在大鼠发育过程中β1,4半乳糖基转移酶的组织分布及其变化的研究

用ＨＰＬＣ纯化了荧光标记的底物用β－１,４－半乳糖基转移酶的荧光标记底物的ＨＰＬＣ测定方法,测定了在发育过程中大鼠肝,肾,脑中的酶活性的变化,结果表明,（１）在正常成年大鼠中,各组织酶活性具有组织特异性,（２）不同的发育期,其酶活性不同,胎地最高,以后就渐渐下降,各组织酶活力变化幅度是不一致的,这些变化的生理意义有待于进一步研究。     

癌基因ras对β-1,4-半乳糖基转移酶活性的调节

 研究癌基因ras对细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性的调节 构建Ha ras表达载体并转染NIH 3T3细胞株 ,测定细胞表面和细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶活性和其mRNA的水平 结果发现ras使NIH 3T3细胞表面的 β 1,4 半乳糖基转移酶活性降低 ,而高尔基体内的活性不变 此外用Northern印迹检测后发现 ,ras不能改变细胞内 β 1,4 半乳糖基转移酶的mRNA水平 这说明癌基因ras能够调节细胞表面β 1,4 半乳糖基转移酶活性 ,但不能改变其转录水平     

诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase I,β-1,4-GalT-I)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化.方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-I在小鼠坐骨神经中的表达水平.将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT-I片段,克隆到pGEM-T载体中.采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针.通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-I mRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化.结果检测到β-1,4-GalT-I在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降.结论提示β-1,4-GalT-I可能在周围神经最主要的胶质细胞-施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定基础.     

细胞表面β1,4-半乳糖基转移酶1功能研究进展

β1,4．半乳糖基转移酶1（β1,4．galactosyltransferase 1,β4GalT1）是人们研究最广泛、最深入的糖基转移酶之一。β4GalTl的基因编码了长形和短形两种蛋白,长形的β4GalTl比短形的β4GalTl在胞浆区多了13个氨基酸的尾巴,正是由于这种差异造成了β4GalTl定位以及功能上的不同,短形的β4GalTl和部分长形的β4GalTl分布在高尔基体上,发挥糖基转移酶的基本功能,还有一部分长形的β4GalTl分布在细胞表面,发挥粘附分子样作用,在精卵结合、神经突触生长、神经元迁移、肿瘤细胞迁移等过程中有非常重要的意义。文章主要从β4GalTl的基本结构、β4GalTl与多种配体之间的相互作用介导了细胞不同的生物学功能、β4GalTl与细胞骨架蛋白的关系等几个方面综述细胞膜表面β4GalTl的研究进展。     

β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ在大鼠坐骨神经损伤后的表达变化

目的分析β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferaseⅠ,β-1,4-GalT-Ⅰ)mRNA在正常和损伤坐骨神经髓鞘上的定位及其表达变化。方法采用RT-PCR方法,分析β-1,4-GalT-Ⅰ在小鼠坐骨神经中的表达水平。将RT-PCR扩增的β-1,4-GalT_I片段,克隆到pGEM-T载体中。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-ⅠRNA探针。通过原位杂交及图像分析的方法,分析β-1,4-GalT-ⅠmRNA在正常和损伤大鼠坐骨神经的定位及其表达变化。结果检测到β-1,4-GalT-Ⅰ在大鼠坐骨神经的髓鞘中有表达,并在坐骨神经损伤后1～2d内表达最高,随后表达下降。结论提示β-1,4-GalT-Ⅰ可能在周围神经最主要的胶质细胞一施万细胞中表达,并在周围神经损伤后发生表达变化,这样为进一步分析β-1,4-GalT-Ⅰ在周围神经再生中的调控机制奠定基础。     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

人类β-1,4-半乳糖苷转移酶Ⅲ基因的分离与克隆

以人、牛、鼠、鸡、蜗牛的β-1,4-半乳糖苷转移酶催化区的编码核苷酸序列为探针,在NCBI GenBank EST数据库中进行同源搜寻,获得若干有高度同源的EST.在拼接序列的两端设计引物,以从人胎盘cDNA文库中PCR扩增获得的片段为探针,在人胎盘cDNA分子库中步移获得一个长1,907bp的cDNA片段,包含一个长1,179bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码393个氨基酸残基。该基因与已知的人类β1,4-GalTI的氨基酸同源性为43.8%,在蛋白质催化区的同源性更高达60.9%。表达谱分析发现该基因在人体16种组织中均有不同程度的表达,转录本大小约为2.4kb.通过该cDNA人/啮齿类杂种细胞株DNA Southern杂交将该基因定位在1号染色体。     

β-1,4-半乳糖基转移酶家族的研究进展

β-1,4-半乳糖基转移酶是近年来糖基转移酶中研究得最多的一种。随着新成员的不断发现和克隆,进一步探求其重要生物学功能已成为研究热点。目前研究结果表明该酶与受精过程,细胞黏附和转移,癌细胞转移,表皮细胞增殖及细胞信号传导等重要生物学功能密切相关。     

