灵芝液体发酵清除自由基活性产物发酵条件的优化

以红灵芝(Ganoderma.lucidum)为实验菌株,对其液体发酵活性产物清除自由基的发酵条件进行了研究。实验考察了培养基成分对灵芝液体发酵所产生的有效产物清除自由基能力的影响。结果表明,葡萄糖、酵母粉分别为灵芝发酵活性产物清除自由基效果较合适的碳源、氮源,最佳质量浓度分别为40 g.L-1和3 g.L-1,清除自由基的能力分别为55.7%、40.8%和66.5%、50.6%;铁离子对灵芝发酵产物清除超氧阴离子具有明显的效果,适宜质量分数为70×10-6;清除超氧阴离子的能力为54.6%,而硒离子对灵芝发酵产物抑制羟自由基有明显的促进作用,最适的质量分数为90×10-6清除羟自由基的能力为67.7%。油酸能促进灵芝发酵产物的清除超氧阴离子和羟自由基的能力,适宜的质量分数为0.1%,清除两种自由基的能力分别为:73.7%,53%。     

荸荠皮多糖体外清除自由基活性的研究

采用DPPH自由基法、邻苯三酚自氧化法和水杨酸法分别表征了荸荠皮多糖清除DPPH自由基(DPPH.)、超氧阴离子自由基(O2-.)和羟基自由基(.OH)的能力。结果显示,脱蛋白和未脱蛋白荸荠皮多糖具有清除自由基的活性,但该活性明显低于茶多酚。脱蛋白多糖清除DPPH.的能力高于未脱蛋白多糖,其清除50%DPPH.的作用质量浓度(EC50)分别为50.26 mg.L-1和76.22 mg.L-1。两种多糖清除.OH和O2-.的能力相当,其EC50(g.L-1)分别为0.118和0.124以及10.87和9.53。     

葎草多糖含量测定及其抗氧化性研究

对8月和10月采集的葎草全草、嫩头、叶和茎中多糖含量进行测定,并对各部位提取纯化的多糖进行体外抗氧化作用研究。结果表明,8月份嫩头中多糖含量最高,达到(42.897±2.996)mg/g;浓度为5mg/mL的各部位葎草多糖溶液,对Fenton反应生成的羟自由基具有较强的清除能力,达85.15%～98.52%;对邻苯三酚自氧化法产生的超氧阴离子自由基也有较好的抑制能力,达57.15%～67.54%。葎草多糖对羟自由基和超氧阴离子自由基具有较高的清除能力。     

雪松松针多糖超声波酶法提取及其抗氧化性

为优化雪松松针多糖超声波酶法的提取工艺,并研究多糖结构及其抗氧化性。通过响应面法分析确定最佳提取参数为:3. 0 g松针粉末,液料比20∶1(m L∶g),提取温度80℃,超声功率560 W,超声时间47 min,纤维素酶用量12 FPU/g原料,提取两次,多糖得率高达10. 39%。采用高效液相色谱、红外光谱和核磁共振光谱等对松针多糖进行了结构表征,松针多糖以β-糖苷键为主要连接方式,并由葡萄糖、果糖、阿拉伯糖和半乳糖等单糖组成。体外抗氧化性研究结果表明:松针粗多糖对羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)的清除能力远高于纯化多糖,呈现出良好的量效关系,粗多糖对·OH和DPPH·的半抑制浓度IC50分别为0. 47 g/L和0. 076 g/L。     

盘针孢菌发酵及其胞外多糖抗氧化活性

[目的]研究盘针孢菌的发酵条件及其胞外多糖(EPS)抗氧化活性.[方法]分别研究碳源、氮源、生长因子、pH值和培养时间等条件对盘针孢菌多糖产量的影响作用,并通过测定其多糖的还原能力及对羟自由基(·OH)和1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的清除作用研究该多糖的抗氧化活性.[结果]盘针孢菌多糖发酵的最佳条件为20%的马铃薯浸汁,20g/L麦芽糖,5 g/L(NH4)2SO4,0.01 g/L L-胱氨酸,pH 5.0,25℃下培养10 d.在此条件下,多糖产量达到37.52 mg/L,与在基础发酵培养基条件下相比,其多糖产量提高了84.10%.盘针孢菌多糖对·OH和DPPH自由基均有较好的清除作用,在多糖浓度为50 mg/L时,对·OH的清除率达到50.81%;多糖浓度为20 mg/L时,对DPPH自由基的清除率达到14.21%.[结论]发酵条件对盘针孢菌多糖代谢具有重要的调控作用,且该多糖具有明显的抗氧化活性.     

黄伞胞外多糖抗自由基作用的研究

目的:以乙醇沉淀的黄伞发酵浓缩液得到的胞外多糖为研究对象,检验其对自由基的清除作用。方法:采用电子顺磁共振(EPR)波谱仪检测黄伞胞外多糖清除羟自由基OH.和超氧阴离子自由基O2-.的作用。结果:在样品浓度均为100mg/mL的条件下,利用Fenton反应体系,黄伞胞外多糖对羟自由基OH.的清除率仅为38.5%;而利用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系,黄伞胞外多糖对超氧阴离子自由基O2-.的清除率可达到80.6%。结论:黄伞胞外多糖在体外对自由基有一定的清除作用且其对超氧阴离子自由基O2-.的清除作用明显优于对羟自由基OH.的清除作用。     

