新型肺炎链球菌疫苗研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是引发人类肺炎、中耳炎、脑膜炎的主要病原体。为了预防肺炎链球菌感染,人类已研制出了多种相关的疫苗。目前,常用23价肺炎球菌多糖疫苗(23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23)预防成人和2岁以上儿童肺炎链球菌的感染,用7价、10价、13价肺炎球菌结合疫苗来预防婴幼儿肺炎链球菌的感染。虽然荚膜多糖类疫苗能预防其所包含的肺炎链球菌血清型的感染,但非疫苗血清型的菌株还是可以在鼻咽部定植,并引起感染,而且结合疫苗研制工艺复杂、价格昂贵,在发展中国家使用还不普及。鉴于上述原因许多疫苗公司开始研发具有保护力强、价格低廉的新型疫苗。近年来,肺炎链球菌全细胞疫苗和肺炎链球菌纯化蛋白疫苗由于其血清非依赖性和较低的生产成本已成为人们关注的焦点。现对肺炎链球菌新型疫苗的研制及临床应用作一概述。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌疫苗研制对于肺炎链球菌感染的防治具有重要意义。常见的荚膜多糖疫苗存在很大缺陷,需要更为有效的疫苗来替代。本文综述肺炎链球菌疫苗研制中的一些进展,包括结合疫苗的研制、几种公认的蛋白疫苗因子的研究进展和新的蛋白疫苗因子的筛选。同时还介绍肺炎链球菌疫苗研制过程中的一些新思路（联合疫苗、活疫苗、DNA疫苗）,它们是对肺炎链球菌疫苗研制方法的丰富。     

肺炎链球菌分型方法的研究进展

肺炎链球菌疫苗仍是全球最急需的前3位疫苗之一,为保证一个最佳的肺炎链球菌多糖菌苗和(或)蛋白多糖结合菌苗复合物,很有必要对肺炎链球菌进行菌型监测.近年来,WHO及许多国家开展了肺炎链球菌的菌型监测,取得了较好的进展,其分型方法也在不断改进.     

肺炎链球菌疫苗研制进展

肺炎链球菌导致的疾病已成为全球一个重要的公共卫生问题。疫苗开发及使用成为重要的预防策略,目前肺炎球菌疫苗主要有多糖疫苗和多糖蛋白结合疫苗二类。对肺炎链球菌病原学、流行病学、所致疾病、疫苗研发进展及疫苗使用情况进行了综述。     

肺炎链球菌溶血素的研究进展

肺炎链球菌溶血素(Pneumolysin,PLY)是肺炎链球菌的一种重要毒力因子,包含4个结构域,是胆固醇依赖性细胞溶血素(CDCs)的家族成员之一。PLY可广泛作用于宿主组织细胞,发挥细胞毒性作用。PLY可活化补体经典途径,诱导巨噬细胞和单核细胞等产生细胞因子,介导机体免疫应答过程。PLY是肺炎链球菌蛋白疫苗和相关小分子药物研制的重要靶标。本文就PLY的结构、功能及相关疫苗的最新研究进展进行综述。     

肺炎链球菌结合疫苗的发展和评估

由于肺炎链球菌对青霉素等多种抗生素的高水平耐药性以及对万古霉素耐受性的出现,强调了采用其他方法预防肺炎链球菌感染的重要性,即进行免疫接种。应用与在b型流感嗜血杆菌疫苗中所用相同载体蛋白偶联的肺炎链球菌偶联疫苗,与多糖疫苗作比较能较好地增强婴儿和儿童的免疫应答,并且能在世界范围内增强预防肺炎链球菌疾病的能力。本文综述了有关多价肺炎链球菌偶联疫苗临床试验结果,包括对疫苗的评估、为了疫苗的进一步发展而对有效载体蛋白的鉴定、有关临床试用新型疫苗和质量控制,以及预防肺炎链球菌的其他疫苗。     

中国西南地区儿童肺炎链球菌的分子特征及潜在蛋白疫苗rPfbA的评价

<正>生活在中国西南地区的儿童很少接种肺炎链球菌(S. pneumoniae)疫苗,肺炎链球菌是导致高发病率和高死亡率的重要病原体。此研究旨在分析儿童肺炎链球菌菌株的分子特征,以及基于潜在蛋白质抗原的新疫苗策略。使用PCR进行分子表征、包括血清型、毒力基因和菌毛分析。对7个管家基因进行测序以鉴定序列类型(ST),并使用微量稀释肉汤法分析抗生素抗性。此外,作者通过攻击和被动转移分析评估了重组纤溶酶和纤连蛋白结合蛋白A(rPfbA)在小鼠肺炎     