人类β-1,4-半乳糖苷转移酶基因家族中1个新成员的克隆与表达谱分析

应用从EST出发克隆基因家族新成员的策略 ,在人类睾丸组织cDNA文库中分离出 1个新的全长cDNA片段 ,它编码的蛋白产物与 (UDP 半乳糖苷 :N 乙酰基葡萄糖胺 )半乳糖苷转移酶 (GalT)有较高的同源度 .分析表明 ,在其 2 173bp的序列中含有 1个长 10 3 2bp的开放读框 ,编码 3 44个氨基酸 .基于该基因与半乳糖苷转移酶基因家族各成员的同源关系 ,尤其是与G .gallus β 1,4 半乳糖苷转移酶Ⅰ型(CKⅠ )的关系密切 ,这个基因的蛋白产物被命名为人类 β 1,4 半乳糖苷转移酶同源蛋白Ⅰ型 .Northern杂交发现它在被检测的人体 16种组织中均有表达 ,但丰度各异 .通过与含人单条染色体的人 /啮齿类的杂种细胞DNA进行Southern杂交 ,证明该基因位于 3号染色体上 .     

β1—4半乳糖基转移酶检测方法的建立及动力学研究

本文分离纯化了人ＩｇＧ的糖肽，去掉末端大酸和半乳糖，，经解和荧光标记，用ＨＰＬＣ纯化了荧光标记的底物［Ｇｎβ１－２ｍａ１－６（Ｇｎβ１－２Ｍｄα－３）Ｍβ１－４ｎβ１－４Ｇｎ－Ｐａ］。     

细胞表面半乳糖基转移酶及其生物学功能

根据mRNA转录子的大小,β-1,4-半乳糖基转移酶分为短型和长型两类半乳糖基转移酶.短型的位于高尔基体的成熟面.长型的主要表达在细胞表面,通过与相邻细胞表面或细胞外基质上的适当的糖苷底物的结合介导细胞-细胞和细胞-基质间的相互作用,如精子发生、精卵结合、早期胚胎细胞间粘附、次生滋养层巨细胞迁移和神经轴突向外生长等,或作为胞外寡糖链配基的信号传递受体影响G蛋白信号途径.另外,表面半乳糖基转移酶通过调节表皮生长因子受体信号传导能力向胞内传递生长抑制信号,在细胞增殖控制中起重要作用.     

反义RNA对猪α-1,3-半乳糖苷转移酶活性的影响

 α 1,3 半乳糖表位是猪 人异种移植超急性排斥反应的主要抗原 ,由α 1,3 半乳糖苷转移酶催化合成 .用RT PCR方法扩增中国实验用小型猪α 1,3 半乳糖苷转移酶cDNA的前 582bp ,测定碱基序列并构建其反义表达载体pLXRN ,将其转染入猪主动脉内皮细胞 .NorthernBlotting表明α 1,3 半乳糖苷转移酶mRNA减少 .检测α 1,3 半乳糖苷转移酶活性表明 ,反义RNA可使其活性下降32 2 % .研究结果表明可能通过反义RNA来抑制猪 人异种移植超急性排斥反应     

槐种子发育中胚乳细胞半乳甘露聚糖积累的研究

槐 ( Sophora japonica L.)开花约 60 d至种子成熟 ,为胚乳半乳甘露聚糖积累期。用组织化学方法 ,对储藏于胚乳细胞壁上的半乳甘露聚糖的形成积累进行了观察 ,结果表明 ,半乳甘露聚糖最先在邻近胚的胚乳细胞的粗面内质网的囊泡腔内形成 ,并通过细胞质膜分泌至细胞壁周围。此后 ,半乳甘露聚糖的积累逐渐向种皮方向扩展 ,及至种子成熟时 ,除糊粉层外 ,所有胚乳细胞几乎全由多糖所填充。此外 ,对半乳甘露聚糖发生部位及其积累过程的消长变化进行了讨论     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及软骨雏形发育过程中的表达

目的 观察TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及软骨雏形中的表达,初步探讨它们与大鼠整胚及软骨雏形发育间可能的相互关系和作用机制.方法 半定量RT-PCR分析3种因子在13～17 d全胚中的变化情况;免疫组化法观察3种因子在13～17d软骨雏形中的表达及该组织发育结构特点.结果 半定量RT-PCR显示,3种因子在发育13～15 d表达呈递增趋势,16～17 d出现下降.免疫组化显示,TGFβ1主要位于软骨雏形内的软骨骨祖细胞,TβRI、TβRII即可位于软骨骨祖细胞内,也可位于软骨外周的膜上及软骨雏形周围的间质内.结论 TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及软骨雏形发育过程中可能起着重要的调控作用,尤其是对组织器官形态的发生.     

