发中心,B细胞和T滤泡调节细胞之间的密切相互作用。作者假设通过血源途径传播的复制病毒或活疫苗引起的抗原浓度升高对于诱导和维持长期保护性抗体应答是必要的。使用复制或很少复制或不复制的甲型流感病毒,发现TFH细胞、GC B细胞和中和抗体反应的大小与病毒的复制能力直接相关。此外,还发现,在GC反应峰值期间,淋巴和循环     

预防性丙型肝炎病毒疫苗研究新策略

全球有超过7 000万名丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)慢性感染患者,给社会带来严重的公共卫生安全问题。直接抗病毒药物(Direct antiviral drugs,DAA)能够有效地治愈慢性丙型肝炎病毒感染,但治愈后患者仍存在再感染的可能,预防性疫苗(Prophylactic vaccine)是彻底切断HCV传播的最有效途径。目前HCV预防性疫苗的研发已取得一定进展,能够诱导极少数受试者产生广谱中和抗体(Broadly neutralizing antibodies),如何在绝大多数个体中诱导保护性广谱中和抗体则是当前HCV预防性疫苗研究所面临的最大挑战。本文总结了当前疫苗免疫学的研究进展:包括抗原特异的B细胞前体(Precursor B cell)、滤泡辅助性T细胞(Follicular T helper cell,Tfh)、滤泡调节性T细胞(Follicular T regulatory cell,Tfr)、抗体重链基因1-69(VH1-69)编码抗体成熟特点;基于胚系靶向(Germline-targeting)的免疫原设计与序贯免疫策略(Sequential immunization)等,期望能为HCV疫苗研究提供新的思路。     

整合狂犬病病毒G蛋白的假病毒构建及应用

目的 构建表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)G蛋白的假病毒，为RABV中和抗体检测及疫苗的研发提供有效实验工具。方法 通过无缝克隆技术构建表达RABV G蛋白的假病毒p-RABV-G,通过抗体中和试验评估狂犬疫苗接种者体内的中和抗体水平。结果 成功在293T细胞内进行假病毒p-RABV-G的包装，p-RABV-G可以表达G蛋白，并能高效感染Huh7.5细胞。4位狂犬疫苗接种者21 d的血清对p-RABV-G的抑制效果处于最优水平，在1∶625倍数的稀释条件下对p-RABV-G的抑制率高达95.79%、98.26%、98.42%和98.88%。结论 成功构建表达RABV G蛋白的假病毒p-RABV-G可用于狂犬疫苗的开发与中和抗体的筛选。在狂犬疫苗接种后的111 d,本文调查的4位接种者中的其中3位体内血清仍可对p-RABV-G产生抑制效果。     

有关爱滋病(AIDS)疫苗的几个问题

<正>当前人们把AIDS病(即获得性免疫缺欠症)疫苗研制的种种希望均集中在以人类免疫缺欠病毒(HIV)的全部或部分半膜蛋白作为保护性抗原上。评价这一方法能否成功尚为时太早,但十月末巴黎会议的种种迹象表明结果并不令人鼓舞。与会者尚难断定:1.单独半膜蛋白能否诱导保护性抗体的产生;2.该病的免疫是否既需要抗体介导又需要细胞介导;3.是否有适用的动物模型及足够量供疫苗试验用的动物。     

表达新冠病毒S基因重组狂犬病病毒的构建及其免疫原性

【背景】新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)在全球流行已近3年,除对人类造成了巨大伤害,也影响了人类的伴侣动物。人的COVID-19疫苗已在全球应用,但动物用的新冠病毒疫苗却鲜有报道。【目的】研制兽用新冠病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)和狂犬病病毒(rabies virus,RABV)的二联苗。【方法】将合成的SARS-CoV-2 S基因和S1基因分别克隆至RABV弱毒疫苗株rHEP-Flury基因组G与L基因间,并将2个重组质粒分别与辅助质粒共转染至BHK-21细胞中,拯救重组病毒rHEP-nCOV-S和rHEP-nCOV-S1。通过RT-PCR、Western blotting和荧光抗体染色,验证重组病毒、确证S和S1蛋白在RABV中成功表达。再将重组病毒接种NA细胞及成年小白鼠,测定病毒的体外生长特性、重组病毒的致病性及免疫原性。【结果】免疫荧光结果显示,转染7d后细胞上清均出现了绿色免疫荧光,表明已成功拯救嵌合SARS-CoV-2S和S1基因的重组病毒RABV rHEP-nCOV-S和rHEP-nCOV-S1,并且rHEP-nCOV-S1的增殖和扩散能力强于亲本株rHEP-Flury,但rHEP-nCOV-S与亲本株无显著差异。Western blotting结果显示,在目的位置处均出现72kDa和144kDa特异性条带,表明S和S1蛋白在重组RABV中高效表达。重组病毒免疫6周KM小鼠后,小鼠的体重变化与亲本RABV基本一致,重组病毒诱导小鼠产生狂犬中和抗体。【结论】本研究拯救出了嵌合SARS-CoV-2 S/S1基因的重组RABV,为动物COVID-19载体疫苗的研发奠定了基础。     

