疫苗

922901在杂种病毒辐粒表面表达口蹄痊病毒外宪蛋白抗原决定签单体或二聚体的修饰的活的感染性牛.炎病拜度苗〔英〕/K it,5.…f Areh.virol一i。。1,120(i~2)。一i~17〔译自DBA,1992,11(s), 92一01373〕 将化学合成的编码牛生长激素信号肤序列和口蹄疫病毒(FMDV)VPI抗原决定基序列单体或二聚体擂入到感染性牛鼻炎(IRV)主要糖蛋白g皿基因中,构建了修饰的减活的牛感染性鼻炎杂种病毒疫苗。外源DNA序列擂入到IRVg皿编码序列的N一末端上,并受IRV 9111启动子控制。由含单体和二聚体FMDV抗原决定基序列插入的杂种病毒分别选择编码IRVg…     

动物遗传工程

9俘1204遗传工程有助于防治病害〔会,英〕/Ward,K.A。…了Feedstuffs一2993,65(39)一14,16~17〔译自DBA,1993,12(22),93一12904〕 讨论了遗传工程技术在防治家畜疾病中的潜在价值。提出了遗传工程改良动物产率所需的步骤: (1)鉴定出获得理想表型所需特性的蛋白;(2)分离出编码相关蛋白的基因;(3)修饰基因在宿主动物中表达;(4)修饰基因转移到宿主;(5)鉴定和评估基因在转基因动物中的表达;(6)建立育种工程。澳大利亚的CSIRO应用这些原理:通过N宕eotia九a to哪e儿tos‘form‘5 JL丁质酶cDNA在转基因绵羊中的表达生产抗肉蝇绵羊,胧氨酸生…     

医药其它

922949在特定杆状病毒表达系统中生产具生物学活性的跳胺化eeeropin〔英〕/Andersons,H.…2 Bioe-liem.J一1091,250,Pt.1一219~224〔译自DB-A,1992,11(3),92一01388〕 构建了表达质粒pVL941一22一ceoA,其中含有:组织血纤维蛋白溶酶原激活子(t一PA)的信号肤、从金黄色葡萄球菌蛋白一A(22)衍生的合成性抗体结合部分、编码cecropin一A天然部分的合成片段(附加C末端甘氨酸密码子)。将此融合基因转入首着银纹夜蛾核多角体病毒载体基因组,再用重组病毒感染草地贪夜蛾Sfg细胞。对从细胞培养基获取的蛋白进行SDS一PAGE和blotting检测。采…     

利用线性表达框高通量表达人源单克隆抗体

目的:建立不通过克隆步骤高通量表达来源于人单个B细胞的抗体轻、重链基因的方法。方法和结果:PCR扩增3个末端重叠的DNA片段,即1CMV启动子和编码抗体引导区序列的片段;2抗体Ig G1重链恒定区序列和牛生长激素(BGH)poly(A)信号序列,轻链Igκ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列,轻链Igλ恒定区序列和BGH poly(A)信号序列;以及3抗体基因可变区序列V_H、V_κ或V_λ。3个片段通过重叠延伸PCR构建全长线性片段即线性表达框,将此来源于人单个B细胞的配对的抗体轻、重链线性表达框共转染293E细胞,72 h收集上清检测到表达的抗体。结论:构建的抗体基因线性表达框是无须克隆,快速高通量表达抗体基因进行筛选分析的策略。     

基因工程

890690制备棒状病毒表达载体的方法〔专,英〕/Smith,G.E.…/US Patent US4745051.Pub。17.05.88.ApPI.US498s5a,filed 27.05.83〔译自CBA,1955, (8),3152〕 酶切棒状病毒DNA,产生一个含多角体蛋白启动子以及充足的两翼序列(以利于同源重组)的棒状DNA。将此片段插人到一种克隆载体中,并将一外源基因置子该启动子的下游,形成重组穿梭载体。(主璋瑜)890691链霉菌分泌载体仁专,英〕/USPatent US 4745056,.Pob.17.05.38,Appl.US 66384母,f呈lod 23一0.84〔译自CBA,1988,(8),3153〕 能在链霉菌(s考呷户加呷馏。中产生所需蛋白的DN…     

