志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究——Ⅰ.体外回复突变率

南斯拉夫Mel氏应用志贺氏菌链霉素依赖菌株(Streptomycin-dependent Shigella strains,以下简称S~d)制备口服痢疾活菌苗进行预防菌痢的现场效果考核,取得满意的结果。目前,国内已引进南斯拉夫福氏志贺氏菌2a(Shigella flexneri 2a)S~d菌苗株,并选育出国内常见流行型福氏志贺氏菌1b、3a、4a及宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei)的S~d菌株,进行口服预防效果观察。     

痢疾活菌苗的研究

<正>细菌性痢疾是一种常见的、多发的传染病。至今尚未被人们有效地控制。自六十年代初以来,世人对痢疾活菌苗的研究进行了大量的工作,试图能有效地控制该病的发生和传播。但是,由于活菌苗的稳定性和效果等难以保证,致使目前仍未能获得推广应用。分子生物学的发展和生物工程技术的应用,使得制备遗传学稳定,无回复突变的重组活菌苗株成为可能。本文对痢疾活菌苗的研究进展作扼要的回顾和展望。 一、大肠杆菌—痢疾杆菌杂交活 菌苗实验室选择     

小鼠模型用作口服痢疾活菌苗效力指标的意义

小鼠皮下免疫、腹腔攻击模型作为验证减毒痢疾活菌苗效力的指标已沿用多年,但其能否代表痢疾菌苗的效力还有待商榷。实验选用口服痢疾活菌苗ＦＳ,以不同活菌含量来验证模型的意义。实验表明,菌体皮下免疫均能产生类似的保护效果,与活;菌含量无关,血清学试验也论证了同样观点,而人体试验表明,菌苗的保护效果与活菌数密切相关,故认为小鼠皮下免疫、腹腔攻击模型不能准确反应痢疾菌苗的保护效果。     

猪丹毒菌增菌培养基的试验

猪丹毒弱毒菌用肉肝胃膜消化汤加血培养基培养,菌数一般较低。用此培养基培养注射、口服两用的猪丹毒弱毒菌GC42号,菌液的菌数则更低,平均在39亿/毫升左右,冻干后活菌数仅有23.6亿/毫升。因此,不适于大量生产。为了提高猪丹毒弱毒菌GC42号培养液的菌数,我     

口服福氏2a及3型痢疾活菌苗预防效果现场观察报告

在毛主席无产阶级革命卫生路线指引下,在武威地区党组织的领导下为贯彻毛主席光辉的《六·二六》指示和预防为主的方针,我们于一九七六年六月二日至九月二十日,在武威县新鲜公社的杏元、新城、东沟、跃沟四个大队进行了口服痢疾活菌苗的人群效果观察,现将结果报告如下:     

貂源乳酸菌增菌培养基优化

为实现貂源乳酸菌制剂中试生产,本实验选择多种碳、氮源,通过对不同碳、氮源进行优化,明确貂源植物乳杆菌MDL1118增菌培养基配方为蔗糖5%、玉米浆干粉7.5%、番茄汁10%、无机盐0.5%、tween-800.25%。在此培养基中,37℃搅拌发酵7 h,活菌数可达到3.18×109cfu/m L,与以葡萄糖为主要碳源培养基相比,增菌效果明显。     

凝结芽胞杆菌TBC 169株对肠道致病菌的抑菌作用

目的 研究凝结芽胞杆菌TBC 169株对大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用。方法 先将大肠埃希菌、痢疾杆菌等6种菌分别进行单独培养,测定不同培养时间内的pH和活菌数,然后将凝结芽胞杆菌TBC 169株分别和致病菌进行混合培养,再测pH和活菌数,并与单独培养时的测定情况进行比较。结果 凝结芽胞杆菌TBC 169株对大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌等6种菌均有明显的抑制作用,尤其是对伤寒沙门菌和铜绿假单胞菌的抑制作用更强。结论 凝结芽胞杆菌TBC 169株对肠道致病菌有显著的抑制作用。     

大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗原液发酵条件的优化

为实现大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗中试生产,通过对大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003二级种子培养时间、盐度、培养基、接种量、补料等发酵条件的优化筛选,确定大菱鲆鳗弧菌菌株VAM003灭活疫苗发酵原液的发酵工艺条件。鳗弧菌菌珠VAM003接种于含2. 5%Na Cl的TSB液体发酵培养基,28℃振荡培养12～14 h,制备二级种子液,按发酵罐培养基总量的10%接种二级种子液,28℃补料发酵10～12 h。在该条件下鳗弧菌菌株VAM003发酵活菌数达到1. 20×1010cfu/m L,比优化前提高120%以上。     

