TNF-α在PMA和IFN-γ诱导U 937细胞生长和分化过程中的作用

本文报道了佛波酯(PMA)和γ-干扰素(IFN-γ)对U937细胞生长和分化的调控作用及其机制。PMA和IFN-γ能以剂量依赖的方式诱导U937细胞向成熟单核/巨噬细胞样细胞分化,同时抑制其细胞的生长。实验发现PMA和IFN-γ可诱导U937细胞表达TNF-α特异性mRNA和蛋白质。U937细胞培养中加入特异性抗TNF-α抗体可以抑制PMA和IFN-γ诱导U937细胞的分化和生长。这说明内源性的TNF-α在介导PMA和IFN-γ上述生物效应过程中起一定作用。TNF-α对U937细胞的这种调节作用与其胞毒作用机制不同     

HFCL细胞对U937细胞的诱导分化作用

为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对急性单核细胞白血病U937细胞促分化作用,及其对经典诱导分化剂TPA诱导分化作用的影响,先建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系,以细胞形态学改变、硝基四氦唑蓝(NBT)、流式细胞仪检测细胞周期和CD11b、CD13、CD14、CD33细胞表面抗原作为诱导分化指标;Western印迹检测P38蛋白的表达变化。结果发现,与HFCL细胞共培养后,U937细胞出现分化成熟的形态学改变,且与HFCL细胞直接接触组的诱导分化作用大于用transwell组。同时发现U937细胞与HFCL细胞共培养后,G1期细胞增高,S期细胞减少;CD11b、CD13、CD14和CD33表达增高;且NBT阳性细胞增高至46、3％。Western印迹检测结果显示,直接接触组总P38蛋白表达增加。而且HFCL细胞还能增强TPA对U937的诱导分化作用。     

P^53基因在U937细胞生长和分化过程中的调节作用

The expression of p53 gene has been found to be regulated during the induction of differentiation of U937 leukemic cells into mature macrophages by recombinant human granulocyte- macrophage colony stimulating factors (rhGM-CSF) We showed here that the increased expression of p53 seemed to be necessary for the differentiation of U937 cells induced by rh-GM-CSF. The inhibition of p53 expression by a p53 antisense oligodeoxynucleotide lead to the significant decrease of formation of mature macrophages from U 937 cells in the presence of rhGM-CSF. By contrast, the p53 sense oligodeoxynucleotide had no any effect. Furthermore, we have analysed the growth of U937 cells in the presence or absence of rhGM-CSF. The results showed that rhGM-CSF dramatically inhibited the growth of U 937 cells in the cultures. At the same time, the antisense inhibition experiment demonstrated that the inhibition of p53 expression partially diminished the growth-inhibitory effect of rhGM-CSF on U 937 cells. These results suggested that the p53 was required for the initiation of rhGM-CSF-induced differentiation of U 937 cells on one hand, and the inhibition of cell growth on the other hand. Thus we deduce that the increased expression of p53 induced by rhGM-CSF may be a coupling event of switch of U 937 cells from growth into differentiation.     

粘中着斑激酶在TNF—α和环己亚胺协同诱导人肝癌细胞SMMC—7721凋亡中的作用

探讨了粘着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）在TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721细胞凋亡中的作用,利用转染FAK反义质粒来特异性降低SMMC－7721细胞的FAK含量,用Western杂交的方法来检测蛋白激酶B（PKB）的蛋白含量,以及用流式细胞仪的方法来检测细胞的凋亡。研究发现TNF－α本身并不能诱导SMMC－7721细胞发生凋亡,而只有当用环己亚胺和TNF－α协同处理时才发生凋亡。在TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡过程中,PKB蛋白含量的降低,提示PKB的蛋白水平与凋亡的发生密切相关。当用FAK反义质粒降低SMMC－7721细胞的FAK含量（约降低了60％）后,细胞对TNF－α和环己亚胺协同诱导的凋亡的敏感性在用低剂量TNF－α处理的情况下增加,而在高剂量TNF－α和处理的情况下降低,相应地,在低剂量TNF-α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的PKB含量低;而在高剂量TNF－α和环己亚胺处理的情况下,FAK反义质粒转染株细胞的PKB含量比对照的要高。结果提示,FAK对TNF－α和环己亚胺协同诱导SMMC－7721凋亡的过程有一双相作用,并且该过程可能与PKB有关。     

LPS和PMA诱导小鼠腹腔巨噬细胞的PKC—α和PKC—ε的激活与转位

利用免疫印迹技术及内源性底物磷酸化方法,我们研究了在巨噬细胞的信号传递中起重要作用的ＰＫＣ同功酶的分布及其在免疫调变剂ＬＰＳ的刺激下产生的激活和转位。在未激活的巨噬细胞中,ＰＫＣ－β捻量高于ＰＫＣ－α和ε,它和ＰＫＣ－α的分布均是胞质中大于胞膜。以ＰＭＡ为阳性对照,结果提示ＬＰＳ介导的抑制性巨噬细胞免疫调变机制中涉及到ＰＫＣ－α和ＰＫＣ－ε从胞质到膜组份的转位而不是ＰＫＣ－β（ＰＫＣ－βＩ或βⅡ）     