肺炎链球菌相关毒力因子及其作用的研究进展

肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)是导致黏膜疾病(如中耳炎、肺炎)和系统性疾病(包括败血症和脑膜炎)等严重疾病的主要病原体之一。肺炎链球菌毒力因子分为荚膜多糖、S.pn相关蛋白、细胞壁及细胞壁多糖三大类,其中荚膜多糖为最主要的毒力因子,也是疫苗中最有效的成分。毒力因子在S.pn入侵机体及引发疾病的过程中起着重要的作用。因此,毒力因子及作用的研究,不仅对预防和治疗肺炎链球菌的感染有着重要的意义,并为研发安全、有效的多糖疫苗提供一定的技术支持。现就肺炎链球菌毒力因子及其作用作一综述。     

肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究

通过对肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA全序列基因的克隆和表达,获得部分小片段蛋白,初步研究其免疫活性。根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌(ATCC49619)基因组中扩增lytA全序列片段,构建克隆载体PGM-T/lytA,测序后与M66菌株比对显示,肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamHⅠ。以BamHⅠ、HindⅢ双酶切后,目的基因出现2个小片度,以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a(+)/lytA',经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA'。将LytA'免疫小鼠,测定抗体效价,同时进行Western blot鉴定。测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98%,具有高度保守性,碱基不同主要位于下游部分,在444~450 bp之间新出现BamHⅠ酶切位点。构建的小片段重组表达质粒pET32a(+)/lytA'在BL21(DE3)中高效表达,获得纯化蛋白LytA',免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为132,经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性,为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础。     

肺炎链球菌疫苗的研究进展

肺炎链球菌是引起全球所有年龄组高发病率和病死率的主要病原菌。目前投入使用的有23价荚膜多糖疫苗和7价多糖蛋白结合疫苗。荚膜多糖疫苗有许多局限性,蛋白结合疫苗是对其改进,但也不能完全取代它。两者都具有一定效力和良好的安全性,其中蛋白结合疫苗具有更好的免疫原性。此外,其他多价结合疫苗也已进入临床试验阶段。蛋白疫苗、DNA疫苗、联合疫苗、活疫苗也在研制和开发中。     

肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定

为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因,寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者,应用体内表达技术,以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因,利用其缺陷体不能合成荚膜多糖,从而不能在宿主体内存活的特点,筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因。首先,把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200~500bp)克隆到含有体内、体外双重报告基因(galU-lacZ)的报告载体pEVP3-galU的BglⅡ位点,将获得的质粒库转化肺炎链球菌galU缺陷菌株,得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库,将此文库去感染BALB/c小鼠,经过两轮体内筛选,在涂布有X-gal的TSA血清平板上得到了165个白色菌落,对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析,共证实15个不同的体内诱导基因片段,8个为单独的ORF,7个为含有多个ORFs的操纵子结构,它们分别参与细菌在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、DNA复制与重组、细胞壁合成等,另外还包括功能不明的假想蛋白。其中部分ORFs可能与细菌毒力相关,可以作为候选疫苗和药物的靶标。     

肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体定量ELISA检测及质量控制要求

检测肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)特异性抗体的酶联免疫吸附试验多年来经历了两次主要改进。介绍了WHO推荐的人血清抗肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(Pn PS ELISA)检测方法、关键试剂、局限性以及方法验证等内容。ELISA定量检测法,为预防肺炎链球菌的婴幼儿侵袭性疾病提供准确的抗体水平,并对肺炎链球菌疫苗的临床评价提供血清学证据。人血清中肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG是判断肺炎链球菌疫苗效力的重要指标。     

肺炎链球菌Spr0982的表达纯化及保守性分析

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)的糖基转移酶是与其耐药性或致病性相关的基因。本文以S.pneumoniae R6菌株基因组为模板,利用PCR克隆S.pneumoniae中的糖基转移酶(spr0982)基因,构建重组p28(PET28b改造的克隆载体)-Spr0982载体,转化至大肠杆菌BL21-Ril中,利用IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化条件的研究。采用Clustal W在线工具对Spr0982蛋白在不同肺炎链球菌菌株中的保守性进行分析。结果显示:p28-Spr0982重组质粒构建成功,经IPTG诱导后于BL21-Ril菌株中获得大量以包涵体形式存在的目的蛋白质;通过QFF阳离子交换柱和分子筛层析获得较纯的可溶目的蛋白;Spr0982蛋白在不同肺炎链球菌中的保守程度高达99.3%。本研究对于理解S.pneumoniae的致病性和耐药机理研究具有指导意义。     

肺炎链球菌毒力基因体内荧光报告系统的构建*

以绿色荧光蛋白(GFP)作为体内研究的分子探针,将肺炎链球菌毒力基因与gfp融合构建肺炎链球菌自杀性荧光报告质粒,利用同源重组的原理,使gfp整合入肺炎链球菌基因组中,建立体内研究肺炎链球菌基因表达的荧光报告系统,并用荧光激发、生物学特征和生理活性测定等实验手段进行评价,证实这一肺炎链球菌荧光融合表达系统可在体内外报告肺炎链球菌的毒力基因表达,为进一步在体内分析和鉴定肺炎链球菌毒力因子的功能奠定基础。     

