付里叶变换红外光谱法研究不同条件下菌紫质的结构

本文用付里叶红外光谱法研究了干燥、水合及缓冲液内菌紫质的结构.酰胺Ⅰ和Ⅱ带有多个肩峰,在不同条件下,各峰的频率无明显位移.红外光谱表明,主要为α-螺旋结构,同时含有相当比例的反平行β-束及某些无规结构.酰胺Ⅰ带吸收频率最大值计算的α_n-螺旋频率.     

付里叶变换偏振红外光谱法研究紫膜LB膜内菌紫质的取向

用付里叶变换偏振红外法测量了紫膜LB膜内菌紫质的酰胺Ⅰ、Ⅱ和A带的二色性,计算了菌紫质的α-螺旋取向.实验表明,紫膜内菌紫质的α-螺旋轴同膜法线的平均夹角为13°,即与膜平面的平均夹角为77°.     

牛胰多肽与CL／PC脂质体作用后二级结构的变化

用傅立叶变换红外光谱研究了ＢＰＰ与膜作用后其二级结构的变化,通过对红外光谱中酰胺Ｉ谱带进行解卷积、微分及曲线拟合等处理,结果表明,ＢＰＰ与脂膜作用后,其二级结构中α－螺旋成分增多,无规卷曲成分减少。     

α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的FT-IR研究

用分子定向进化技术,在酶活力和热稳定性双重选择压力下,筛选到了一株Kcat/KM是天然酶47倍的进化酶.用FT-IR方法,测定了α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的酰胺I带图谱,定量估算了天然酶和进化酶的各种二级结构含量.天然酶中,β折叠结构含量为28.5%,α螺旋结构含量为33%,这与园二色谱测量α螺旋结构为33%的结果有很好的一致,剩余的残基形成不同类型的转角和无规结构,其总含量为38.5%.在进化酶中,β折叠结构含量为26.8%,α螺旋结构含量为31%,其它结构为不同类型的转角和无规结构,含量为42.2%.     

apoA-Ⅰ的α螺旋在胆固醇流出中的作用

血浆载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)的水平与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)性心血管疾病的风险呈负相关.ApoA-Ⅰ经载脂形成高密度脂蛋白(HDL),HDL通过促进胆固醇逆向转运(RCT),使细胞内的多余胆固醇流出.α螺旋是apoA-Ⅰ载脂的主要结构,在apoA-Ⅰ参与的胆固醇流出中具有重要作用.模拟α螺旋建立的apoA-Ⅰ模拟肽能通过不同方式发挥抗AS的作用.本文就α螺旋在胆固醇流出中的作用作一综述,以便进一步探索apoA-Ⅰ的结构对胆固醇流出的影响,为以apoA-Ⅰ为靶点防治AS提供理论基础.     

水对多聚α-门冬酰胺能带结构的影响

本文练合使用了Monte Carlo(MC)方法;互洽场(MCF)方法和从头计算的晶体轨道(ab initio CO)方法,首先研究了无限周期的多聚α-门冬酰胺的水溶液结构.进而,研究了该水结构对多聚α-门冬酰胺能带结构的影响.结果表明:水的存在增加了多聚α-门冬酰胺的禁带宽度约0.5电子伏.这一结果与水对多聚α-甘氨酸和多聚α-丙氨酸的影响是有差别的.     

付里叶变换二级导数红外谱研究不同水合条件下紫膜内菌紫质的结构

在室温自然光线下得到了干燥、水合及缓冲液内紫膜菌紫质的(?)(?)叶变换红外光谱及其二级导数谱提高了谱线的表与分辨,将原谱的重叠组分有效地分离开.讨论了原谱与二级导数的关系.对经分辨的各组分谱线作了识别.结果表明,紫膜菌紫质内除α—螺旋结构外,还存在相当量的β-折叠和转折结构,在各种水合条件下,各特征谱线无明显的频率位移.     

付里叶变换二级导数红外谱研究不同水合条件下紫膜内菌紫质的结构

在室温自然光线下得到了干燥、水合及缓冲液内紫膜菌紫质的(?)(?)叶变换红外光谱及其二级导数谱提高了谱线的表与分辨,将原谱的重叠组分有效地分离开.讨论了原谱与二级导数的关系.对经分辨的各组分谱线作了识别.结果表明,紫膜菌紫质内除α—螺旋结构外,还存在相当量的β-折叠和转折结构,在各种水合条件下,各特征谱线无明显的频率位移.     