TNF在疟疾感染过程中的作用

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在疟疾的感染过程中有明显的双重作用。疟原虫抗原可刺激ＴＮＦ释放，ＴＮＦ反过来对疟原虫又具有杀伤和抑制作用，也同时导致多种病理改变。本着重综述了近几年ＴＮＦ在疟疾感染中作用的最新进展，探讨ＴＮＦ在疟疾感染中的利弊，为疟疾的治疗提供一定的理论依据。     

NF—κB与TNF诱导的细胞凋亡

不同类型的细胞对于ＴＮＦ－α诱志的细胞凋亡的敏感性可以有很大差别,但是多数的细胞在同时给予蛋白质合成抑制处理时会对ＴＮＦ－α变得非常敏感。有学者认为有一个基因或一组基因在ＴＮＦ受体活化后被诱导而传导细胞凋亡信号。近期的研究表明,一种被ＴＮＦ激活的ＮＦ－κＢ转录因子在这一过程中起部分的作用。     

p~(53)基因在U 937细胞生长和分化过程中的调节作用

本文报道了p~(53)基因对人白血病细胞系U 937细胞生长和分化的调节作用。重组人GM-CSF(rhGM-CSF)可诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,这反映在分化后的细胞表达有巨噬细胞许多表型特征和功能活性。在这一分化过程中同时伴随着p~(53)基因的表达增加和U 937细胞生长受抑。进一步,用反义脱氧寡聚核苷酸抑制试验特异性地抑制p~(53)基因表达,结果发现p~(53)反义脱氧寡聚核苷酸可以明显抑制rhGM-CSF诱导U 937细胞向成熟巨噬细胞分化,同时也明显解除rhGM-CSF介导细胞分化过程中的细胞生长抑制作用。这些结果说明p~(53)基因在U 937细胞的生长和分化过程中可能起偶联调控作用。     

不同剂量LPS诱导肝Kupffer细胞释放TNF的体外研究

本实验观察了不同剂量LPS诱导大鼠肝Kupffer细胞释放TNF的作用。加入LPS后1小时,三种剂量LPS组Kupffer细胞培养上清中均可测到TNF活性,3小时达到峰值。100和150ng/ml LPS组TNF活性高于50ng/ml组(P<0.01),而100和150ng/ml两组之间无明显差异(P>0.05),再次加入LPS(终浓度100ng/ml),只有50ng/ml LPS组培养上清液中有TNF活性检出,但幅度明显下降(P<0.01)。上述结果提示LPS在体外诱导肝Kupffer细胞释放TNF在一定范围内具有剂量依赖关系,且呈一定的时间反应性。     

p38 MAPK参与LPS诱导RAW细胞TNF—α基因表达的调控

构建ＴＮＦ－α启动子驱动的荧光酶报告基因系统,研究ｐ３８ＭＡＰＫ信号转导系统对ＴＮＦ－α基因表达的影响,ＲＡＷ２６４．７细胞共转染实验发现,ＬＰＳ对ｐ３８的激活作用与其诱导ＴＮＦ－α转录活性的作用显著相关,虽然单纯转染ｐ３８未见明显诱导ＴＮＦ－α报告基因系统的转录活性。     

蛋白激酶C亚型在HL-60细胞诱导分化中的变化

用全反式维甲酸(ATRA)或佛波酯(PMA)处理人早幼粒白血病细胞(HL-60)3天,用形态学,NBT还原实验,特异性和非特异性酯酶测定,证明细胞分别向粒细胞或单核/巨噬细胞分化。通过免疫组化法观察了蛋白激酶C(PKC)α,βⅠ和βⅡ亚型在分化后的变化。结果显示,ATRA可引起HL-60细胞PKCα,βⅠ和βⅡ的含量升高,分别为对照的5.0,2.8和4.2倍,并存在从胞膜向胞质转位。PMA则使PKCα和βⅡ的表达水平下降,而PKCβⅠ增高,且三种亚型均在核内有不同程度的表达。结果提示HL-60细胞向粒细胞的分化可能需要PKCα和PKCβ评的持续激活,而PKC的核内转位可能是HL-60细胞分化为单核/巨噬细胞的重要环节。     

肿瘤坏死因子α和β对电离辐射诱导细胞凋亡的效应

为探讨肿瘤坏死因子（tumor necrosis foctor)α和β（TNFα和β）对电离辐射诱发细胞凋亡的效应及其机理,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和FACS分析等方法,观察了人肿瘤坏死因子α（hTNFα)和β（hTNFβ)对^60Co-γ射线诱发细胞凋亡的形态学,生化学变化。结果显示：hTNFα或hTNFβ均可明显抑制^60Co-γ射线诱发正常人胚肺二倍体细胞（2BS）的凋亡,而相同剂量的hTNFα能促进^60Co-γ射线诱发的人体肺腺癌细胞系A549细胞凋亡,而对另一株人体肺癌SPC细胞的效应比A549降低1倍;hTNFβ能分别增强A549和SPC的细胞凋亡频率。由此认为,hTNFα和hTNFβ均可通过调节细胞的生理生化反应来改变细胞对电离辐射的敏感性,可保护正常细胞免受辐射损伤,而增加某些肿瘤细胞对辐射的敏感性。     

