蚯蚓超氧化物歧化酶理化性质的研究

从蚯蚓中提取超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase简称SOD),经硫酸铵分级沉淀分离、透析除盐后测定SOD活性得知:50~70%饱和度硫酸铵沉淀的SOD活性最高,比活性也最高;蚯蚓体内此酶在35~40℃之间表现出最高活性;最适pH值为7.8~8.2;提取蚯蚓SOD的最适提取液体积应为蚯蚓鲜重的4倍(v/w)。     

兔抗蜡质芽孢杆菌抗血清的制备及鉴定

近年来,用微生态制剂所产生的生物效应有利于增强动物体质,促进生长,以及防治等方面的研究成果,在国内外均有报道。Ｔｏｒｔｕｅｒｏ等进行在肉鸡日粮中添加蜡质芽孢杆菌显著提高增重和改善饲料效率。     

蜡质芽孢杆菌DLSL-2发酵条件探讨及培养基优化

对蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)DLSL2深层液体发酵的主要影响因子温度、转速、初始pH值等进行了单因素实验探讨,确定了最佳培养条件:温度为30℃、转速为250r/min、初始pH值为7.0。并用均匀设计法对其发酵培养基进行了优化,优化验证实验结果为7.1×109cfu/mL明显高于原发酵培养基结果3.2×109cfu/mL。     

蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)原生质体形成与再生条件研究

研究了溶菌酶浓度、酶解温度及时间、制备液的pH值、渗透压稳定剂对蜡质芽孢杆菌（Bacillus cereus）TO-8-24-2原生质体的形成与再生的影响.TO-8-24-2菌株原生质体形成和再生的最佳条件是以SMM pH7.5作酶解缓冲液,溶菌酶浓度为O.15mg/mL,在37℃下,酶解45分钟.原生质体形成率为91.7%,再生率为13.6%.     

苏云金杆菌超氧化物歧化酶的纯化和性质研究

苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）９１６５超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,经硫酸铵分级沉淀、ＳｅｐｈａｄｅｘＦ－１００凝胶过滤及非变性凝胶电泳（ＰＡＧＥ）三步纯化,纯酶比活力为４３８８ｕ／ｍｇ,属Ｍｎ－ＳＯＤ,分子量为４７．９ｋｕ,由二个亚基组成,含１９种氨基酸。     

金矿床区蜡质芽孢杆菌孢子数与金矿化关系

土壤中蜡质芽孢杆菌（Bacilluscereus）孢子数目是寻找隐伏金矿床的一种较理想的探矿法。利用此法对我国2个金矿床区的土壤样品进行了该菌的分离鉴定。从55份样品中分离到阳性菌对9株,从739林中挑取11株进行了生理生化特性鉴定,结果证明,该分离株均为典型的蜡质芽孢杆菌。分析矿区每克土壤中蜡质芽孢杆菌数量最高可达19000余个,与背景矿区比较要高达几百倍至几千倍。同时对55份土壤也进行了金含量的分析;结果发现,该菌孢子异常与金异常有一空间上的分离。依据这些研究,作者认为蜡质芽孢杆菌孢子数是指示金矿床区金含量多少的一项重要指标。     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯和性质的研究

由短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)209产生的胞外碱性蛋白酶的粗酶制剂(5×10 4u／g),经硼砂NaOH缓冲液抽提,硫酸铵沉淀,Sephadex G一25脱盐,DEAE-纤维素柱层析,冷冻干燥获得部分纯化的酶。纯酶的活力为199x10u/g,比活力提高2,6倍。此酶的最适pH8．5—9．0,在pH6一10之间稳定,因此是属于微碱性蛋白酶“’。最适温度为50℃,在50℃以下稳定,在60℃处理10分钟活力损失95％。0.003村c丑件的存在对酶的热稳定性和pH稳定性均有显著提高。Ag+,Cu2+,Fe2+,Hg+,Zn2+ 对酶有抑制作用;Mn2+有明显的激活作用;1×10-3M的PCMB,IAA,O-PTH,PMSF对活力无影响;1×10-3M EDTA对酶有30％的抑制作用;在40℃用NBS(1×10-4M)、DFP(2．5mM)对醢进行10分钟处理,酶活力完全损失。此酶能水解多种天然蛋白,如酪蛋白、血红蛋白、蛇毒蛋白等,不水解鱼精蛋白和溶菌酶。以酪蛋白为底物测得的km值为0．66×10-2g／ml。在pH7．3进行圆盘凝胶电泳,虽然呈现九条带,但均具有大小不等的蛋白酶活力。     

