林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型鉴定及部分耐药基因的PCR检测

为调查林麝肺源致病性大肠杆菌O因子血清型以及相关耐药基因的流行状况,本试验采用玻板凝集反应法进行O因子血清型鉴定;同时用PCR方法检测耐药基因。结果显示:O血清型定型的有16株菌,分别属于9个不同的血清型,其中O78为优势血清型,占定型菌株的43.75%(7/16)。同时,29株菌皆携带多种耐药基因,其中磺胺类耐药基因sul1、sul2、sul3,喹诺酮类耐药基因aac(6')-Ib、qnrB,β-内酰胺酶类耐药基因blaTEM、blaCTX-M,氨基糖苷类耐药基因aac(3)-IIa、ant(3″)-Ia和四环素类耐药基因tet(B)检出率较高,检出率分别为100%、96.55%、96.55%、100%、86.21%、100%、65.52%、100%、96.55%和58.62%。本试验结果对林麝临床科学合理用药有重要指导意义。     

新生BALB/c小鼠大脑皮质神经元细胞培养方法的建立

目的:经改良和优化,建立高纯度BALB/c小鼠大脑皮质神经元培养的方法.方法:采用L-多聚赖氨酸包被细胞培养板,取新生BALB/c小鼠(出生24 h内)大脑皮质组织,经0.25%胰酶消化后吹打成单个细胞,按1×106/孔接种于35 mm的六孔板中,用神经元细胞培养种植液培养6 h后换神经元细胞培养饲养液,培养40 h时...     

BALB/c小鼠作为单纯疱疹病毒1型感染模型的免疫学分析

在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)群体中树突细胞比例及功能、血清中和抗体水平、PBMC中HSV-1抗原特异性T细胞水平,以及潜伏感染期小鼠神经组织中CD8^＋ T细胞浸润情况。结果显示,HSV-1毒株Mckrae、17＋以角膜及滴鼻途径感染3周龄及6周龄BALB/c小鼠后,小鼠PBMC中树突细胞数量增加,并显示出刺激病毒抗原特异性T细胞增殖的能力。病毒感染后35 d,小鼠PBMC中未检测到白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)^＋抗原特异性T细胞,但能检测到低水平的γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)^＋抗原特异性T细胞;小鼠血清中未检测到或仅能检测到低水平的中和抗体。HSV-1以皮下及足垫注射途径感染BALB/c小鼠90 d后,足垫感染途径较皮下感染诱导出更高水平的血清中和抗体,PBMC中可检测到IL-4^＋及IFN-γ^＋抗原特异性T细胞,但不同毒株及小鼠周龄之间出现T细胞反应程度差异。组织病理学结果表明,各组小鼠三叉神经组织中均有CD8^＋ T细胞浸润。这些结果提示,不同HSV-1毒株以不同途径感染不同周龄BALB/c小鼠后,均可刺激树突细胞成熟及呈递病毒抗原,但血清中和抗体及PBMC中病毒抗原特异性T细胞水平在不同毒株、感染途径及小鼠周龄之间有差异。     

H9N2亚型猪流感病毒感染BALB/c小鼠动物模型的建立

目的建立H9N2亚型猪流感病毒感染BALB/c小鼠动物模型,为研究病毒致病机制提供模型动物。方法通过滴鼻的方法将H9N2亚型猪流感病毒感染BALB/c小鼠,观察小鼠的症状和组织病理变化。结果 BALB/c小鼠的临床症状明显,病理变化典型。结论 H9N2亚型猪流感病毒感染BALB/c小鼠的疾病模型成功建立。     

新生BALB/c小鼠肠道潘氏细胞的分布规律

观察BALB/c小鼠小肠潘氏细胞的分布规律。应用石蜡切片、H&E染色技术和LeicaQwin显微图像处理系统,分别对2 d、4 d、6 d、8 d、10 d BALB/c小鼠小肠内潘氏细胞的形态发育、分布规律进行观察和分析。结果发现,4日龄前的BALB/c小鼠各段小肠中肠腺发育尚不完整,未见有潘氏细胞。6日龄后,潘氏细胞开始出现,数量随日龄增加呈递增趋势增长,各日龄间差异显著(P<0.05)。BALB/c小鼠肠道潘氏细胞存在于小肠,十二指肠和空肠较少,回肠较多,各组(不同日龄/肠段)之间差异显著(P<0.05)。     

BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的肺组织动态病理学变化

目的了解用H7N9禽流感病毒分别感染BALB/c小鼠和雪貂后,其肺部动态病理改变,为临床诊断、治疗、预防及机制研究提供帮助。方法 BALB/c小鼠经鼻腔接种106EID50(50μL)H7N9禽流感病毒后第1、2、3、5、7、14、28天分别安乐死2~3只小鼠;雪貂经鼻腔吸入接种106EID50(500μL)H7N9禽流感病毒后第3、7、14、28天分别安乐死1只雪貂,分别观察动物的临床特征改变,肺组织的大体组织形态学变化,HE染色观察动态病理改变,免疫组化染色观察病毒分布及肺组织各种炎细胞的浸润情况。结果感染病毒后的小鼠出现竖毛、嗜睡、死亡等表现,雪貂表现为打喷嚏、鼻腔分泌物、稀便、嗜睡等;大体观察小鼠与雪貂肺组织均可见到暗红色病灶;光镜观察小鼠与雪貂的肺组织均呈现坏死性支气管炎和渗出性间质性肺炎、肺泡炎。感染第2天开始出现炎性病变,7~9 d炎症病变最严重,14 d后逐渐修复吸收,28 d基本完全吸收;T、B淋巴细胞,巨噬细胞不同程度的表达增多,以T细胞增多为主,尤其是CD8+T细胞两种动物均大量表达。结论 H7N9禽流感病毒感染可引起BALB/c小鼠和雪貂肺组织急性支气管炎和肺炎,感染后7~9 d肺部炎症的组织病理学变化最严重,CD8+T细胞明显增多,14d后病灶逐渐吸收。该研究可为临床诊断、治疗、预防该病及进行疾病机制研究提供帮助。     

用微卫星标记技术对国内BALB/c小鼠遗传质量的分析

为了解和掌握国内BALB/c小鼠遗传质量状况,验证微卫星标记技术在近交系小鼠遗传检测中应用的可靠性,应用所筛选的小鼠不同染色体上的14个微卫星基因座,通过PCR扩增对北京、上海、沈阳、广州、长春、重庆和哈尔滨7个地区11个厂家提供的BALB/c小鼠进行遗传质量分析.结果北京、上海、哈尔滨及广州地区7家BALB/c小鼠在14个基因座均呈现一条清晰条带,且群体间呈单态性.沈阳、广州、长春和重庆4个群体有8个基因座在群体内表现杂合或呈多态性;其中沈阳和长春分别在1个基因座上表现多态性和杂合;广州另一群体有4个基因座出现杂合或多态性;重庆群体有7个基因座表现为杂合或多态性,在D10Mit180基因座与上海群体比较呈现多态性.     

乙肝基因疫苗在BALB/c小鼠体内的效力评价

采用ＨＢｓＡｇ高表达细胞株（ＣＨＯ－Ｃ２８）试制的乙肝基因疫苗,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠进行免疫,四周后进行了血清效力评价。并同时与血源乙肝疫苗进行了比较。结果表明,乙肝基因疫苗能达到与乙肝血源疫苗相同的免疫效果。     

免疫外科法分离克隆BALB/c小鼠胚胎干细胞

目的　使用免疫外科法分离克隆BALB c小鼠胚胎干细胞 (embryonicstemcells,ES细胞 ) ,为进一步建立BALB c小鼠ES细胞系打下基础。方法　用免疫外科法从 4 5枚BALB c小鼠囊胚中分离得到 2 0枚去除滋养层细胞的ICM ,接种在MEF饲养层上 ,使用DMEM(高糖 ) 15 ?S 0 1mmol Lβ 巯基乙醇 0 0 1mmol L非必需氨基酸 10 0 0IU mlLIF 10 0IU mL青霉素 10 0IU ml链霉素培养液 ,17枚形成典型的ICM集落 (85 0 % ) ,有一枚胚胎传至第 10代。用于全胚培养的BALB c小鼠胚胎共 10 2枚 ,使用与免疫外科相同的培养方法 ,6 6枚形成典型的ICM集落 (6 4 7% ) ,其中一枚胚胎传至第 8代。结果　免疫外科法较全胚培养法有利于小鼠ES细胞的分离与克隆 ;添加LIF(10 0 0IU ml)有利于小鼠ES细胞的分离与传代 (P <0 0 5 ) ;0 0 5 %胰酶 0 0 0 8?TA是较好的ES细胞消化液 ,对细胞综合损伤力小 ,且传代后ES细胞集落形成能力也较高 (P <0 0 5 )。结论　分离得到的ES细胞经形态学观察 ,AKP染色 ,体外分化实验 ,核型分析等证明其具有胚胎干细胞的诸多特性。     

