外源性IL-18基因对C6胶质瘤细胞体内致瘤抑制作用

将转IL-18基因的C6/IL-18细胞接种于SD大鼠颅内,以接种C6细胞为对照.致瘤21天后磁共振成像下测量肿瘤大小.然后行病理切片,HE染色观察肿瘤组织形态学变化;应用免疫组织化学技术检测增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA).应用流式细胞(flow cytometer,FCM)技术检测细胞周期和细胞凋亡的改变.以及记忆性T淋巴细胞抗原CD45RO表达.结果显示,C6/IL-18细胞成瘤体积为(49.3±11.5)mm3;亲代C6细胞成瘤体积为(232.6±22.3)mm3,二者差异明显.HE染色观察可见C6/IL-18细胞形成的肿瘤区内少见病理性核分裂相:瘤组织内肿瘤血管较亲代C6细胞明显减少.C6/IL-18肿瘤细胞核PCNA表达为 :对照组为 .FCM检测结果表明,C6/IL-18细胞形成的肿瘤S期和G2/M细胞明显减少,细胞凋亡程度明显增加:记忆型T淋巴细胞明显增多.表明IL-18基因转染后可直接抑制C6细胞增殖.并可能通过分泌IL-18激发机体免疫系统应答反应、抑制肿瘤血管生长、降低C6胶质瘤细胞的体内致瘤性.     

加压素片段类似物对C6细胞生长的影响

本文采用显微镜观察和逐个细胞突起长度测量及ＭＴＴ等方法研究了添加肽对无血清培养的Ｃ８细胞生长的影响：在培养早期（９－３６ｈ）,１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ的ＡＶＰ、ＮＬＰＲ或ＺＮＣ（Ｃ）ＰＲ等都能刺激生长;同浓度的ＯＸＴ或ＺＤＣ（Ｃ）ＰＲ在起始时（９－１７ｈ）无明显影响,但稍后（３６ｈ）显示抑制作用。ＭＴＴ染色法分析的结果指出：神经肽促生长作用主要表现在细胞生长前期（１７ｈ）并且是肽浓度依赖的,ＺＮＣ（Ｃ     

强啡肽A1—13对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响

目的和方法：探讨脑水肿发病的细胞机制,采用[^3H]OMG摄取的方法测定细胞含水量,观察DynA对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响。结果：①给予0.5,1.0,10.0mmol/L的谷氨酸作用1h均可引起细胞的含水量增加;②DynA可显著降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠C6胶质瘤细胞含水量;③κ阿片受体拮抗剂nor-BNI可阻断DynA1-13降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠C6胶质瘤细胞含水量的作用。结论：谷氨酸可诱导大鼠C6胶瘤细胞肿胀;DynA1-13可能过激活κ阿片受体抑制谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀。     

HPV18-E6基因SiRNA对喉癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨小分子干扰RNA（SiRNA）对喉癌细胞系Hep-2细胞中人乳头状瘤病毒HPV18型E6基因mRNA表达的干扰作用。方法：用Ambion公司pSilencer4,1CMV构建针对HPV18-E6基因的SiRNA真核表达载体,以携带HPV18-E6基因的人喉癌Hep-2细胞系为靶细胞,通过阳离子脂质体法转染SiRNA表达载体。RT-PCR分析转染后细胞HPV18-E6基因表达：Westernblot试验观察干涉后HPV18-E6蛋白的表达;流式细胞仪分析细胞增殖周期的改变。结果：成功构建了人HPV18-E6基因的RNA干涉真核表达载体psil-svvE6,并在Hep-2细胞中有效地发挥了对HPV18-E6基因表达的干涉作用。细胞周期阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡。结论：HPV18-E6基因在喉癌细胞Hep-2生长中可能起到非常重要的作用,有望成为逆转喉癌细胞永生化的靶点。     

大鼠C6脑胶质瘤模型建立及X刀治疗的护理

目的总结大鼠C6脑胶质瘤模型制作及X刀治疗的护理经验。方法协助医生对20只大鼠制作脑胶质瘤模型及给予X刀治疗,在术前、术中、术后积极实施相关护理对策。结果大鼠C6脑胶质瘤模型制作成功率80％,X刀治疗成功率100％,治疗后的存活率为86％。结论熟悉大鼠脑胶质瘤模型制作及X刀治疗的技术,加强术前、术中、术后的配合有助于提高实验的成功率,提示熟练的护理配合在动物模型制作及X刀治疗中具有重要的意义。     

