水青树组织培养中无菌苗培养条件的优化

对水青树组织培养中种子的消毒方法和无菌苗培养条件进行了优化。4种消毒方法的效果比较表明,0.1% HgCl₂溶液对水青树种子的发芽有较强的抑制作用,而4% NaClO溶液的消毒效果最佳,对发芽的抑制作用最小。不同培养基上水青树种子的发芽情况显示,中盐低氮培养基有利于种子萌发,完全1/4 MS培养基为水青树无菌苗培养的最佳培养基。     

霍山石斛种子试管苗的培养

植物名称:霍山石斛(Dendrobium tosaense) 材料类别:成熟及未成熟的种子。培养条件:改进的 Knudson培养基(即 FeS-O_4·7H_2改为Na_2ECTA37.3mg和 FeSO_4·7H_2O27.8mg螯合)和改进的MS培养基(即1/2大量元素),pH5.1～5.4,培养温度25±5℃,光照强度20001ux左右,每天照光9～10小时。     

云南栽培西洋参皂甙的高压液相色谱定量分析

采用N-18ODS柱,以CH_3CN:H_2O(31:69 v/v)中加入50mM KH_2PO_4和CH_3CN:H_2O:H_3PO_4(20:80:0.5 v/v)为流动相,在202 nm紫外吸收波长检测下,测定了云南丽江引种栽培的西洋参中丙二酸人参皂甙(malonyl ginsenoside)Rb_1、Rb_2、Rc、人参皂甙(ginsenosidc)Rb_1、Rb_2、Rc、Rd、Ro和Rc、Rgl等10种主要皂甙的含量,讨论了不同的栽培年代、采收季节、地下部位以及商品等级中皂甙含量的变化,对该地区西洋参的生产提出了建议。     

响应面法优化酿酒酵母产油脂条件

运用响应面法对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)产油脂以及发酵条件优化进行了研究。首先根据单因素实验结果,利用Plackett-Burman设计对影响其产油脂相关因素进行评估并筛选出具有显著效应的3个因素:柠檬酸,CaCl2和初始pH值。接着用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用Box-Behnken设计以及响应面分析法,确定其优化后发酵条件为(w/v):葡萄糖15%,蛋白胨0.2%,酵母浸粉0.4%,柠檬酸0.471%,MgSO4·7H2O0.1%,ZnSO4·7H2O0.2%,CaCl20.025%,FeSO4·7H2O0.005%,初始pH值为6.74,180r/min,30°C培养96h。优化后的油脂产率(干重)达到14.55%,比在种子培养基中油脂产率4.76%提高了2倍左右。     

海洋来源链霉菌MY0504产纤溶酶的发酵条件优化

【目的】以发酵液纤溶酶活力为指标,优化海洋来源的链霉菌菌株MY0504的发酵条件。【方法】在菌株生长曲线及单因素试验基础上,采用Plackett-Burman设计筛选影响纤溶酶活性的主要因素,进一步用最陡爬坡试验及Box-Behnken中心组合设计法优化发酵条件。【结果】纤溶酶活性最高的发酵条件为:葡萄糖21.68 g/L,酵母粉25.31 g/L,NaCl5.0 g/L,K_2HPO_4·3H_2O3.0 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.5 g/L,FeSO_4·7H_2O 0.02 g/L,装液量50 mL(250 mL摇瓶),接种量10%(体积比),初始pH 7.5,温度24°C,转速200 r/min,培养时间4.5 d。发酵液纤溶酶活性可达2 190.6 U/mL。【结论】确定了MY0504菌株产纤溶酶的最优发酵条件,为该酶的进一步分离纯化及性质研究奠定基础。     

镍对体外培养内皮细胞的影响

目的:研究不同浓度的镍对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的影响。方法:用两种镍化合物(NiCl2·6H2O、NiSO4·6H2O)分别制成含Ni(Ⅱ)浓度为1000、500、250、125、62.5μmol/L及31.25μmol/L的溶液,作用于体外培养的HUVEC细胞株,72h后MTT法测试细胞增殖活性,确定NiCl2·6H2O与NiSO4·6H2O的TC50,并分别以TC50的Ni(Ⅱ)作用培养的HUVEC细胞株,MTT法检测不同时间点(24h、48h、72h、96h、120h)的细胞相对增殖活性;2,4-二硝基苯肼法检测作用72h时培养上清液及细胞裂解液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,计算Ni(Ⅱ)化合物作用下细胞LDH的释放率,评价Ni(Ⅱ)对其影响;HE常规染色观察两种镍化合物作用72h后的细胞形态;AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:两种化合物作用HUVEC细胞TC50为125μmol/L,随着浓度的不断增加,细胞毒性增强;同一浓度的Ni(Ⅱ)对细胞活性的影响随着作用时间增加而增强;两种镍化合物对细胞LDH释放率的影响无明显差异(P>0.05);NiSO4·6...     