BALB／c小鼠胚胎干细胞系的建立及其嵌合体小鼠的获得

目的：建立BALB/c小鼠胚胎干细胞系,并用于制作嵌合体小鼠。方法：从BALB／c小鼠囊胚内分离培养内细胞团块。建系后,进行C57BL／6L小鼠受体囊胚腔注射,制作嵌合体小鼠,结果：建立了我国第一株BALB／c小鼠胚胎干细胞系,该细胞系具有典型的ES细胞形态,碱性磷酸酶强阳性,核型正常以及具有分化为三种胚层组织的能力,并已产生5只嵌合体小鼠,结论：建立的BALB／c小鼠胚胎干细胞系具有胚胎干细胞的各种特点,可用于体内外诱导分化研究,在进一步观察生殖系嵌合情况后,决定是否可应用于基因打靶等转基因动物的制作。     

Establishment and application of a lethal model of an HRSV-long variant strain in BALB/c mice

Human respiratory syncytial virus (HRSV) is a major cause of lower respiratory tract infection in infants. The lack of ideal animal models is one of the major obstacles in evaluateing the efficacy of HRSV vaccines. In this study, HRSV-50 was obtained from Hep-2 cells at the 50th passage of the original Long strain (ATCC VR-26). BALB/c mice (6 weeks) were challenged with different titers of HRSV-50. Shockingly, all mice died after 4 days of challenge (6 × 10⁶ PFU/mouse). Whole-genome sequencing revealed 7 amino acid mutations compared with the original Long strain. To verify whether the lethal model can be used to effectively evaluate the efficacy of HRSV candidate vaccines, we studied the protective effect of FRBD protein (Pre-F of HRSV and S receptor binding domain of SARS-CoV-2) with Adju-phos or MA103 adjuvant. All mice in the PBS group died after the HRSV-50 challenge, whereas Adju-phos provided partial protection. These results suggest that we have successfully established a lethal model of HRSV in BALB/c mice.     

感染小鼠组织中Q热立克次体的分子病理学检测

腹腔注射Q热立克次体悬液感染BALB／c小鼠,发病后解剖,取主要组织脏器,应用免疫组化和原位杂交检测感染小鼠体内Q热立克次体的抗原分布和DNA在靶细胞中的表达,探讨Q热病变规律及致病机理。结果显示阳性信号多位于单核-巨噬细胞系统细胞胞浆内。结果提示免疫组化和原位杂交技术可以作为Q热特异性的诊断方法,并为致病机理的研究提供线索。     

SPF级KM小鼠与BALB/c小鼠肠道总菌多样性的比较

目的分析SPF级封闭群KM小鼠及近交系BALB/c小鼠的肠道菌群总菌多样性,比较两个不同遗传背景肠道总菌的丰富度、Shannon-Wiener指数和均匀度。方法收集SPF级KM小鼠和BALB/c小鼠新鲜粪便,提取粪便总菌DNA,用基于细菌16S rDNA序列的变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析粪便总菌多样性。结果 SPF级KM小鼠及BALB/c小鼠粪便总菌多样性差异无统计学意义(P0.05),品系内不同性别之间粪便总菌多样性差异亦无统计学意义(P0.05)。结论选择SPF级小鼠进行微生态学相关研究时,封闭群KM小鼠及近交系BALB/c小鼠均可作为选择对象,同时可忽略菌群的性别差异。     

博尔纳病病毒对BALB/c小鼠感染性检测

目的分析博尔纳病病毒（Borna disease virus,BDV）H1766株对BALB/c小鼠的感染性。方法选择病毒滴度为2.0×107FFU/ml的BDV病毒液分别对新生和成年BALB/c小鼠进行脑内接种,并用相同病毒液对原代培养的新生BALB/c小鼠脑细胞进行接种。经过一定时间的病毒作用后分别提取总RNA,采用巢式RT-PCR方法检测BDV-p40基因,并通过免疫组化方法检测脑内接种脑组织中BDV-P40蛋白。结果脑内接种病毒的小鼠脑组织中可以检测到BDV-p40基因和BDV-P40蛋白,培养的小鼠脑细胞中可以检测到BDV-p40基因。结论BDVH1766株可以感染新生和成年的BALB/c小鼠。     