影响C6大鼠神经胶质瘤细胞表达HSP68的因素分析

为了解各种因素对细胞热休克反应的影响,本文用Western印迹、蛋白水解酶活性电泳(renatured electrophoresis)、密度测定等方法分析了营养、血清、细胞密度等对C_6细胞合成热休克蛋白68(HSP68)量和时间的作用。结果表明,在一定血清浓度范围内(≤30％),培养基含的血清浓度越高,细胞启动HSP68合成的时间越长;营养条件的差异影响HSP68合成的量和时间;不同生长阶段的细胞热休克反应有差异,生长到稳定期的细胞是研究细胞应激反应的较合适材料。     

不同的基质表面形貌对细胞生长行为的影响

在细胞体外培养中,基质的表面形貌特征是影响细胞行为的一个重要因素。在微米尺度范围内本文研究了几种不同几何轮廓的脊／沟状形貌结构和不同间距的柱状体对鼠C6神经胶质瘤细胞生长的影响。脊／沟状形貌结构诱导细胞趋向生长,不同的几何轮廓对细胞行为的影响存在差异。柱状体间距影响细胞的贴壁和铺展,进而影响细胞的生长行为;大的间距不利于细胞生长,当间距很小时,柱状体截面的几何轮廓影响细胞的行为。     

强啡肽A_(1-13)对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响

目的和方法 :探讨脑水肿发病的细胞机制 ,采用 [3H]OMG摄取的方法测定细胞含水量 ,观察DynA对谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀的影响。结果 :①给予 0 .5 ,1.0 ,10 .0mmol/L的谷氨酸作用 1h均可引起细胞的含水量增加 ;②DynA可显著降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠C6胶质瘤细胞含水量 ;③κ阿片受体拮抗剂nor BNI可阻断DynA1-13 降低谷氨酸诱导肿胀的大鼠C6胶质瘤细胞含水量的作用。结论 :谷氨酸可诱导大鼠C6胶质瘤细胞肿胀 ;DynA1-13 可通过激活κ阿片受体抑制谷氨酸诱导的大鼠C6胶质瘤细胞肿胀     

腺病毒介导的人ING4基因诱导C6鼠胶质瘤细胞凋亡

目的：研究肿瘤抑制基因人ING4 (inhibitor of growth family, member 4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法：将携有绿色荧光蛋白（GFP）腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His（由本科室构建）分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化,抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果： Ad-hING4-His感染C6细胞后,RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显着抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测有明显AP峰,凋亡率达18.1％。结论：hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显着抑制C6细胞的增殖和生长。     

精氨酸加压素C端片段（4—8）对C6神经胶质瘤细胞胞内 …

ＺＮＣ（Ｃ）ＰＲ是精氨酸加压素（ＡＶＰ）在脑内的天然酶解产物,具有促进学习记忆的中枢效应。为了进一步阐明其作用的分子机制,以Ｃ６神经胶质瘤细胞为模型,用荧光染料Ｆｌｕｏ３负载细胞,用激光共聚焦显微镜观察胞内自由钙离子的变化情况。民现ＺＮＣ（Ｃ）ＰＲ能促进胞内钙离子的升高,这种作用是剂量依赖的,并能被其拮抗剂ＺＤＣ（Ｃ）ＰＲ所抑制,胞外钙离子对该升高没有影响。     

MicroRNA-146a抑制胶质瘤细胞增殖的研究

目的：检测胶质瘤中miR-146a的表达水平,并研究miR-146a对胶质瘤细胞增殖的影响。方法：应用实时定量PCR的方法检测胶质瘤组织和癌旁组织中miR-146a的表达水平,采用脂质体细胞转染miRNA模拟物的方式过表达miR-146a,MTT法检测转染后细胞的增殖率,利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因。结果：miR-146a在胶质瘤组织中表达明显降低（P〈0.01）,相对表达水平为癌旁组织的35%,细胞转染miR-146a模拟物后,miR-146a表达明显增加,癌细胞增殖率明显降低（P〈0.01）,仅为原细胞的47%。Notch1基因是miR-146a影响胶质瘤细胞增殖活力的可能靶基因。结论：miR-146a可能通过抑制Notch1基因的表达调控胶质瘤细胞的增殖。     