两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗质量比较

【目的】系统比较两种不同保护剂冻干的仔猪副伤寒活疫苗(耐热苗和常规苗)质量指标,为科学评价两种疫苗质量提供参考。【方法】制备耐热苗和常规苗各3批,分别进行物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度和保存期等参数测定和比较,同时比较冻干前后的活菌存活率及耐老化性能。任选耐热苗与常规苗1批,按3×109 CFU分别口服与肌肉注射仔猪各5头,设相同条件下不免疫对照5头,30 d后静脉注射致死量猪霍乱沙门氏菌,临床观察30 d后评估疫苗的效力。【结果】耐热苗及常规苗的物理性状、纯粹性、活菌计数、安全性、剩余水分、真空度均符合现行《中国兽药典》的要求。3批耐热苗冻干菌存活率分别为88.2%、83.1%和86.4%,耐老化试验后的活菌存活率为83.6%、82.9%和88.8%;然而3批常规苗冻干菌存活率分别为52.3%、56.2%和61.4%,耐老化活菌存活率分别为58.5%、60.2%和54.7%。经37°C、7 d耐老化试验结果显示,耐热苗物理性状良好,而常规苗原有团块表面凹陷1/4-1/2。保存期结果表明耐热苗4°C有效期可达24个月,常规苗仅为9个月。仔猪免疫攻毒结果表明,耐热苗肌肉注射及口服免疫均达100%(5/5)保护;常规苗肌肉注射达80%(4/5)保护,口服达100%(5/5)保护,不免疫对照0保护(5/5死亡)。【结论】耐热苗具有较高的冻干菌存活率和良好的耐老化性能,4°C可长期保存且不影响其免疫效力。     

痢疾T32与伤寒Ty21a两价菌株的组建

用体内重组的方法,将经过多次现场考核,证明安全有效的痢疾T32无毒株和伤寒Ty21a无毒株,用前者作给体后者作受体,以两步法组建成一株既具痢疹福氏2a抗原特性又保持伤寒Ty21a株特性的两价菌株。经猴体免疫力试验,在对照组全部发病的情况下,能保护80％的免疫猴免于感染菌痢;以c,H系小鼠做免疫力试验,能保护伤寒毒菌的感染。该菌株经实验室传30代仍保持稳定,豚鼠角膜毒力试验无炎症反应,以400亿活菌口饲猴体,对101人,每人口服15 7—200亿活菌,均未发现不良反应,是一株有希望的菌苗候选株。     

高黎贡山土壤中纤维素分解菌的筛选

为了充分利用纤维素,目前国内外对纤维素酶产生菌的研究工作得到极大发展。通过新华滤纸为唯一碳源的Hutchison液体培养基和羧甲基纤维素培养基从高黎贡山土壤中分离得到10株纤维素分解菌。以6号菌为试验菌进行了试验条件和酶活测定研究,结果表明:6号菌在50℃、pH值为7、培养6 d后具有最高的CMCase、FPAase酶活。     

旱地小麦(金沙江一号)×天兰冰草杂种幼胚愈伤组织诱导及植株再生

旱地小麦(金沙江一号)×天兰冰草远缘杂交结实率较高,可达30.5%。但是,由于种子的胚乳发育不良而不能萌发,未获得杂种F_1实生苗,授粉12天后再把幼胚接种于WG附加2,4—D2mg/l、NAA0.5mg、K70.1mg/l培养基中,30—60%的幼胚诱导出愈伤组织。愈伤组织转入WG附加NAA0.5mg/l、KT0.5mg/l、Ad100mg/l、CH500mg/l的分化培养基后逐渐分化出丛生绿苗。这些绿苗经分根培养后移栽成活。正交和反交的杂种F_1再生植株形态呈中间类型,并且都表现了自交不孕等杂种特性。实验还比较了正交和反交的结实率及幼胚培养的愈伤组织诱导率,讨论了细胞质因子对杂种F_1幼胚再生能力的影响。     

酪酸梭状芽孢杆菌低成本培养基的优化

本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活菌数量,降低发酵培养基成本。通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究,得到最佳培养基组成：可溶性淀粉10/L,豆粕（中性蛋白酶水解3h）20g／L,玉米浆3g／L。用此培养基在37℃培养24h,采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数,活菌数可达8．2×10^8cfu／mL.培养基中添加K2HPO45g／L、MgSO4·7H2O0．2g／L、MnSO3·H2O0．2g/L培养32h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95％。     

利用乳清培养基生产乳品发酵剂的研究

通过测试保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌在乳清培养基中的生长能力,以期获得新型乳品发酵剂工业用培养基。试验结果表明:研制的pH值内控型乳清培养基缓冲能力强,增殖效果佳:嗜热链球菌经42℃培养3h后的活菌数达到0.29×109CFU/mL,培养6h后的活菌数达到0.42×109CFU/mL。在此基础上流加20%氨水恒定pH值,保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的活菌数达到了1.85×109CFU/mL和3.65×108CFU/mL,分别是不加缓冲液培养的7倍和3.5倍。     