人载脂蛋白A-Ⅰ半胱氨酸突变体的二级结构和脂质结合能力的比较

为探讨人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ,apolipoproteinA-Ⅰ)α螺旋不同位点的半胱氨酸突变后,对蛋白二级结构和脂质结合能力的影响,利用定点诱变技术构建apoA-Ⅰ的天然半胱氨酸突变体apoA-ⅠMilano(R173C),及其它α螺旋片段上的半胱氨酸突变体,分别为apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),和apoA-Ⅰ(L195C).观察比较各种野生型及突变apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量和二级结构稳定性及其脂质结合能力.结果显示,野生型apoA-Ⅰ,apoA-Ⅰ(S52C),apoA-Ⅰ(N74C),apoA-Ⅰ(L107C),apoA-Ⅰ(K129C),apoA-ⅠMilano和apoA-Ⅰ(L195C)的α螺旋含量分别为54±4%,49±4%,50±2%,51±6%,56±4%,52±3%,和54±1%,各种蛋白的α螺旋含量无显著性差异(P>0.05).野生型apoA-Ⅰ的变性标准自由能(ΔG0D)为10.5kJ/mol;apoA-Ⅰ(S52C)和apoA-ⅠMilano的ΔG0D比野生型低2.1kJ/mol;而apoA-Ⅰ(K129C)的ΔG0D比野生型apoA-Ⅰ高1.6kJ/mol.与野生型apoA-Ⅰ相比,apoA-Ⅰ(K129C)和apoA-Ⅰ(L195C)两个突变体与脂质结合能力明显下降(P<0.05),而其它半胱氨酸突变体(包括apoA-ⅠMilano)在脂质结合动力学方面与野生型apoA-Ⅰ无明显差异.以上结果提示,不同位点发生的半胱氨酸突变对apoA-Ⅰ单体蛋白的α螺旋含量无明显影响,但对蛋白的二级结构稳定性和脂质结合能力影响不尽相同.     

付里埃变换红外测定有不同阴离子结合和通过时膜带Ⅲ蛋白的构象变化

用付里埃变换红外（FTIR）技术研究了不同阴离子结合和通过时,脂蛋白体膜带血蛋白二级结构的变化．发现：有Cl-、NO3、SO42-结合和通过时,膜带血蛋白α螺旋均为升高趋势,其中Cl-结合和通过时,带Ⅲ蛋白α螺旋增加较少;NO3-、SO4-结合和通过时,带Ⅲ蛋白α螺旋增加较多．阴离子结合和通过时,带Ⅲ蛋白α螺旋的增加可能与带Ⅲ所形成的阴离子通道扩张有关,扩张程度的大小主要取决于阴离子的体积,基本不受其所带电荷量的影响．     

还原性青刺果果实蛋白生物化学特性的研究

分离还原性青刺果果实蛋白,研究其生物化学特性。使用改良的铁氰化钾还原法评价青刺果果实蛋白的还原能力,酸溶醇沉法提取青刺果果实蛋白。基于青刺果果实蛋白PSP4最强的还原能力,通过SDS-PAGE、氨基酸自动分析、红外光谱分析、圆二色光谱分析、差示扫描量热分析,测定PSP4的氨基酸构成、纯度及分子大小、二级结构和变性温度等生物化学特性。结果显示75%乙醇沉淀青刺果果实蛋白PSP4还原力半数有效浓度为24.7 mg/m L,SDS-PAGE电泳呈现清晰的3条谱带,相对分子质量分别为11 KDa、14 KDa和34 KDa,热变性温度为69.83℃,还原性青刺果果实蛋白PSP4具有典型的酰胺Ⅰ(1690~1650 cm-1)、酰胺Ⅱ(1610~1370cm-1)、酰胺Ⅲ(1100~1030 cm-1)、酰胺A(3400~3230 cm-1)和酰胺B(3000~2800 cm-1)的吸收谱带,二级结构包含有α-螺旋(5.2%)、β-折叠(43.1%)和无规卷曲(27.6%)。研究表明,以PSP4为代表的还原性青刺果果实蛋白由多条肽链构成、β-折叠占优势、较高的热变性温度是其重要生物化学特性,具有作为生物功能物质的优良特征。     