蜡质芽孢杆菌AR156发酵培养基及发酵条件的优化

对前期筛选得到的在田间试验中防治根结线虫效果较好的蜡质芽孢杆菌(Bacillus cereus)AR156,通过单因素筛选及正交试验的方法进行了发酵培养基优化,得到的最佳配比为:麦芽糖0.25%,玉米粉0.5%,黄豆粉0.5%,胰蛋白胨0.5%,CaCl2·2H2O0.05%,MnSO4·H2O0.05%,K2HPO40.1%。同时对实验室摇瓶条件下液体发酵的主要影响因子温度、转速、初始pH值等进行实验探讨,确定了最佳培养条件:初始pH值7.0,装液量200mL/L,接种量5%,发酵温度28℃,转速200r/min,发酵时间48h。优化后芽孢产量为1.03×109CFU/mL,芽孢生成率在97%以上,明显高于初始发酵培养基发酵结果。     

蜡质芽孢杆菌DLSL-2发酵条件探讨及培养基优化*

对蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)DLSL2深层液体发酵的主要影响因子温度、转速、初始pH值等进行了单因素实验探讨,确定了最佳培养条件:温度为30℃、转速为250r/min、初始pH值为7.0。并用均匀设计法对其发酵培养基进行了优化,优化验证实验结果为7.1×10⁹cfu/mL明显高于原发酵培养基结果3.2×10⁹cfu/mL。     

枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,WHNB02),其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31.5倍,回收率为13.0%。该酶为单体酶,SDS-PAGE测得的分子量约为43ku,以植酸钠为底物的Km值为0.5mmol/L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10min酶活保存61%,最适pH为7.0,在pH6.0~10.0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca2 存在。EDTA、Mn2 、Ba2 (5mmol/L)对酶活具有很大的抑制作用。     

抗真菌多肽APS—1的分离纯化与特性

蜡状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｃｅｒｅｕｓ）Ｓ１菌株对多种作物真菌性病害有良好的防效。本文报道了Ｓ１菌株产生的抗真菌物质的纯化及其部分特性。该菌株的发酵液经过酸沉淀和有机溶剂抽提、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００与ＤＥＡＥ５２柱层析等步骤后,抗真菌物质得到纯化,硅胶薄层层析显色为单点。该物质在２７５ｎｍ处有吸收峰,对蛋白酶有一定耐受性,茚三酮反应呈阴性,但酸水解后,茚三酮反应呈阳性,双缩脲反应也呈阳性。氨基酸组分分析结果表明,该物质由谷氨酸、天门冬氨酸、酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸和一种异常氨基酸组成。推测该物质为一种环状多肽,命名为ＡＰＳ１。紫外光照射和高压灭菌处理后,ＡＰＳ１的抗真菌活性损失不大。平板抑菌试验结果表明,ＡＰＳ１对９种供试真菌的孢子萌发有抑制作用,其完全抑制浓度因真菌种类不同而有差异     

我国若干地区蜡样芽孢杆菌723株噬菌体分型的初步报告

四年来,作者由水中获取蜡样芽孢杆菌噬菌体13株,旨在试作噬菌体分型。待检菌株共723株,由国内16个地区提供(其中食物中毒株121株;食品株602株)。分型结果显示:C29、C30、C24、C27、C19和A_4等型别占优势。中毒株     