毛头鬼伞CC-8810深层培养工艺的研究

为了提高发酵终了时毛头鬼伞(Coprinus comatus Fr.)CC-8810的菌丝浓度以获取高等真菌多糖,对CC-8810的深层培养工艺进行了研究。确定了最适发酵条件为:4%葡萄糖、3%黄豆饼粉、0.5%酵母浸出粉、3%麸皮、0.1%KH_2PO_4、0.05%MgSO_4·7H_2O,pH5.5—6,温度28℃,摇床转速140—160 r/min,摇瓶种子培养4天接种。当发酵液pH降至5.0—4.9、残糖量在1.2%以下,5—6天可终止发酵。发酵罐中放大试验表明,最终菌丝体浓度达4     

暹罗芽胞杆菌FJAT-45551用于农业生物防治的优化培养

以具有防病促长且抑菌谱广的暹罗芽胞杆菌(Bacillus siamensis)FJAT-45551为出发菌株,分别以生物量和发酵液的青枯雷尔氏菌和尖孢镰刀菌抑菌活性为指标,通过单因子和正交试验对其培养基成分和发酵培养条件进行优化,从而提高其抑菌活性。结果表明,优化后的培养基配方为:麸皮20 g/L,蛋白胨25 g/L,MgSO_4·H_2O 0. 2 g/L,CaCl_20. 1 g/L,FeSO_4·7H_2O 0. 1 g/L,NaH_2PO_4·H_2O 0. 5 g/L,K_2HPO_40. 5 g/L;最适发酵培养条件为:接种量1%、摇床转速130 r/min、温度20℃、装液量50 mL(250 mL的摇瓶装液50 mL)、初始pH值为6. 0。在优化的发酵条件下,FJAT-45551发酵液对番茄青枯病菌(Ralstorinia solanacearum)FJAT-91的抑菌圈直径达30. 82 mm,较优化前的抑菌圈直径增加了9. 09 mm,抑菌活性提高了41. 83%。     

草菇(Volvariella volvacea)、银丝草菇(V.bombycina)原生质体分离研究

本文对草菇、银丝草菇菌丝原生质体制备的最佳条件作了探讨。结果表明,培养两天的草菇菌丝,以0.5MKCI或0.5MMgSO_(4.7)H_2O作渗透压稳定剂,1.5％Lywallzyme(v/m),35℃下酶解1.5—2小时,原生质体产量可达1.5×10~6个/ml以上,培养3天的银丝草菇菌丝,以0.5MKCl作渗透压稳定剂,1.5％Lywallzyme,28℃酶解2—3小时,原生质体产量可达2.8×10~6个/ml以上。此研究对以后的原生质体融合育种打下了基础。     

实验15 DNA介导转移基因(DMGT)

1.配制试剂 100×磷酸缓冲液:Na_2HPO_4·7H_2O 0.49克。NaH_2PO_4·H_2O 0.7克,溶于100毫升水中,过滤除菌。—20℃贮存。Hepes缓冲液:Hepes(50mM)1.19克(分子量为238.3),NaCl(280mM)1.64克,溶于水中,用1N NaOH调节pH为7.05—7.10,加水至100毫升,过滤除菌。—20℃贮存。     

金缕梅的组织培养

1植物名称金缕梅(Hamamelis mollis O1iv.). 2材料类别浙江龙王山自然保护区采收的当年健康成熟的种子. 3培养条件种子萌发培养基:(1)MS0;诱导培养基:(2)MS 6-BA 1.0 mg·L-1 (单位下同) NAA 0.1 2,4-D 0.1;增殖培养基:(3)MS 6-BA 0.2 NAA0.1,(4)MS 6-BA 1.0 NAA 0.1;壮苗培养基:(1)MS0;生根培养:(5)1/2MS KT 0.1 NAA 0.6,(6)1/2MS 6-BA 0.1 NAA 1.0.培养基(1)～(4)附加蔗糖30 g·L-1,(5)和(6)附加蔗糖20 g·L-1 ,琼脂为6.5 g·L-1 ,pH 5.8.培养温度(25±1)℃,种子萌发培养和生根培养的前期进行暗培养,其余阶段均照光,光照时间12 h·d-1 ,光照度为2 500～3 000 1x.     