肺炎链球菌粘附和毒力因子A研究进展

肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）普遍定植于呼吸道,是人类重要的侵袭性病原菌之一,是社区获得性肺炎、中耳炎、脑膜炎、菌血症、鼻窦炎的主要病原菌。肺炎链球菌粘附和毒力因子A（pneumococcal adherence and virulence factor A,PavA）是肺炎链球菌早期感染和侵袭过程中关键的毒力因子。体外试验表明,缺失PavA的肺炎链球菌的突变株其粘附和侵入上皮细胞和内皮细胞的能力明显下降。作为一种保护性抗原,其诱导的细胞和体液免疫可以有效的抵抗肺炎链球菌的感染,是肺炎链球菌新一代疫苗的候选蛋白。但是,PavA在肺炎链球菌与人肺上皮细胞交互对话中作用机制的研究尚属空白,本文就肺炎链球菌粘附和毒力因子A得最新研究进展作一综述。     

中国科技大学有关肺炎链球菌的新发现

<正>中国科技大学的研究人员讨论了得自肺炎链球菌的Spr1345的黏蛋白结合结构域的晶体结构,来源于肺炎链球菌R6的Spr1345表面蛋白是一种22 kD黏蛋白结合蛋白(MucBP),这种蛋白涉及到在人肺和呼吸道的黏附和定植。它是由黏蛋白结合结构域(MucBD)和富含嘌呤结构域(PRD)所构成,其     

肺炎链球菌去信号肽脂蛋白PsaA锌离子结合特性的初步表征

肺炎链球菌是细菌性肺炎的主要病原体。PsaA是各种肺炎链球菌共有的遗传保守的特异性表面金属结合脂蛋白。通过PCR扩增肺炎链球菌D39不含信号肽的PsaA基因片段,将其通过T4连接酶连接至含6His标签的表达载体PBAD/HisA中,转化表达宿主大肠杆菌Top-10后用L(+)-阿拉伯糖诱导重组蛋白的表达。重组蛋白经亲和镍柱纯化以后,用外切酶-重组肠激酶(REK)去除6His标签。感应偶合电浆质谱(ICP-MS)测得纯化的PsaA蛋白以1:1比例结合金属锌离子。进而,通过圆二色谱法分析金属离子的结合对蛋白二级结构中α-螺旋和β-片层含量的影响,荧光光谱研究蛋白结合锌离子的解离常数及结合当量,为进一步研究该蛋白在体外的金属结合特性及细菌的金属运输及毒力机制提供理论基础。     

肺炎链球菌假想蛋白SPD0873的表达纯化及保守性分析

目的通过构建原核表达载体,获得纯化的肺炎链球菌S．pn重组假想蛋白SPD0873,并制备多克隆抗体,进一步分析其在常见S．pn菌株中的保守性。方法分离培养D39型肺炎链球菌,获取其基因组DNA。利用PCR方法扩增去除信号肽的spd0873序列,采用基因体外重组法将spd0873序列克隆到原核表达载体pET-32（a）内,测序鉴定。将重组质粒转化到E．coli Rossetta（DE3）中,经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的SPD0873重组蛋白,经Ni—NTA树脂纯化后,获得的重组蛋白用SDS—PAGE和Western印迹鉴定;将鉴定后纯化的蛋白免疫BALB／C小鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA检测多克隆抗体的效价,Western印迹方法分析多克隆抗体的特异性,同时,鉴定该蛋白在5种常见肺炎链球菌分离株的保守性。结果克隆的spd0873序列与GenBank中的数据相符,并实现了SPD0873蛋白高水平的可溶表达。纯化蛋白免疫BALB／C小鼠获得高滴度、高特异性的的多克隆抗体,Western印迹验证SPD0873蛋白在5株常见肺炎链球菌菌株中均有表达。结论成功制备了高滴度、高特异性的SPD0873蛋白多克隆抗体,同时,检测到SPD0873蛋白在5种常见的肺炎链球菌菌株中非常保守,为研究该蛋白的生物学功能及肺炎链球菌多肽联合疫苗的研制奠定了基础。     

肺炎链球菌溶血素衍生物PlyD1的安全性和免疫原性

背景：基于保守蛋白抗原的肺炎球菌疫苗具有提供扩大的抵抗肺炎链球菌的保护作用的潜力。     

肺炎链球菌致病机理的最新研究进展

肺炎链球菌致病过程包括粘附 ,炎症反应 ,细菌产物的细胞毒作用。阻止肺炎链球菌粘附到宿主细胞受体和定植在粘膜表面 ,是预防其感染的最有效的途径。综述了肺炎链球菌粘附过程的最新研究进展和肺炎链球菌毒力因子及其可能的致病机理 ,对研制新一代疫苗 ,预防和治疗肺炎链球菌感染有重要意义。