几种离子及有机物对蜡样芽胞杆菌蛋白酶活力的影响

研究不同浓度的金属离子及有机物对蜡样芽胞杆菌蛋白酶活力的影响,结果表明①五种无机离子中Mg     

维生素C发酵中伴生菌对氧化葡糖杆菌的影响

通过分析维生素C二步发酵过程中活菌数、产酸量、pH、糖酸转化活力等 ,研究了蜡状芽孢杆菌 (俗称大菌 )对氧化葡糖杆菌 (俗称小菌 )生长和产酸的影响。结果表明 ,在大菌存在情况下 ,小菌的活菌数约为单菌培养条件下的 5倍 ,产酸量为单菌培养条件下的 2～ 3倍 ,糖酸转化活力为单菌培养条件下的 2～ 3倍 ,提示在混合菌发酵条件下大菌仅仅是通过刺激小菌的生长而促进小菌产酸。用小菌休止细胞进行的糖酸转化实验结果也表明 ,无论大菌的发酵上清液还是破碎的菌体 ,都未发现对小菌产酸产生直接影响。     

枯草芽孢杆菌B115抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B115分离自水产养殖池塘,对鱼类细菌性败血症致病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液用浓盐酸沉淀,乙醇抽提所得的拮抗物粗提液对热不稳定,4℃保存不能超过两周,-18℃保存不能超过45d,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感,对氯仿敏感,其作用活性pH范围较广,对pH不敏感。粗提液经CM柱离子交换层析和P-60柱层析,得到一个拮抗活性峰P2。粗提物经丙酮分级沉淀及高压液相色谱分离,得到较纯的LP,经质谱仪测定分子量为803.6D。1L发酵的细菌培养液可得到约1mg LP纯品。       

蚕豆种子超氧物歧化酶的纯化及性质

蚕豆种子粗提液经乙醇－氯仿混合物处理、丙酮沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析,获得比活性为２８５２单位ｍｇ－１蛋白的超氧物歧化酶．经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明酶已纯化到均一程度．该酶对ＫＣＮ和Ｈ２Ｏ２敏感,说明它为Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ．酶分子量和亚基分子量分别为３１０００和１４４００,说明它是由两个相同亚基组成。该酶在７０℃以下和在ｐＨ５—９条件下稳定．紫外区最大吸收峰为２７３．５ｎｍ。     

蚯蚓体内超氧化物歧化酶分析

蚯蚓体内SOD含量甚高,35℃饲养的蚯蚓其SOD比活最高,因此,纯化前将蚯蚓在35℃养殖4周以上.采用硫酸铵分级沉淀和柱层析的方法,从蚯蚓体内分离得到纯的铜锌超氧化物歧化酶.每100g组织得到SOD制品总活力为17,190 U,比活7995 U/mg,回收率为35%.该酶呈淡蓝绿色,最大紫外吸收波长为270nm.该酶分子量为33,000,亚基分子量为16,500.该酶亚基含156个氨基酸残基,不含酪氨酸.N-末端为丙氨酸,等电聚焦为三条谱带,等电点分别为5.30 、5.59和6.22.     

B.t.c.cry 1C全长基因的克隆及其在增产菌中的表达

设计的一对引物,对苏云金芽孢杆菌科默尔亚种(Bacillus thuringiensis subsp．colmeri)15A3菌株中的cry1C基因进行PER扩增,得到包括结构基因,调节基因在内的全长为4．0kb的PCR产物。经两步克隆,将此基因连接至穿梭表达载体pHT315上,得到重组质粒pHT-1C。通过电转化将其导入一株增产菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)9509菌株,SDS-PAGE检测到1条60kD左右的蛋白带,镜检观察到菱形晶体,生测结果表明,cry1C基因的导人使Bc9509菌株获得了对甜菜夜蛾的杀虫活性。     

贻贝（Perna viridis）超氧化物歧化酶的纯化及部分性质研究

采用５５－６０℃热处理,硫酸铵分级深沉和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析将贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ纯化到均一程度。每１００ｇ鲜贻贝肉可得到ＳＯＤ制品,总活力３６８９ｕ,比活力７８２ｕ／ｍｇ,回收率为２１％。测得该酶分子量为３２ｋＤ,亚基分子量约为１６．４ｋＤ,最大紫外吸收波长为２６８ｎｍ,,贻贝Ｃｕ,Ｚｎ－ＳＯＤ具有一定的耐热性,较强的抗酸、抗碱及抗脲性。