响应面法优化黑曲霉产果胶酶培养基中无机盐成分的研究

利用SAS软件中的二水平设计和响应面分析方法较系统地研究了发酵培养基中无机盐组分对黑曲霉(Aspergillus niger)JW-1菌株产果胶酶的影响.得到了在一定条件下果胶酶随无机盐组分的变化规律,并根据分析结果优化了产酶培养基.最终确定KH_2PO_4,FeSO_4·7H_2O,CaCl_2·2H_2O的最优浓度分别为0.85mg/mL,1.86mg/mL和2.52mg/mL,此时果胶酶活力可达5054.6U·g~(-1),为该菌株今后的研究和应用奠定了基础.     

施氮对桉树人工林生长季和非生长季土壤温室气体通量的影响

森林在调控温室气体排放方面有重要作用,随着人工林的迅速发展,其温室气体通量和对施肥的响应逐渐引起广泛关注。为了解施氮对桉树人工林生长季和非生长季土壤温室气体通量的影响,在广西东门林场尾巨桉人工林样地设置低(84.2 kg N·hm-2)、中(166.8 kg N·hm-2)、高(333.7 kg N·hm-2)3个施氮水平和不施氮对照,采用静态箱-气相色谱法监测土壤CO2、N2O和CH4通量。结果表明:(1)不同施氮处理的桉树人工林土壤CO2、CH4和N2O年均排放通量分别为214~271 mg CO2·m-2·h-1、-47~-37 kg CH4·m-2·h-1和16~203 kg N2O·m-2·h-1;土壤CO2排放通量在生长季高于非生长季,CH4和N2O通量未表现出明显季节变化。(2)施氮显著增加了土壤CO2和N2O年均排放通量,其促进效应主要集中在生长季(施氮后的4个月,即6—9月),且随时间增加,效应减弱。(3)施氮显著降低了土壤CH4年均吸收通量。因此,在维持桉树人工林生产力的基础上,结合季节变化,合理调控施氮量将有助于减少桉树林土壤温室气体排放。     

多花脆兰的离体快速繁殖

1 植物名称多花脆兰[Acampe rigida(Buch.-Ham.ex J.E.Smith)P.F.Hunt]. 2 材料类别种子. 3 培养条件种子萌发培养基:(1)MS;(2)1/2MS(大量元素用量减半);(3)KC[成份如下:MgSO4·7H2O 250 mg·L-1(单位下同);KH2PO425O;(NH4)2SO4 500; Ca(NO 3)2·2H2O 1 000 ;FeSO4·7H2O 25; MnSO4.4H2O 7.5;肌醇(C6H12O6)100;盐酸硫胺素(VB,)1; D-甘露糖醇12.7%];(4)1 g·L-1花宝1号(美国Haponex公司产品,N:P:K=7:16:9)+2 g.L-1花宝2号(美国Haponex公司产品,N:P:K=20:20:20);(5)MS+100 g·L-1香蕉汁;(6)1/2MS+100 g·L-1香蕉汁;(7)KC+100 g·L-1香蕉汁;(8)1 g·L-1花宝1号+2 g·L-1花宝2号+100g·L-1香蕉汁.原球茎增殖和分化成苗培养基:(9)1/2MS+6.BA 1.5+NAA 0.2+100 g·L-1香蕉汁;(10)1/2MS+6-BA 0.5+NAA 0.05+100 g·L-1香蕉汁;(11)1 g·L-1花宝1号+2 g·L-1花宝2号+6-BA 1.0+NAA0.5+100 g·L-1香蕉汁.     

PEG诱导人类细胞和元麦原生质体融合初步尝试

本实验尝试以PEG诱导Hela细胞与元麦原生质体融合进行了初步观察。 实验方法是将Hela细胞悬液250万/0.25 ml和元麦原生质体悬浮液500万/0.25 ml混合,然后加入0.125 ml PEG溶液(PEG 6,000分子量0.09M,CaCl_2·2 H_2O 10.5 mM,葡萄糖0.25 M,KH_2PO_4·7H_2O 0.7mM,pH 5.5)于37℃孵育30分钟,接着以RPMI-1640培养液洗掉PEG,离心收集细胞培养于小玻瓶中。实验分两组:一组细胞培养在Nagata培养液中,另一组培养在RPMI-1640培养液中。初步观察结果如下:     

被孢霉菌发酵产生花生四烯酸的研究

研究了温度、培养基初始pH、碳源、氮源对被孢霉(Mortierella sp.)产生花生四烯酸的影响。正交试验结果表明,Mortierella sp.M10最佳培养基组成为(g/L):葡萄糖100,酵母膏10,KNO_3 4.0,KH_2PO_4 2.0,CaCl_2·2H_2O 0.1,MgSO_4·7H_2O 0.5,FeCl_3·6H_2O0.015,ZnSO_4·7H_2O 0.0075,CuSO_4·5H_2O 0.0005。采用最佳培养基及发酵条件,细胞干重和花生四烯酸产量分别为33.51g/L和0.827g/L。同时对摇瓶发酵过程进行了分析。     