抗原特异性滤泡辅助性T细胞的活化与诱导在流感减毒活疫苗所诱导的人黏膜免疫抗体应答中发挥关键作用

当前,抗呼吸道感染的鼻内疫苗开发项目正日益吸引着越来越多的关注。对疫苗所诱导的保护力而言,抗体应答是决定性的,而人们普遍认为滤泡辅助T细胞(TFH)对于介导抗体应答非常重要。绝大多数支持TFH在免疫应答中作用的数据均来自于动物研究,而除血液中存在TFH样细胞外,来自人体的直接证据则十分有限。研究者考察了在人类鼻咽相关淋巴组织(NALT)中TFH细胞的活化与诱导,及其在流感减毒活疫苗(LAIV)所诱导的抗体应答中的作用。腺扁桃体组织的TFH细胞活化情况使用流式细胞仪分析,同时在LAIV刺激扁桃体单核细胞(MNC)后检测抗流感血凝素(anti-HA)抗体。通过使用流式细胞仪对被诱导的TFH细胞和CD154表达进行分析,研究者对由LAIV诱导的抗原特异性TFH细胞活化情况展开研究。LAIV诱导了与抗HA抗体产生有关的TFH细胞增殖,同时研究显示TFH细胞对于抗体应答至关重要。表达BCL6和CD21新诱导的TFH细胞以及随后抗HA抗体的测定表明,初始T细胞被LAIV诱导成为TFH细胞。     

GPR174-CCL21调控体液免疫应答的两性差异

体液免疫应答具有明显的两性差异。通常女性产生的针对外来病原体或者自身抗原的抗体水平相比男性更高,因此女性比男性更容易清除病原体的感染,但女性也比男性更容易患自身免疫疾病。长效且高亲和力的体液免疫应答依赖由B细胞形成的生发中心(germinal center, GC)反应,然而B细胞形成GC的能力是否存在两性差异从而直接导致体液免疫应答的两性差异尚不清楚。该研究提出了一套在分子和细胞水平上解释体液免疫应答两性差异的新机制,即雄激素可以增强B细胞表达的GPR174在接收到CCL21信号后与Gαi蛋白的结合水平,由此促进雄性B细胞更多地迁移在滤泡外周,而不能更多地迁移至滤泡中心形成GC及抗体应答,从而直接介导体液免疫应答的两性差异。该研究为解决在增强保护性疫苗抗体应答水平以及治疗自身免疫疾病时遇到的B细胞介导的两性差异问题提供了新的见解。     

滤泡辅助性T细胞分化和功能的研究进展

滤泡辅助性T细胞(Tfollicular helper cells,TFH细胞)是新近发现的一种CD4+辅助性T细胞亚群,具有不同于其他亚群的独特功能:迁移到B淋巴滤泡并辅助B淋巴细胞产生抗体。在短短的几年里面,已有大量针对滤泡辅助性T细胞分化与功能的研究。该文将对滤泡辅助性T细胞的最新研究进展作一综述。     

抗中东呼吸综合征冠状病毒和狂犬病病毒的安全、有效的人与动物双用疫苗

正中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-Co V)于2012年出现,是高致病性呼吸道病毒。对于人类或动物,没有针对MERS-Co V的治疗方法,没有针对MERSCo V治疗方案的大规模临床试验。为了解决这个需要,作者开发了一种灭活的狂犬病病毒(RABV),在其表面表达MERS-Co V刺突(S)蛋白。最初的重组疫苗BNSP333-S表达全长野生型MERS-Co V S蛋白;然而,相比于亲本RABV株,它的病毒滴度有显著的减少并且全长MERS-Co V S整入RABV颗粒的水平低。因此,作者研发了RABV-MERS载体,其含有与RABV G蛋白C末端(BNSP333-S1)融合的     