大鼠肝纤维化组织中TGF-β1的研究

目的 观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在大鼠肝纤维化组织中的动态表达,探讨TGF-β1在肝纤维化中的意义.方法 采用腹腔内注射二甲基亚硝胺(DMN)构建大鼠肝纤维化模型,造模后4天、1周、2周、4周、6周、8周分别检测血清ALT、AST、ALB的变化,同时取肝组织用半定量RT-PCR方法检测TGF-β1 mRNA的表达.采用HE染色及Masson三色染色,光学显微镜下观察肝组织损伤情况.采用单因素方差分析进行多组均数间的比较.结果 肝纤维化模型组血清ALT、AST明显升高,ALB明显下降.TGF-β1 mRNA在对照组大鼠和肝纤维化模型组大鼠肝组织中均有表达.与对照组相比,肝纤维化模型组4天～1周时,TGF-β1 mRNA表达差异无统计学意义(P均＞0.05).2～4周较对照组显著升高(P均＜0.05),4周时达高峰.6～8周较4周时显著下降(P均＜0.05),但仍显著高于对照组(P均＜0.05).8周较6周时下降,差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1 mRNA表达与肝纤维化病程呈正相关(P＜0.01).结论 TGF-β1 mRNA在正常SD大鼠肝脏中有表达,在肝纤维化大鼠肝组织中表达增加,与大鼠肝脏病理分期正相关.     

西瓜种子内源β-半乳甘露聚糖酶活性与分布以及与萌发速度的关系

利用单粒种子凝胶扩散法研究了β-半乳甘露聚糖酶在西瓜种子萌发过程中的分布以及与西瓜种子萌发速率的关系。结果发现,在胚根尖突破种皮前吸胀的西瓜种子中,内源β-半乳甘露聚糖酶主要分布于种子的胚膜套中,并起到减弱外种皮和胚膜套细胞壁对胚根伸出的机械阻力的作用。对具有不同萌发速率的品种以及引发处理和未处理的西瓜种子中酶活性的检测证明,β-半乳甘露聚糖酶活性与西瓜种子萌发速度相关。固体基质引发三倍体西瓜种子过程中β-半乳甘露聚糖酶的活化和种皮阻力的减弱,是引发种子提高了萌发速度和萌发能力的原因之一。     

大鼠发育过程中下丘脑神经元钾离子通道温度效应变化的研究

为了探讨出生后钾离子通道在下丘脑神经元热敏感分化过程中的作用,采用膜片钳技术研究出生一个月内SD大鼠急性分离神经元的温度效应,结果表明IK电流密度在出生后一个月内变化不大(P>0.05),而IA电流密度则呈现为升高趋势(P<0.05).同时升高温度,不同出生日期的钾通道NPo都有不同程度的升高,但相较P1d的神经元来说,温度对P18d的电压依赖性影响更大一些.同时温度对IK和IA的影响是不一样的,IA的Q10>2,所有这些显示IA通道在神经元温度敏感性的发育分化过程中起着重要的作用.     

胱硫醚β—合酶在大鼠不同组织中的分布及其在As时的表达变化

高同型半胱氨酸血症是动脉粥样硬化 (ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,Ａｓ)的一个独立危险因素 ,胱硫醚 β 合酶 (ｃｙｓｔａｔｈｉｏｎｉｎｅβ ｓｙｎｔｈａｓｅ,ＣＢＳ)是参与同型半胱氨酸代谢的关键酶。ＣＢＳ活性异常与Ａｓ关系密切。但在Ａｓ发生过程中 ,ＣＢＳ基因表达及活性是否发生变化尚未见报道。本文观察ＣＢＳ基因在不同组织中的表达活性及其在Ａｓ时的变化规律。1　材料与方法(1)大鼠Ａｓ模型的建立与实验分组　采用高脂、高胆固醇和高ＶｉｔＤ3 饲喂法快速建立大鼠Ａｓ模型 ,即Ａｓ组 ;以标准饲料喂养的大鼠为对照组。(2 )…     

黄蜀葵花中β-半乳糖苷酶活性和金丝桃苷含量变化及其影响因素分析

对黄蜀葵[ Abelmoschus manihot( L.) Medikus]花不同部位的β-半乳糖苷酶(β-gal)活性和金丝桃苷含量进行了比较,并研究了开放程度、采收时间及采收后放置时间对花冠中β-gal活性和金丝桃苷含量的影响.结果显示:黄蜀葵花冠中β-gal活性和金丝桃苷含量分别为2.907 U和1.092％,均显著高于花萼和子房,分别为后两者的1.72倍和1.52倍,4.94倍和21.84倍.开放程度、采收时间及采收后放置时间对黄蜀葵花冠中β-gal活性和金丝桃苷含量有显著影响.总体上,完全开放和半开放的花冠中β-gal活性和金丝桃苷含量显著高于未开放及凋谢的花冠;随采收时间的推移(9:00至17:00)以及采收后放置时间的延长(0～5 h),花冠中β-gal活性逐渐升高、金丝桃苷含量逐渐降低;上午9:00采收的花冠中以及采收后0h的花冠中β-gal活性均最低、金丝桃苷含量均最高.研究结果表明:为使黄蜀葵花中金丝桃苷含量维持较高的水平,应于上午9:00左右采收完全开放的花冠,采收后应及时进行相应的处理.