共查询到17条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
基因工程猪生长激素的分离提纯及变复性技术的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
生长激素 (Growthhormone ;Somatotropin)调节动物的生长及其体内多种代谢过程。文献报道使用猪生长激素 (PGH)可显著加快猪生长速度 ,提高胴体瘦肉率和饲料报酬[1 ] 。因为PGH潜在的巨大经济价值 ,国内外一些科研机构都研究采用基因工程的方法实现产业化生产。这些研究几乎都是采用原核表达系统 ,产物都是形成包含体[2 ,3] 。但在包含体的分离提取及变复性的方法上差别极大。 1987年KeithE .Langley在做蛋白复性时创新性地采用了包含体蛋白在高浓度的变性剂溶液中直接氧化复性的方法 ,此方法… 相似文献
2.
包含体的体外复性研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
在大肠杆菌中大量表达的重组蛋白质常常形成无活性的、不溶性的包含体。包含体经过液固分离、洗涤、变性溶解后,经过一个合理的复性过程可重新折叠成有活性的蛋白质。本文概述了常用的包含体复性方法,并对近年来出现的色谱复性法和应用一些低分子量添加剂等来提高蛋白质复性的产率做了简述。 相似文献
3.
4.
5.
包涵体复性研究进展(英文) 总被引:8,自引:2,他引:8
用基因工程技术在大肠杆菌高水平表达重组蛋白时,通常形成无生物活性的包涵体。包涵体在体外经分离、溶解与重折叠后可实现复性,表现为具有生物活性的蛋白。总结了包涵体的相关复性技术,重点介绍重折叠的最新进展情况 。 相似文献
6.
7.
包涵体蛋白体外复性的研究进展 总被引:38,自引:1,他引:38
外源基因在大肠杆菌中高水平表达时 ,通常会形成无活性的蛋白聚集体即包涵体。包涵体富含表达的重组蛋白 ,经分离、变性溶解后须再经过一个合适的复性过程实现变性蛋白的重折叠 ,才能够得到生物活性蛋白。近年来 ,发展了许多特异的策略和方法来从包涵体中复性重组蛋白。最近的进展包括固定化复性以及用一些低分子量的添加剂等来减少复性过程中蛋白质的聚集 ,提高活性蛋白的产率。 相似文献
8.
9.
重组包涵体蛋白质的折叠复性 总被引:49,自引:1,他引:48
冯小黎 《生物化学与生物物理进展》2001,28(4):482-485
综述了减少包涵体形成、包涵体分离和溶解以及包涵体折叠复性的策略及其最新进展 .详细讨论了包涵体蛋白质折叠复性的基本原则、包涵体折叠复性促进剂和包涵体折叠复性方法 相似文献
10.
重组蛋白复性技术研究进展 总被引:6,自引:0,他引:6
本对近年来重组蛋白复性技术的研究进行了评述。比较分析了液相和固相复性的各种方法,提出了复性优化的方案,介绍了在化学复性基础上发展物理复性如高压复性法的新思路。 相似文献
11.
重组蛋白瑞替普酶的分子生物学及复性研究 总被引:4,自引:0,他引:4
重组蛋白瑞替普酶是重组人组织纤溶酶原激活剂(tPA)的缺失变异体(reteplase),为第三代治疗血栓性疾病的溶栓药物,具有半衰期长、出血副作用小的特点,是有前途的新型溶栓药物。在研究开发和产业化过程中的难点是含有9对二硫键,难以提高复性率,综述了瑞替普酶的分子生物学及变性和复性研究进展。 相似文献
12.
评述了蛋白质复性研究的科学背景及蛋白质折叠机制的研究现状 ,详细介绍近年来蛋白质复性技术的研究进展 ,包括稀释添加技术和各种辅助因子的作用、固定化辅助因子应用、尺寸排阻色谱和固定化辅助因子色谱等。 相似文献
13.
重组蛋白的体外再折叠 总被引:2,自引:0,他引:2
重组蛋白的再折叠是基因工程下游处理中非常重要的环节。本文在分析了蛋白体外折叠的机制后,指出了重组蛋白再折叠的一般策略,并综述了近年来的主要新方法,包括:分析伴侣介导的再折叠去污剂协助的再折叠,反向微团中的蛋白再折叠,折叠促进剂的添加以及再折地促进二硫键形成的方法 。 相似文献
14.
本文利用荧光、紫外差光谱研究了根霉葡萄糖淀粉酶在盐酸胍变性后的复性、复活动力学。结果表明,该酶在小于4mol/L盐酸胍中变性是可逆的,其复性过程遵循一级反应方程。酶复活过程是由两个一级反应组成的复合反应,构象变化速度与复活过程中较快的反应速度相差无几,这可能是在Trp及Tyr微区的构象变化基本完成之后,酶活力恢复还没有完成造成的。 相似文献
15.
抗血红素多二硫键ScFv在大肠杆菌中绝大多数表达产物为包涵体,为了获得可溶性的具有生物活性的ScFv,摸索了不同的复性条件,包括透析法、稀释和层析相结合的方法。研究发现,先对溶解的变性ScFv溶液稀释,进行初步的蛋白质复性,再利用Sephadex G-25凝胶层析进一步复性、降低变性剂浓度和纯化,至少可以得到95%纯度,产率为150mg/L的目标蛋白,通过一次凝胶过滤层析,达到了去除变性剂、复性及纯化ScFv蛋白三种目的,为多二硫键ScFv在大肠杆菌中的表达和纯化提供了一种经济可行的方法。 相似文献
16.
17.
蛇毒蛋白原核表达包涵体复性研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
外源基因在大肠杆菌中表达后常形成不溶性的无活性包涵体。包涵体的形成已经成为研究和应用活性蛋白质生产的主要障碍。然而,在合适的条件下,包涵体经过溶解、纯化、复性过程后可在体外重新折叠成有活性的蛋白质。迄今,已对蝰科、眼镜蛇科11种毒蛇的18个基因(包括金属蛋白酶、PLA2、β-银环蛇毒素、心脏素素、丝氨酸蛋白酶、神经生长因子、C-型凝集素等)成功进行了原核表达,采用稀释复性、透析复性和层析复性三种方法成功进行了包涵体复性。着重就蛇毒蛋白原核表达后包涵体复性所用的方法予以综述。 相似文献