SARS冠状病毒未知蛋白Orf 9b的克隆、表达和结构分析

从SARS病毒基因组中克隆Orf 9b基因并构建pET32-Orf 9b原核表达质粒,在原核细胞中表达目的重组蛋白并将其纯化,经肠激酶酶切后,得到分子量为11 kD的Orf 9b蛋白。ELISA检测表明重组Orf 9b蛋白可以与SARS康复病人血清反应而不与健康人血清反应。用圆二色光谱和红外光谱初步分析了重组Orf 9b蛋白的二级结构组成。圆二色光谱显示重组Orf 9b蛋白中α-螺旋占12.5%,β-折叠占40%,无规则卷曲占47.5%,红外光谱显示重组Orf 9b蛋白中α-螺旋占13.7%,β-折叠占47.5%,无规则卷曲占37.9%,两种检测方法对重组Orf 9b蛋白结构分析的结果基本一致,提示Orf 9b蛋白富含β折叠,而α-螺旋含量较少。获得该重组蛋白及对其结构的初步分析为进一步研究Orf 9b蛋白的功能奠定基础。     

中国人α珠蛋白基因-α3.7缺失亚型的研究

-α3.7是中国人常见的缺失型α-地中海贫血-2。根据重组位点的不同,-α3.7可分为-α3.7Ⅰ型、-α3.7Ⅱ型和-α3.7Ⅲ型,并且亚型的种类和频率具有种族差异性。本研究在中国人群中用PCR基因分析方法检出具有α珠蛋白基因-α3.7缺失的患者56例,然后用ApalⅠ和BalⅠ限制性内切酶进行分型。 结果表明,在这56例具有-α3.7缺失的患者中,有54例是-α3.7Ⅰ型,有2例是-α3.7Ⅱ型,尚未发现-α3.7Ⅲ型。此结果丰富了我国α地贫基因型谱的资料。 Abstract:-α3.7 is a common deletional α-thalassemia-2 in China.According to different recombination sites,-α3.7 can be divided into -α3.7Ⅰ、-α3.7Ⅱand -α3.7Ⅲ.The frequency and population distribution of these -α3.7 are quite different.In this study,we detected 56 patients among Chinese population of -α3.7 defect in alpha globin gene by PCR method,then the PCR product was digested by the restriction enzyme ApalⅠand BalⅠ.The sub-typing result shows that in the 56 cases of -α3.7 defect,54 out of 56 is -α3.7Ⅰ,2 out of 56 is -α3.7Ⅱ and none of -α3.7Ⅲ is detected.This result enriches the data about the alpha thalassemia genotypes of Chinese people.     

聚赖氨酸和它的溴化氢结合物结构变化的红外光谱研究

聚赖氨酸(PLys)和它的溴化氢结合物(PLys-HBr)在不同的相对湿度(R.H.)下,用红外光谱仪测得它们的结构变化.固态PLys-HBr(平均分子量(MW)55000)在40%R.H.以下能保持无规卷曲结构,在40—70%R.H.之间为β-折叠,70%R.H.以上为α-螺旋.PLys由于它们的平均分子量不同,结构变化差别较大.PLys(MW 55000)在各种相对湿度下保持α-螺旋,直至96%R.H.才出现β-折叠.PLys(MW 14000)在40%R.H.以下能保持无规卷曲结构,在40—85%R.H.之间主要为β-折叠,85%R.H.以上为α-螺旋.     

乙酰胆碱酯酶的圆二色性分析

本文对中国南海丁氏双鳍电鳐电器官(AchE)的CD光谱进行了研究,测定了不同pH,不同温度和不同浓度下AchE主链构象的变化.结果表明,AchE在酸性和碱性环境中,α-螺旋量均减少,且与活性有平行关系:当温度超过50℃时,α-螺旋量开始下降.温度升高至70℃,螺旋结构全部消失.酶蛋白浓度大于0.3mg/ml时,结构量变化不大,而在稀溶液中α-螺旋量则大大降低.本文在计算AchE主链结构量的基础上对其构象的稳定性作了进一步的讨论.     