Determination of an economical medium for growth of Clostridium butyricum fermentum

本文重点在于提高酪酸梭状芽孢杆菌活菌数量,降低发酵培养基成本.通过对发酵培养基中不同碳源、氮源、生长因子等进行单因素研究,得到最佳培养基组成:可溶性淀粉10 g/L,豆粕(中性蛋白酶水解3 h)20 g/L,玉米浆3g/L.用此培养基在37℃培养24h,采用高层半固体琼脂试管法对酪酸梭状芽孢杆菌进行活菌计数,活菌数可达8.2×108 cfu/mL.培养基中添加K2HPO4 5g/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、MnSO4·H2O 0.2 g/L培养32 h时,酪酸梭状芽孢杆菌芽孢转化率可达95％.     

痢疾菌苗研究进展

痢疾是全世界范围内流行的肠道传染病。随着分子生物学技术的发展,迄今已构建了新一代预防痢疾的疫苗,其中包括:具有侵袭力和不具侵袭力的单价口服活菌苗候选株;它们与大肠杆菌、伤寒沙门氏菌和血清型不同的痢疾杆菌组成的双价和三价菌苗候选株;以及以脂多糖和核糖体为基础的不经胃肠的组分菌。猴体和人体试验证明它们安全有效。预计在未来的10年中,将会有一个或几个安全有效的痢疾疫苗投放市场。     

产胆红素氧化酶菌种筛选

选出一株产胆红素氧化酶的菌种露湿漆斑菌—Myrotheciumr oriclum,简称MTR89—403。此菌产酶最适培养基:40—80％的马铃薯浸出液100ml、葡萄糖1g,pH6.0。培养条件:500ml三角瓶装100ml培养基,在27℃、200rpm旋转摇床培养84h,得到的最高酶活为1300u/L,比活为12.3u/mg蛋白。     

稳定、无抗药的痢疾福氏2a和宋内双价菌苗候选株的构建

通过体内外基因重组,将大肠杆菌粘附因子cs3基因定位整合到痢疾杆菌福氏2a疫苗株T32菌染色体的asd基因内,使asd基因灭活;将来内O抗原基因克隆至无抗药性表达载体pXL378,获得重组质粒pXL390,将其转化asd-的T32受体菌,构建成福氏2a和宋内双价苗苗株FS01。实验表明:重组质粒pXL390在不带任何抗菌素基因的情况下,在asd-的T32受体菌内是稳定的。FS01株遗传稳定,能表达两种痢疾菌的PLS-O抗原,无明显毒性作用。动物试验表明,以FS01株皮下免疫的小鼠对福氏2a和宋内有毒株的腹腔攻击有100％的保护。     

志贺氏菌链霉素依赖菌株回复突变的研究——Ⅱ.回复突变株的致病力

志贺氏菌链霉素依赖菌株(Streptomycin-dependcnt Shigella Strains以下简称S~d)能普遍地发生对链霉素不依赖的回复突变现象,并伴随有其它生物学性状的改变。目前S~d不仅作为痢疾减毒口服活菌苗株在现场人群中使用,而且布氏菌、伤寒、霍乱等其它传染病的致病菌也以此作为减毒途径而进行研究。因此,回复突变株(S~(rev))是否会发生毒力改变而返祖为有毒菌株,这在活菌苗使用中是一个共同关心的问题。本文着重研究回     

不同类型益生菌制剂在胃肠道中耐受程度的对比

目的对市场销售的几种不同类型益生菌制剂进行胃、肠液耐受程度比较,评价各益生菌制剂活菌数量,为临床选择益生菌制剂提供参考。方法选择7种菌粉及某颗粒益生菌、国产某晶球、日本产某晶球、某胶囊益生菌、圣邦步步佳肠释益生菌共12种口服益生菌产品,在崩解时限仪中加入人工胃液进行崩解试验,在0.0 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h和2.0 h时吸取上述样品并进行浓度梯度稀释,并在MRS固体培养基上培养后进行活菌计数。在上述5个时间点吸取部分益生菌-胃液混合物(针对益生菌粉末)或取出益生菌产品(针对晶球、肠溶胶囊、肠释益生菌)换人工肠液再进行40 min崩解,在MRS固体培养基上培养后进行活菌计数。结果粉末状益生菌制剂对人工胃液的耐受能力普遍较差。某颗粒益生菌、国产某晶球、日本产某晶球、某胶囊益生菌、圣邦步步佳肠释益生菌在人工胃液中不崩解。圣邦步步佳肠释益生菌在人工肠液中40 min完全崩解且活菌数峰值较高。结论圣邦步步佳肠释益生菌对人工胃、肠液耐受能力较强,且活菌数较高。