碳氮比对固氮菌株WN-F合成胞外多糖的影响北大核心CSCD

从沈阳农业大学棕壤长期定位试验站的栽培玉米土壤样品中分离筛选到高产多糖固氮菌株WN-F,从菌株鉴定、培养条件优化和固氮与产糖关系进行初步研究。对其进行形态学观察和分子生物学鉴定,酶标仪分析菌体生物量法确定菌株的生长培养条件,并分析其固氮与产糖之间的关系。结果表明,该菌株为阿氏芽孢杆菌,并命名为Bacillus aryabhattai WN-F。WN-F菌株在37℃,180 r/min情况下12 h时生长量达最高值。其培养基优化配方为(L^(-1)):蔗糖20.0 g,牛肉膏2.0 g,KH_2PO_4 0.4 g、MgSO_4·7H_2O 0.4 g、NaCl 0.4 g、CaSO_4·2H_2O 0.4 g和CaCO_3 2.0 g。菌株WN-F的产糖情况随着初始氮浓度的增加,呈现出抛物线关系,适宜碳氮比促进菌体合成胞外多糖。Bacillus aryabhattai WN-F是长期定位试验玉米土壤中的优势菌株,高产胞外多糖且有固氮作用,是发挥玉米联合固氮作用,减少化肥施用的候选菌株。     

碳氮比对固氮菌株WN-F合成胞外多糖的影响

从沈阳农业大学棕壤长期定位试验站的栽培玉米土壤样品中分离筛选到高产多糖固氮菌株WN-F,从菌株鉴定、培养条件优化和固氮与产糖关系进行初步研究。对其进行形态学观察和分子生物学鉴定,酶标仪分析菌体生物量法确定菌株的生长培养条件,并分析其固氮与产糖之间的关系。结果表明,该菌株为阿氏芽孢杆菌,并命名为Bacillus aryabhattai WN-F。WN-F菌株在37℃,180 r/min情况下12 h时生长量达最高值。其培养基优化配方为(L~(-1)):蔗糖20.0 g,牛肉膏2.0 g,KH_2PO_4 0.4 g、MgSO_4·7H_2O 0.4 g、NaCl 0.4 g、CaSO_4·2H_2O 0.4 g和CaCO_3 2.0 g。菌株WN-F的产糖情况随着初始氮浓度的增加,呈现出抛物线关系,适宜碳氮比促进菌体合成胞外多糖。Bacillus aryabhattai WN-F是长期定位试验玉米土壤中的优势菌株,高产胞外多糖且有固氮作用,是发挥玉米联合固氮作用,减少化肥施用的候选菌株。     

响应面法优化褐腐真菌竹生薄孔菌产纤维素酶的液体培养基

竹生薄孔菌是一种褐腐真菌,可产生具有重要应用价值的纤维素酶。以纤维素酶为响应值,通过响应面PlackettBurman设计、最陡爬坡设计、Box-Behnken设计建立数学模型,获得竹生薄孔菌产纤维素酶的最适液体培养基为:葡萄糖7.44 g/L、蛋白胨5.0 g/L、麸皮35.31 g/L、Tween 80 9.57 m L/L、KH_2PO_4 1.0 g/L、Mg SO_4·7H_2O 0.5 g/L、Co Cl_2·6H_2O 0.06 g/L、Fe SO_4·7H_2O 0.03g/L、Ca Cl_2 0.5 g/L、Zn SO_4·7H_2O 0.05 g/L、维生素B1 0.01 g/L。在此优化培养基条件下得到的纤维素酶活性为53.17 U/m L,与理论值52.65 U/m L相近,且比优化前提高了2.84倍,说明响应面设计对于优化液体培养基以提高纤维素酶活性切实可行。     

植物资源开发利用新信息——国外有关植物的专利摘要(十三)

361.培养大戟细胞制造栎精葡糖甙酸 据欧洲1992年专利记载。栎精葡糖是一种生物可以接受的食品黄色染料。用大戟(Euphorbia milli)细胞培养制成。大戟的无菌叶子碎块培养在含2×10~(-6)M2,4-D的MS培养基中直至形成愈伤组织。 362.用香蜂花种子制造原生质体 据日本1992年专利记载。用香蜂花(Melissaofficinalis)种子制造原生质体比用叶子制造可大大缩短时间。其方法为在含生长素的培养基中培育种子,以诱导愈伤组织,然后用愈伤组织用纤维素酶、果胺酶、远志乳化酶(polygalacturonase)、CaCl_2·2H_2O和糖的混合物制备原生质体。(译者注香蜂花供药用)。