聚α—氨基酸纤维的研究

<正> 在制造具有动物纤维相似性质的合成纤维时,应当引入蛋白质结构的慨念。丝是一种富含β-折叠结构的多肽,而羊毛则富有α-螺旋结构。当α-氨基酸聚合成聚α-氨基酸时,其一级结构与蛋白质一样为多肽,但其二级结构则可为α-螺旋、β-折叠或无规线圈,如果一种聚α-氨基酸纺成富含β-折叠     

一个鼠尾藻异多糖的结构特征及其抗氧化和抗结肠癌细胞增殖作用

采用DEAE-琼脂糖凝胶CL-6B凝胶层析对鼠尾藻多糖STP-Ⅰ进行分离纯化。通过红外光谱法,高碘酸氧化-Smith降解法,甲基化分析以及核磁共振法对多糖STP-Ⅰ的结构进行分析。建立了STP-Ⅰ的重复结构单位,STP-Ⅰ主要由6-β-D-Glcp和4-α-D-Galp组成,还包括5-α-L-Araf、2,3-α-D-Xylp、T-β-D-Xylp和T-β-D-Glcp糖残基。STP-Ⅰ的分支度是26.7%。基于自由基清除实验,STP-Ⅰ展现出高于维生素C的抗氧化活性,其清除羟自由基和超氧自由基的EC50值分别是0.15 mg/mL和1 mg/mL。STP-Ⅰ对人结肠癌细胞Caco-2具有抑制增值的作用,其IC_(50)是2.56 mg/mL,同时STP-Ⅰ对正常细胞没有杀伤作用。     

付里叶变换红外光谱研究短杆菌肽A及其在脂双层中加Na~＋前后的构象变化

用ＦＴＩＲ光谱研究了短杆菌肽Ａ（ＧＡ）在固态,组装入ＤＰＰＣ脂持体,以及Ｎａ＋结合状态的构象变化。固态时酰胺Ⅰ带峰位于１６３ｃｍ－１左右,且在１６８５ｃｍ－１处有一肩峰;酰胺Ⅱ带位于１５３０ｃｍ１左右,整个分子为反平行的β螺旋结构,为非通道构象。当ＧＡ组装入脂质体后,酰胺Ⅰ带仍位于１６３３ｃｍ－１,但１６８５ｃｍ－１的肩峰消失,酰胺Ⅱ带移至１５５０ｃｍ－１,分子间氢键转变为分子内氢键,二聚体从原来的双股螺旋变为头－头相连的单股螺旋,是ＧＡ的膜内通道构象。Ｎａ＋的结合并不改变ＧＡ的骨架结构,但通过对酰胺Ⅰ带的拟合分析发现：加Ｎａ＋后位于１６４４ｃｍ－１的无规结构含量减少１０％,而有序结构增加,提示部分无视结构可能有一种“门”的作用：当无离子通过时为“关闭”状态,当与离子结合后即“打开”,这样通过构象的改变来实现其通道功能。     

模拟α-螺旋多肽类似物抑制剂设计的研究进展

抑制剂筛选主要是通过反复、高通量地筛选化合物库,这个过程存在着对已有化合物库的依赖性和一定的机遇性。通过分析蛋白质数据库(PDB)发现,大多数蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)界面以α-螺旋结构为主体。α-螺旋多肽的骨架结构及其热点氨基酸残基(hotspots)为高效理性设计小分子抑制剂提供了模板。对近几年来依据多肽类似物和小分子化合物模拟α-螺旋结构设计抑制剂的研究进展进行了概述,同时对依据模拟α-螺旋设计抑制剂骨架的结构原理进行了讨论。     

α-天门冬氨酰二肽酶及其进化酶的FT-IR 研究

用分子定向进化技术,在酶活力和热稳定性双重选择压力下,筛选到了一体Keat／KM是天然酶47倍的进化酶。用FT－IR方法,测定了α－天门冬氨酰二须酶及其进化酶的酰胺I带图普,定量估算了天然酶和进化酶的各种二级结构含量。天然酶中,β折叠结构含量为28．5％,α螺旋结构含量为33％,这与园二色谱测量α螺旋结构为33％的结果有很好的一致,剩余的残基形成不同类型的转角和无规结构,其总含量为38．5％。在进化酶中,β折叠结构含量为26．8％,α螺旋结构含量为315,其它结构为不同类型的转角和无规结构,含量为42．2％。