HEVAg-PLGA纳米颗粒疫苗小鼠体内免疫学研究

研究重组戊型肝炎抗原(HEVAg)-乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)纳米颗粒抗原能否在动物体内诱导产生免疫应答。制备HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原后,通过皮下、滴鼻、口服途径接种Balb/c小鼠,每隔4周加强免疫两次,HEVAg与铝盐佐剂(铝佐剂疫苗Al_2O_3-Ag)为对照组,一定时间内检测抗体及细胞因子的应答水平。结果HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原在小鼠体内诱导产生有效的体液免疫、细胞免疫。滴鼻、口服途径黏膜系统中诱导产生较高滴度的IgA抗体,ELISPOT结果显示鼻腔、唾液腺中IgA ASCs数量显著增加;皮下途径诱导产生较高滴度的IgG抗体;常规铝佐剂疫苗相比于HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导较强的IgG抗体水平,未诱导产生黏膜免疫应答;HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原诱导产生较强细胞免疫应答,皮下接种途径IFN-γ、IL-4生成细胞数量显著高于其它免疫组。与铝佐剂疫苗相比,HEVAg-PLGA纳米颗粒抗原能有效诱导产生系统免疫及黏膜免疫应答,显示HEVAg-PLGA有潜力成为备选HEV黏膜疫苗抗原,同时展示PLGA颗粒作为黏膜系统抗原递送载体及黏膜佐剂的优越性。     

激光佐剂辅助的肽疫苗促进皮肤树突细胞的转移并加强抵御疱疹病毒感染及疾病的保护性CD8+ TEM以及TRM细胞应答

针对诸如单纯疱疹病毒2(HSV-2)这类分布广泛并可感染全球大部分人口的病毒类病原体,人们一直迫切地需要无化学及生物成分的安全佐剂以加强疫苗的免疫原性。在此研究中,研究者考察了在生殖器疱疹B6小鼠模型中激光佐剂辅助肽(LAP)疫苗的安全性、免疫原性和保护性效力。LAP疫苗及其无激光肽(LFP)疫苗类似物均含有与各种糖蛋白D CD4^+辅助T细胞表位(HSV-gD 49-89 )共价连接的免疫显性HSV-2糖蛋白B CD8^+T细胞表位(HSV-gB 498-505)。在用LAP进行皮内投递之前,下部被剃的B6或CD11c/eYFP转基因小鼠首先接受5%咪喹莫特乳膏的局部处理,然后将其暴露于采用FDA认可的非烧蚀二极管的激光中持续60秒。     

一种含不同流感病毒血凝素抗原表位的核酸疫苗

流感病毒表面抗原血凝素( hemagglutinin,HA)是流感核酸疫苗重要的靶抗原,针对HA的保护性中和抗体主要由HA上的五个抗原表位诱导产生.在本文中,我们构建了一种以新甲型H1N1流感病毒HA1为骨架的含2个A/PR/8( H1N1)流感病毒HA抗原表位和3个新甲型H1N1流感病毒HA抗原表位的核酸疫苗,并在B...     

重组腺病毒载体乙肝疫苗的免疫学研究

目的比较腺病毒(Adenovirus,Ad)载体乙型肝炎病毒(Hapotitis B virus,HBV)疫苗鼻腔黏膜、皮下注射接种小鼠免疫效果.方法以腺病毒为载体、以HBV preS2/S为目的基因构建重组疫苗,然后将重组疫苗分别鼻黏膜和皮下接种BALB/c小鼠,与阴性对照组(载体对照组、生理盐水对照组)比较接种重组疫苗35、72 d的免疫效果.结果鼻腔接种Ad HBV疫苗组动物在72 d时血清抗体终末效价为1/2 470,同时可提高NK细胞杀伤能力和干扰素-γ、IL-2含量升高.皮下注射Ad HBV在免疫35 d和72 d、1∶200血清稀释度均未测到阳性抗体(A值,P/N值＜2.1).结论重组疫苗黏膜接种诱导小鼠产生特异抗体和细胞免疫反应高于皮下接种途径.     