基因诱变、重组、克隆

922825使用诬式亲和融合法从大肠杆菌中经蛋白水解得到的盆组蛋白的祖定性〔英〕/Murby,M.…,Bi-oteehnol.Appl.Bioehe。一二1991,14(3)一336~346〔译自DBA,1992,11(s),92一0122‘]一31一本技术包括:构建一些融合基因,‘已们编码一些目标蛋白,如人的原胰岛素(Pl)、大鼠蛋白-二硫化物异构酶(PDI)硫氧还蛋白同源区1等 (即蛋白A的IgG一结合蛋白(22)和蛋白G的白蛋白结合区(BB)间的融合),在IgG一Sephar-ose上纯化。对ZZPI(质粒pRIT37)和ZZPIBB (质粒pRIT38)进行SDS一PAGE和Western印迹揭示,产生的Pl在体内是稳定的。从大肠杆…     

DNA分析与扩增

921221编码区蛋白的分子序列精确度及分析〔英〕/States,D.J.…1 Proe.Natl.Aead.Sei.U.SA厂1991,55(15)一5518~5522〔译自DBA,1991,10(18),91一10287〕 误差对分子序列数据的信息量的影响取决于用于有关数据的分析范例。测定了核酸序列误差对指定蛋白(含有相应蛋白序列)序列成行能力的影响。为了探索一个未翻译核酸序列中与目标肤序列类似的编码区,使用一种两步Bayesian算法。这样,通过对己知遗转密码和数据易变性的考虑,可提出某一特定氨基酸编码在某一特定位点的假设。再排出可能的序列,从而得出每个位点相对于每一个氨基酸进行编…     

基因工程

891040降低了胞外蛋白水解酶活性的枯草杆菌菌株;获得菌株的方法以及采用上述菌株分泌蛋白的方法〔专,英〕/Furutani,Y.…/UK Patent ApPI。GB 2198439.Pub.15。06。88。Appl.GB 8723033,filed02.10.86〔译自CBA,1988,(9),3724〕 将刺激胞外蛋白水解酶水平的基因引人到枯草杆菌菌株FERM BP一108。染色体DNA中,从而在回收时可进一步降低胞外蛋白水解酶残留量。采用编码所需蛋白的重组质粒转化所得菌株;该蛋白可大量表达并积累于培养基中,从而易于收集。例如,经处理后的枯草杆菌MT一430(携有重组DNAph GH427,编码人生长激素)分…     

疫苗

940236在大肠杆菌中表达的脑膜炎双球菌运铁蛋白结合的蛋白一1是表面曝露的运铁蛋白并和人运铁蛋白结合〔英〕/Palmor,H.M.…/FEMS Mierobiol.Let七一1993,110(2)一139~146【译自DBA,1993,12(16),93一09208〕 在噬菌体补Zapll中建立了脑膜炎双球菌SD(B15pl.16)DNA的基因库,根据与运铁结合蛋白一1(TBP一1)的前21个N一末端氨基酸密码子为基础的63bp DNA探针杂交证明,含编码运铁结合蛋自DNA的克隆为一种疫苗候选物。含最天的插入片段 (2 2.3kb)的质粒pxl.6的定序证明,所有的基因间DNA(贯穿运铁结合蛋白一2基因3产端的tbp一1上游)…     

质粒研究与载体构建

921209噬菌体T7第10基因翻译增强子(TREN)的化学-酶促合成及其构件的功能〔俄〕/Gureyich,A.1.…1 Bioorg.khim一1991,17(5)一e47~652〔译自DBA,1991,10(18),91一10247〕 为了这种分析,通过化学一酶促合成法制备了TREN完整序列及其近端和远端序列。用Bam Hl和E。。Rl二种限制酶将合成序列克隆到多拷贝质粒pFPC10中。获得的新质粒用千检测TREN近端区增强翻译的能力。编码人白细胞介素一3的人工基因(克隆于pFPC10中,不含TREN的一部分)在大肠杆菌中的表达很低。引入完整的TREN序列,使人白细胞介素一3的产量大大升高。取代pTE3 …     