抑瘤基因NGX6对鼻咽癌细胞株HNE1细胞生长的影响(英文)

鼻咽癌是我国南方多发恶性肿瘤 ,它的发生发展与遗传因素密切相关 .采用定位候选克隆策略在 9p上克隆出一个候选抑瘤基因 ,命名为NGX6 .为了进一步研究它的功能 ,将NGX6基因的全长cDNA片段亚克隆至pcDNA3.1(+ )的表达载体中 ,通过脂质体转染入鼻咽癌细胞系HNE1中 ,Northern杂交方法筛选高效表达NGX6的细胞株 ,并借助细胞生长曲线、软琼脂糖集落形成实验、裸鼠体内接种实验和流式细胞仪对转染细胞的生物学行为进行了检测 .结果显示 ,转染了NGX6基因的HNE1细胞的生长速度明显减慢 ,在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降 (P〈0 0 5 ) ,裸鼠体内成瘤的时间较对照组明显延长 ,瘤体的大小和重量较对照组明显减少 ,流式细胞仪检测发现细胞的凋亡率无明显变化 .为了明确NGX6蛋白在细胞中发挥作用的部位 ,进一步将NGX6的开放阅读框架完整正确地克隆到pEGFPC1的荧光载体中 ,转染到COS7细胞中 ,用荧光显微镜观察细胞中荧光的分布 ,发现荧光主要分布在细胞浆中 ,说明NGX6蛋白可能是一种胞浆蛋白 .该研究表明 ,NGX6在NPC的发生发展中起重要作用 ,为全面阐述NGX6的功能提供重要的信息 ,为进一步的功能研究打下基础     

核糖核酸酶抑制因子对H_2O_2损伤的大鼠神经胶质瘤细胞系C6的影响

核糖核酸酶抑制因子 (ribonucleaseinhibitor,RI)是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白 .为了进一步了解RI的功能 ,根据RI分子结构富含巯基的特点 ,研究了RI对过氧化氢(H2 O2 )损伤的大鼠神经胶质瘤细胞 (C6 )的影响 .用不同浓度的H2 O2 分别作用于转染有RIcDNA并且RI过表达的C6细胞和正常C6细胞 ,对比损伤前后 2者的细胞存活率、LDH漏出量、细胞内GSH和MDA含量差别 ,以及细胞内抗氧化酶类GPX、CAT和GST活性的差别 .结果表明 ,与正常C6细胞相比 ,RI过表达的C6细胞在H2 O2 作用下存活率高 ,LDH漏出量、MDA含量明显减少 ,而细胞内GSH较多 ;RI过表达的C6细胞在损伤前后均表现出更强的CAT和GST活性 .提示RI具有抗氧化功能 ,能够减轻H2 O2 所致的细胞过氧化损伤 .     

肝细胞生长因子基因转染对人淋巴瘤细胞凋亡的影响

探讨肝细胞生长因子（HGF）基因转染人淋巴瘤细胞系Raji细胞后,拮抗足叶乙甙（VP－16）诱导细胞凋亡的研究。将三种细胞：未转染Raji细胞、空载体pVITR02－mcs转染细胞和HGF基因转染细胞,分成正常对照组和经vP－16处理的药物组。采用Westernblot法验证HGF蛋白的表达：CCK－8法检测诱导Raji细胞凋亡的药物浓度;通过透射电镜、流式细胞术、吖啶橙（A0）染色、苏木精咿红（HE）染色等方法观察Raji细胞的凋亡情况,并进行相关分析。结果显示：Westernblot法验证了HGF蛋白质的表达;CCK．8法显示100μg／mL足叶乙甙可明显抑制Raii细胞增殖;透射电镜下可发现典型的凋亡细胞;流式检测结果表明：给药组与正常组相比,三组细胞的凋亡率明显升高（P〈0．01）,提示VP－16具有诱导细胞凋亡的作用：但给药组间：HGF基因转染组凋亡率明显低于未转染组（P＜0．05）和空载体pVITR02．mcs转染组（P〈0．05）,提示嬲F基因转染可明显抑制VP-16诱导的Raji细胞的凋亡,AO染色和HE染色结果也同样提示HGF具有拮抗VP－16诱导的细胞凋亡效应。     