绵羊肺源性致病性大肠杆菌的分离与鉴定

【目的】近年来,羊呼吸系统疾病日益频发,由肠外致病性大肠杆菌感染引起的呼吸道疾病也日渐增多,给养羊业带来了一定经济损失。本文旨在确定新疆石河子地区某羊场表现为呼吸道感染症状的病死羔羊的细菌性病原及其特性。【方法】采用细菌常规分离鉴定结合16S rRNA基因序列分析的方法从发病羔羊的肺脏中分离鉴定细菌,并对分离株进行药敏试验、特异基因PCR检测、小鼠致病性试验及肺脏组织的病理学观察。【结果】从病死羔羊肺脏组织分离得到一株致病性大肠杆菌,该分离株呈多重耐药现象,检测到iutA、fyuA和ireA三种毒力基因;病变肺脏肺泡壁毛细血管充血,界限不清,支气管管腔充血,周围淋巴细胞浸润、增生。【结论】从病死羔羊肺中分离的细菌性病原是肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)。     

Impact of dengue virus (serotype DENV-2) infection on liver of BALB/c mice: A histopathological analysis

In this research, we characterized the histopathological impact of dengue virus (serotype DENV-2) infection in livers of BALB/c mice. The mice were infected with different doses of DENV-2 via intraperitoneal injection and liver tissues were processed for histological analyses and variation was documented. In the BALB/c mouse model, typical liver tissues showed regular hepatocyte architecture, with normal endothelial cells surrounding sinusoid capillary. Based on histopathological observations, the liver sections of BALB/c mice infected by DENV-2 exhibited a loss of cell integrity, with a widening of the sinusoidal spaces. There were marked increases in the infiltration of mononuclear cells. The areas of hemorrhage and micro- and macrovesicular steatosis were noted. Necrosis and apoptosis were abundantly present. The hallmark of viral infection, i.e., cytopathic effects, included intracellular edema and vacuole formation, cumulatively led to sinusoidal and lobular collapse in the liver. The histopathological studies on autopsy specimens of fatal human DENV cases are important to shed light on tissue damage for preventive and treatment modalities, in order to manage future DENV infections. In this framework, the method present here on BALB/c mouse model may be used to study not only the effects of infections by other DENV serotypes, but also to investigate the effects of novel drugs, such as recently developed nano-formulations, and the relative recovery ability with intact immune functions of host.     

Long-term systemic and mucosal antibody responses measured in BALB/c mice following intranasal challenge with viable enterotoxigenic Escherichia coli

The immunogenicity induced in BALB/c mice following intranasal challenge with a viable nonlethal dose (1.2 x 10(8) CFU) of enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) strain E23477A (O139:H28:CS1:CS3:LT+:ST+) was studied over a 140-day period. Serum IgG and IgM antibodies against coli surface antigen 3 (CS3), O139 lipopolysaccharide and heat-labile enterotoxin were measured by day 14 and remained at elevated levels out to day 140. The serum IgG response to the somatic antigens (CS3 and O139 lipopolysaccharide) was significantly greater (P < 0.05) than the IgG response to heat-labile enterotoxin, and the serum IgG response to CS3 was significantly greater (P < 0.05) than the IgG response to O139 lipopolysaccharide. The predominant serum IgG subclasses to CS3 were IgG1 and IgG2a, and they were significantly greater (P < 0.05) than IgG2b and IgG3. The predominant serum IgG subclass response to O139 lipopolysaccharide was initially IgG3 until day 56, after which IgG1 was predominant. The serum subclass response to CS3 indicated a mixed T helper 1/2 (Th1/Th2) profile, whereas the response to O139 lipopolysaccharide was primarily that of a Th2-type, at least over time. Fecal IgG and IgA responses to CS3 and O139 lipopolysaccharide were detected by day 14 and were measured out to day 140, with the CS3 fecal antibody responses being significantly greater (P < 0.05) than the O139 lipopolysaccharide and heat-labile enterotoxin fecal antibody responses. The aim of this study is the development of the intranasal mouse model that can aid in better understanding the immunopathology of ETEC infection and in screening of vaccine candidates prior to volunteer trials.     

圈养林麝的活跃性及与社会亲和度的关系

采用扫描取样和焦点动物取样法对四川马尔康林麝繁育场的45头圈养林麝进行行为取样,以其非静息行为的发生率作为活跃性指标,以社会亲和行为的发生强度作为社会亲和度指标,分析圈养林麝活跃性与其性别、圈群密度及社会亲和度的关系。结果表明:圈群密度和社会亲和度对圈养林麝的活跃性有显著影响(P < 0.05),但活跃性雌雄差异不显著(P > 0.05)。与高密度圈群的林麝(0.25 ± 0.021, n=32)相比,低密度圈群中的个体更活跃(0.40 ± 0.022, n = 4);活跃性与社会亲和度之间显著相关(r = 0.390, P = 0.01),活跃性较高个体倾向于展现高的社会亲和度。建议麝场在进行麝群构建时,充分考虑林麝个体的活跃性差异及与圈群密度的关系,以提高圈群稳定性和驯养生产力。