疫苗

924009异源基因在牛分枝杆菌BCG中的表达:抗HIV一1Nef蛋白细饱反应的诱导〔英〕/Winter,N.…了Geue一1991,109(i)一47~54〔译自DBA,1992,11(8),92一04359〕 为了用牛分枝杆菌菌株BCG作保护性抗原载体,将编码Nef蛋白的H工V一病毒一1基因克隆于大肠杆菌一分枝杆菌穿梭载体(质粒pRR3)几中并导人BCG。质粒pRR3含一个在分枝杆菌中复制和保留必需的质粒pALSOo。片段、转座子Tn 903卡那霉素抗性基因和大肠杆菌复制原。n“f_基因在含白色链霉菌(St,epto哪歹ees albos)groES/groELi操纵子的启动子和合成核糖体结合位点的DNA表达框架(…     

棉铃虫核型多角体病毒sod基因在大肠杆菌中的表达

用PCR方法从棉铃虫(Helicoverpa armigera)单粒包埋型核型多角体病毒(HaSNPV) C1株基因组中扩增sod基因编码区,克隆到pGEM-T-easy vector,测定了核苷酸序列.将基因编码区克隆到原核表达载体pETblue2,构建了含表达质粒pETblue2/HaSNPV SOD,转化大肠杆菌DE3(BL21)进行IPTG诱导表达. SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细胞总蛋白的37%.邻苯三酚法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物校正酶活力单位为694U/mg.     

棉铃虫核型多角体病毒sod基因在大肠杆菌中的表达

用PCR方法从棉铃虫(Helicoverpa armigera)单粒包埋型核型多角体病毒(HaSNPV) C1株基因组中扩增sod基因编码区,克隆到pGEM—T—easy vector,测定了核苷酸序列。将基因编码区克隆到原核表达载体pETblue2,构建了含表达质粒pETblue2／HaSNPV SOD,转化大肠杆菌DE3 (BL21)进行IPTG诱导表达。SDS—PAGE分析表明SOD的表达量约为细胞总蛋白的37％。邻苯三酚法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物校正酶活力单位为694U／mg。     

医药其它

921368由变铅资链娜菌分泌抗生蛋白链菌素〔俄〕/Bol。-tin,A.P.…1 Antibiot.Khimioter一1091,36(6)一s~12[译自DBA,i。。1,10(25),91一10410〕 构建T一种bireplieon载体质粒pVGi4o,其中含有编码dagA基因信号肤的表达单位。将质粒pAPS中的阿维T链霉菌(“,e尹￡o仍犷eesa”￡d‘-耐落、抗生蛋白链菌素基因克隆到质粒pVG140上,获得重组质粒p VG141和pVG142。用它们转化变铅青链霉菌(5.1畜公落da.‘)Tk64,以硫链丝菌肤抗性为基础,选择含有质粒的克隆。重组菌株能够分泌抗生蛋白链菌素。检测了培养基成分和碳源对该抗生素的影响。5.1…     

鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒的构建

生长激素(GH)是动物垂体前叶分泌的一种多肽类激素.应用分子重组及PCR等技术,构建了一种鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒pOsGH153,使编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列克隆在大肠杆菌分泌型表达载体PIN-Ⅲ-ompA内,直接位于编码大肠杆菌外膜蛋白A信号肽序列的下游,在Lpp-Lac杂合启动子控制下,经IPTG诱导,分子量约23 000的鲑鱼生长激素在大肠杆菌中获得高效表达,该产物具有天然鲑鱼生长激素的免疫活性,直接分泌到细胞周质,而信号肽被自动剪除.     