重组人IL-18-EGF的双顺反子表达及其对NK细胞和肝癌细胞的影响

构建重组人IL-18-EGF肿瘤靶向分子双顺反子原核表达系统,研究重组人IL-18-EGF融合蛋白对人自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）和人肝癌细胞（SMMC-7721）的影响。构建重组人IL-18-EGF原核双顺反子表达系统pET28a（＋）-proIL-18-EGF-Caspase-4/BL21,重组蛋白经纯化后,作用于NK细胞,应用CCK-8法和ELISA试剂盒分别检测NK细胞的增殖情况和IFN-γ的分泌量。Cy3荧光标记IL-18-EGF检测融合蛋白与肿瘤细胞表面EGFR的结合情况。IL-18-EGF与NK细胞共同孵育24 h后,取培养上清液作用于人肝癌细胞SMMC-7721,分别使用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测IL-18-EGF对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。实验结果显示：重组人IL-18-EGF能加快NK细胞的增殖,促进NK细胞分泌IFN-γ;IL-18-EGF能与肿瘤细胞表面EGFR特异性结合;细胞划痕实验中,重组人IL-18-EGF组空白区域的抗填充能力高于对照组;Transwell小室实验中,12,24,48 h时IL-18-EGF组细胞穿膜数分别为94.6±2.9、101.8±4.0和116.2±4.5,均显著低于相应时间的对照组（分别为128.6±8.5、133.0±7.5和138.8±5.4）（P〈0.05）。以上结果表明,IL-18-EGF对人肝癌细胞SMMC-7721的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用,能提高机体的免疫能力,有可能作为辅助药物运用于肝癌的治疗。     

激光诱导的基因转染方法研究

基因转染是研究基因表达、结构和功能的主要实验手段。本文对现有的转染方法进行了分析,并重点探讨了两种激光诱导的基因转染新方法：激光产生冲击波和激光照射纳米微粒的方法,并提出了改进的实验方案。这两种方法都是通过改变细胞质膜通透性实现外源基因的导入,其最大的优点就是对细胞没有损伤。文章的最后说明了基因转染在基因疗法的应用。     

抗酶1基因转染对HeLa细胞增殖及细胞周期的抑制作用

研究抗酶(antizyme)1对人宫颈癌HeLa细胞增殖与细胞周期的影响,并分析抗酶1对细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达影响.采用定点突变技术,将抗酶1的frameshift位点缺失,随后将突变基因重组至真核表达载体pEGFP-N1中,鉴定后转染HeLa细胞.通过MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术分析抗酶1对细胞周期的影响.RT-PCR和Western印迹检测抗酶1转染对细胞周期蛋白 D1基因表达的影响.酶切结果显示,抗酶1突变基因成功克隆至pEGFP-N1中.成功转染HeLa细胞后,检测结果显示,抗酶1能够减慢HeLa细胞增殖速度,并使细胞停滞于G₀/G₁期,细胞周期蛋白D1基因的表达同时受到抑制.实验说明,抗酶1基因能够抑制HeLa细胞增殖,通过降低细胞周期蛋白D1的表达阻滞细胞周期.     

Fra-1对大鼠C6胶质瘤细胞侵袭转移能力的影响

目的：观察Fra-1对C6胶质瘤侵袭转移能力的影响。方法：以大鼠C6胶质瘤细胞为研究对象,Fra-1siRNA通过脂质体转染C6,realtimeRT-PCR和westernblot法检测C6细胞中Fra-1的表达、Elisa法检测细胞培养上清中MMP一9的含量,Transwell小室观察C6细胞的转移侵袭能力。结果：干扰Fra-1后能降低C6细胞中Fra-1的表达,显著降低C6细胞中MMP-9的含量,降低C6细胞的转移侵袭能力。结论：干扰Fra-1能抑制C6细胞的转移侵袭。