重组腺病毒载体疫苗黏膜免疫机制与途径研究

腺病毒作为载体具有许多优点,因此被广泛地应用于体外基因转导、体内接种疫苗和基因治疗等领域。近年来,国内外学者已经构建了表达不同抗原的腺病毒载体,如人(猿)免疫缺陷病毒Gag,pol,Nef,Env,狂犬病毒糖蛋白,登革热病毒包膜蛋白,乙型肝炎病毒表面抗原,丙型肝炎病毒E1、E2、core、NS3,麻疹病毒核衣壳、凝血素,呼吸道合胞病毒糖蛋白,2型单纯疱疹病毒糖蛋白B、炭疽杆菌保护性抗原等。其中有不少载体疫苗通过黏膜免疫接种,诱导机体产生具有保护作用的免疫反应。本文就重组腺病毒载体疫苗黏膜免疫机制和黏膜免疫途径的研究作一回顾。     

霍乱毒素B亚单位基因在鼠伤寒沙门氏菌中的表达

本工作成功地将霍乱毒素B亚单位(ctx B)基因插入到带有天门冬氨酸β-半醛脱氢酶基困(asd+)的pYAZ48质粒中,并将它转化至天门冬氨酸β-半醛脱氢酶突变(asd-)鼠伤寒沙门氏菌中。实验结果表明,ctx B亚单位基因能在鼠伤寒沙门氏菌中高效表达,并且表达的蛋白能分泌到细胞外。动物实验结果也表明：该疫苗菌株能在肠粘膜细胞定居;口服及全身免疫均能产生较高的抗体,并能增强动物细胞的免疫功能;对伤寒、霍乱有毒株的攻击有良好的保护效果。该系统的应用为疫苗基因工程提供了一个新的途径。     

Ⅱ类MHC在接种流感疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用

<正>MHCⅡ类缺陷(MHC-II KO;Aβ-/-)小鼠用于评价MHC-II类分子在接种疫苗后诱导保护性免疫应答中的作用。接种流感A/PR8病毒样颗粒(VLP)疫苗后,完全不同于CD4 T细胞缺陷小鼠,在MHCⅡ类分子缺陷小鼠体内外均未检测到疫苗特异性免疫球蛋白Ig G抗体。缺乏MHCⅡ类分子并没有明显影响血清中诱导产生特异性Ig M抗体。用     

大鼠卵巢颗粒细胞纤溶酶原激活因子的测定

人们从多种途径来研究排卵过程中滤泡壁的变化。多年来,随着研究方法的发展,认识不断深入,并提出了许多假设和理论。早在1916年,Schochet(1916)用试管内渗透的方法提出了蛋白水解酶能降解滤泡壁的假设;此后,Espey 等人用空斑法试验了包括酶与非酶类的多种物质,证明蛋白水解酶能溶解滤泡壁的结缔组织,减弱了滤泡壁的强度(Espey 1970)。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向甲状腺滤泡细胞分化的实验研究

目的研究体外诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化成甲状腺滤泡细胞的培养条件,探讨其对BMSCs向甲状腺滤泡细胞分化的诱导作用。方法实验分组:阴性对照组(B组)、阳性对照组(T组)、共培养组(C组)、诱导素组(F组)、共培养+诱导素组(C+F组)。倒置显微镜下观察各组诱导1周后细胞形态的变化;细胞免疫染色法检测甲状腺特有标记物的表达;RT-PCR分析诱导后细胞内甲状腺细胞相关基因表达水平。多组间均数比较使用单因素方差分析ANOVA,两组间资料差异比较采用t检验。结果 SD大鼠BMSCs (P3)诱导1周:(1)细胞免疫染色结果显示各实验组甲状腺转录因子TTF1和PAX8及钠/碘同向转运体(NIS)、甲状腺过氧化物酶(TPO)与甲状腺球蛋白(Tg)表达情况不同,其中以C+F组染色效果显著加深;(2)RT-PCR分析与C+F组比较,B组、C组、F组PAX8 (6.21±0.04,0.02±0.01,0.54±0.03,3.31±0.30,F=283.07,P 0.05)、TTF1 (0.33±0.04,0.03±0.01,0.15±0.03,0.08±0.02,F=73.36,P 0.05)、TG (14.90±2.00,0.10±0.05,1.61±0.40,1.91±0.39,F=134.03,P 0.05)mRNA水平下降。结论在体外BMSCs与FRTL-5间接接触共培养体系中添加TSH、胰岛素、转铁蛋白、生长抑素及氢化可的松可诱导BMSCs分化为表达甲状腺滤泡细胞特异抗原的细胞。     

肺炎链球菌溶血素的研究进展

肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,PLY)是肺炎链球菌的一种重要毒力因子,包含4个结构域,是胆固醇依赖性细胞溶血素(CDCs)的家族成员之一。PLY可广泛作用于宿主组织细胞,发挥细胞毒性作用。PLY可活化补体经典途径,诱导巨噬细胞和单核细胞等产生细胞因子,介导机体免疫应答过程。PLY是肺炎链球菌蛋白疫苗和相关小分子药物研制的重要靶标。本文就PLY的结构、功能及相关疫苗的最新研究进展进行综述。