利用非经典分泌蛋白质实现脂肪酶A的分泌表达

【目的】以枯草芽孢杆菌脂肪酶A(Lipase A)为报告蛋白,尝试利用4种非经典分泌蛋白质及其前50个氨基酸作为分泌信号以实现其分泌表达。【方法】我们扩增了脂肪酶A的编码基因和非经典分泌蛋白质的编码序列,构建了8种针对脂肪酶A的分泌表达载体,并转化至枯草芽孢杆菌WB800菌株,通过测定重组菌株的酶活、利用蛋白质电泳和免疫印迹等技术检测脂肪酶A的分泌情况【结果】以Pdh A的氨基酸序列和Sod A、Eno的前50氨基酸序列作为分泌信号的重组菌株较好的实现了脂肪酶A的分泌表达。【结论】部分非经分泌蛋白质的编码基因或其前50个氨基酸序列能够引导脂肪酶A分泌至细胞外。     

白鹅催乳素基因的克隆及诱导表达条件的优化

摘要: 运用RT-PCR方法, 从白鹅脑垂体总RNA中扩增得到了催乳素(Prolactin, PRL)基因编码区序列cDNA, 并将其克隆到pMD18-T载体上。DNA序列分析表明, PRL cDNA包括终止密码子在内的长度为690 bp,编码230个氨基酸残基的蛋白质, 与皖西白鹅的有所差异, 二者碱基同源性在99.57%, 氨基酸同源性达99.56%。将PRL基因编码区序列cDNA定向克隆到表达载体pET-32a (+)中, 构建表达质粒pET-32a(+)-PRL。该质粒的BL21 (DE3)转化菌在IPTG的诱导下可表达PRL基因融合蛋白, IPTG终浓度1 mmol/L, 37℃, 诱导4 h表达量最高, 表达量约占菌体总蛋白的28.96%。     

人IL-6和TNF突变体重组融合蛋白表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

本文利用PCR技术,对人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因进行了改造,并将其与人白细胞介素-6(hIL-6)成熟肽编码区cDNA进行融合,构建了5′IL-6-TNF△融合蛋白的表达质粒pBVIL6-TNFA△。DNA序列分析证明,PCR扩增片段核苷酸序列与引物设计序列及相应的cDNA序列完全一致;重组子用限制性内切酶酶切鉴定,含有正确的IL6-TNF△融合cDNA片段;表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,分子量约为37kD,与预计的相符合;生物学活性分析初步表明,该融合蛋白具有抗肿瘤活性。     

克氏光唇鱼线粒体基因组测定及光唇鱼属的系统发育分析

根据侧条光唇鱼(Acrossocheilus parallens)线粒体基因(mt DNA)序列设计引物,采用引物步移和PCR扩增产物测序,获得了克氏光唇鱼(A.kreyenbergii)的mt DNA全序列。结构分析表明,克氏光唇鱼mt DNA为首尾闭合的环状基因,全长16 596 bp,编码37个基因,包括13个蛋白编码基因、22个t RNA基因、2个r RNA基因和两段非编码区(D-loop和轻链复制起点OL),碱基组成具有明显的A+T偏好和反G偏倚现象。13个蛋白编码基因中,除COⅠ的起始密码子是GTG,其余基因的起始密码子均为ATG;终止密码子包括完全的终止密码子TAA(38.46%)和TAG(7.69%),不完全的终止密码子TA(15.38%)和T(38.46%)。在D-loop区的811~837 bp区间发现了一段"TA"短串联重复序列。从蛋白编码基因所包含的信息量、变异位点和变异率看,ND5、ND4、COⅠ和ND2最适合作为光唇鱼属种间系统发育分析的分子标记。采用贝叶斯法利用13个蛋白编码基因所构建的系统发育树显示,光唇鱼属和白甲鱼属(Onychostoma)的24种鱼类各自没有聚为单系群,相互间不能明确区分。     

肾综合征出血热病毒R22株核蛋白基因的克隆、序列分析及其表达

为研究肾综合征出血热病毒疫苗侯选株R22核蛋白的结构与特性,应用逆转录PCR扩增了R22编码区基因,并将扩增产物克隆于pET-3a表达质粒,测得R22株S片段编码区序列为1 290个核苷酸.比较分析表明与Seoul型同源性高达96.2%,而与Hantaan型同源性仅为71.0%,与用血清学分型的结果一致.将克隆的pET-R22NP 转化到BL21后,IPTG诱导得到较高效的表达,产物纯化后进行Western blot分析,结果表达的NP仅与NP蛋白特异的单克隆抗体A35和3D9反应,而与G2蛋白特异的3D8不反应.表达的产物为汉坦病毒的诊断提供了特异性抗原.