CD147对白血病细胞U937生长和肿瘤形成的影响

目的：研究CD147对白血病细胞U937生长和肿瘤形成的影响。方法：分别采用脂多糖（LPS）或CD147单克隆抗体处理U937细胞;用RT-PCR和流式细胞术分别在mRNA和蛋白水平检测各组中CD147的表达情况;用流式细胞术检测在LtX3和CD147单克隆抗体作用下U937细胞周期的变化;用MTT法对各组细胞的生长状况进行分析;将细胞经皮下接种于裸鼠体内,对各组间肿瘤生长速度、肿瘤体积及裸鼠存活时间进行统计分析。结果：LPS在体外能够诱导自血病细胞U937表面CD147的表达,同时细胞增殖旺盛,但细胞凋亡数增加;使用CD147抗体阻断CD147后,能够将细胞周期阻断在G0／G1期,细胞活力下降,并诱导细胞凋亡;CD147抗体体外预处理能够抑制U937细胞在裸鼠体内的生长,使小鼠存活时间延长。结论：LPS可诱导U937细胞表面CD147分子表达增加,从而促进U937细胞的生长和肿瘤形成。     

肝包虫病患者血清中IL—6和TNF—α的研究

IL—6和TNF－a是重要的炎症和免疫反应介质,它们参与多种感染性疾病的炎症反应和免疫应答【川。肝包虫病患者细胞因子的水平如何,国内尚未见报道,为此我们测定了27例肝包虫病患者血清TNF－a的含量,其中20例病人同时检测IL－6的含量,初步探讨其与发病机理的关系及在临床中的意义。1材料与方法1．1研究对象27例肝包虫病患者均系新疆医学院就诊检查或手术的病人。诊断依据：肝区B超可见液性暗区,免疫系检测3项（点免疫、间接血凝、对流免疫电泳）中2项以上阳性或手术证实。年龄10一63岁,男16例,女11例。抽取病人静脉血,常规分离…     

可溶性重组hTRAIL蛋白抑制U251细胞生长

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL) 是TNF超家族中的成员,能够广泛诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无明显毒副作用. TRAIL已成为肿瘤治疗领域的研究热点.人脑胶质瘤是神经系统肿瘤中最常见类型, 占颅内肿瘤50%~60%,5年存活率为20%~30%. 本研究探讨可溶性TRAIL蛋白对人脑胶质瘤细胞（U251）的抑制作用. 由大肠杆菌表达系统表达的TRAIL多为包涵体,为获得可溶性的蛋白,将hTRAIL95~281功能区基因片段插入到pHisSUMO表达载体,经IPTG低温诱导表达,Ni-NTA Agarose纯化后获得可溶性SUMO-hTRAIL,经SUMO ProteaseⅠ切去SUMO融合标签后获得成熟可溶hTRAIL蛋白. 以U251细胞为靶细胞,通过MTT法检测TRAIL对肿瘤细胞的抑制作用.结果证明,TRAIL对U251细胞的抑制呈剂量依赖关系,最大抑制率为53.9%.流式细胞仪检测TRAIL诱导U251细胞凋亡实验中,对照组细胞存活率为92.2±0.8％,实验组细胞存活率为35.5±1.2%,证明重组蛋白具有生物学活性,并在体外能明显诱导U251肿瘤细胞发生死亡.本研究结果为TRAIL蛋白在临床上应用于肿瘤治疗奠定了基础.     

T7启动子作用下抗人TNF—α单链抗体的表达

基因工程技术构建的抗人ＴＮＦ－α单链抗体克隆人表达载体ｐＥＴ１５ｂ－Ｅｔａｇ中,在Ｔ７启动子的作用下,经０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＩＰＴＧ诱导,在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的３８％,表达产物大部分以包涵体形式存在,而一小部分以有活性的可溶性形式出现于细菌的外周质中。     

单核／巨噬细胞分泌TNF—α的调控及在老年时的改变

肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）是一种主要由单核／巨噬细胞分泌的细胞因子。它不仅有杀伤肿瘤细胞的特性,还在炎症、休克和自身免疫等病理过程中起重要作用。刺激巨噬细胞分泌ＴＮＦ－α的主要物质有内毒素、病毒、某些细胞因子和有丝分裂原以及神经肽等。而前列腺素Ｅ（ＰＧＥ）、ｃＡＭＰ类似物和肾上腺素类等可抑制其分泌。很多文献报道ＴＮＦ－α在老年时单核／巨噬细胞的分泌有改变。     

α肿瘤坏死因子和γ干扰素在幽门螺杆菌感染中的作用

幽门螺杆菌（Hp）是导致慢性胃炎和胃溃疡的主要病原体。在胃炎形成过程中，细胞因子在其中起重要作用，但对其机制的认识并不详尽。已有研究显示，在Hp感染的动物胃黏膜中，炎症因子如白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-8和α肿瘤坏死因子（TNF-α）升高。先前的研究表明，Hp阳性胃炎者，