车前草粗多糖提取及抗氧化试验

采取热水浸提-醇沉法探讨了车前草中可溶性粗多糖的提取工艺,研究了提取温度、提取时间、提取次数与料液比4因素对多糖提取的影响。单因素试验发现,在80℃,120 min,料液比1:20,提取2次条件下多糖提取较好。正交试验优化提取方案为90 min、80℃和料液比1:25,在此条件下,多糖提取率可以达到29.88 mg.g-1。同时还研究了体外条件下对.OH和O2-.自由基的清除效果。研究发现,多糖与.OH自由基清除呈良好的线性量效关系(y=5.48x+31.34,r=0.9823),与O2-.清除也呈现良好的线性量效关系(y=4.334x+34.134,r=0.9979)。IC.OH-50%为114.57 mg.L-1,ICO2--50%为172.85 mg.L-1,试验结果充分表明车前草多糖在体外有较强的自由基清除能力。     

羊肚菌多糖提取及其抗氧化活性研究

为了探讨碱法提取羊肚菌多糖的工艺条件并测定其抗氧化活性,该研究以四川北川羊肚菌为原料,采用碱法提取羊肚菌多糖,利用苯酚-硫酸法对羊肚菌多糖得率进行测定,并通过单因素探讨提取温度(70、80、90、100℃)、提取时间(2、4、6、8 h)、碱液浓度(0.4、0.6、0.8、1.0 mol·L~(-1))、料液比(1∶15、1∶20、1∶25、1∶30 g·mL~(-1))对羊肚菌多糖得率的影响,同时采用正交试验优化提取工艺,对其抗氧化活性进行测定。结果表明:在提取温度90℃、提取时间5 h、碱液浓度0.7 mol·L~(-1)、料液比1∶20(g·mL~(-1))条件下得到的羊肚菌多糖得率为5.39%。羊肚菌多糖具有较强的清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的能力和较好的还原能力,其IC50分别为0.468、0.208、0.022、0.014 mg·mL~(-1),抗氧化能力依次为还原能力超氧阴离子清除能力羟自由基清除能力DPPH自由基清除能力。优化后的羊肚菌多糖提取工艺合理、可行,且羊肚菌多糖具有较强的抗氧化活性。     

Rhizobium sp. N613胞外多糖的抗氧化活性

以铁氰化钾和铁离子为检测系统测定了Rhizobium sp.N613胞外多糖(REPS)对氧化物的还原力;H2O2和Fe2+为羟自由基生成系统检测了REPS对羟自由基的清除作用;邻苯三酚自氧化法检测了REPS对超氧阴离子的清除作用;并体外检测了REPS对H2O2引起的氧化溶血现象的抑制作用及对小鼠肝组织脂质过氧化损伤的保护作用。结果显示,REPS对氧化物具有明显的还原力,其对羟自由基的清除作用达到35.46%(多糖浓度为2mg/mL),对超氧阴离子的清除作用达到36.84%(多糖浓度为0.78mg/mL),对H2O2引起的氧化溶血现象的抑制作用达到43.84%(多糖浓度为1.14mg/mL),对小鼠肝组织脂质过氧化的保护作用达到34.46%(多糖浓度为1.14mg/mL),表明REPS具有良好的抗氧化作用,有着重要的应用价值。     

广东石豆兰多糖的提取工艺及其抗氧化活性

为优化广东石豆兰多糖的提取工艺并评价其抗氧化活性。在单因素试验基础上,采用正交设计和方差分析,研究液料比、提取温度、时间及沉淀多糖的乙醇浓度对石豆兰多糖浸提量的影响并优化了工艺条件,确定最优条件为液料比50∶1 (mL/g),提取温度90℃,时间6 h,醇沉浓度为95%,此条件下多糖提取量为79.060 mg/g,RSD为0.132%。抗氧化结果表明广东石豆兰多糖的总还原力为L-抗坏血酸的3.46%;对DPPH、·OH、·O■自由基半清除浓度(EC₅₀)分别为2769.58、594.60、586.94μg/mL,其清除能力分别是L-抗坏血酸的0.68%、47.17%和29.00%;对Fe²⁺的半螯合浓度(EC₅₀)为160.83μg/mL,螯合能力是EDTA的2.12%。本研究结果为石豆兰多糖的提取及进一步开发利用提供参考依据。     

多花兰种子无菌萌发及离体快繁研究

以多花兰种子为材料,研究了无机盐浓度、植物生长调节剂和光照条件对多花兰种子非共生萌发的影响,在此基础上,通过研究原球茎增殖和分化、芽苗壮苗和生根的培养基配方及培养条件,建立多花兰组培快繁技术体系.结果表明:多花兰种子萌发培养基为1/6 MS十NAA0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg· L-1+马铃薯泥50g·L-1+AC 1.0g·L-1,光照度为1.25μmol·m-2·s-1,萌发率63.6％;原球茎增殖继代培养基为1/4 MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg· L1+AC 1 g·L-1+PE 200 g·L-1,繁殖倍数6.5倍/60 d,芽分化率60.2％;再生芽分化培养基为1/4 MS十6-BA2.0mg·L-1+NAA 0.2 mg· L-1+AC 1 g·L-1+PE 200g· L-1,繁殖倍数4.0倍/60 d,芽分化率85.0％;芽苗壮苗和生根培养基为1/6 MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1+AC 1 g·L-1+蔗糖20g·L-1 +PE 200 g·L-1和1/4 MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA1.2 mg·L-1+AC1 g·L-1十蔗糖20g·L-1+PE200g· L-1,生根率达100％,生根苗移栽成活率90％.此技术可用于多花兰种苗繁育和种质资源保护.     

6种细菌菌数测定培养基的优化

考察平板计数琼脂(PCA)中不同来源的酵母浸粉对6种细菌总数测定的影响,并对培养基中酵母浸粉和胰蛋白胨的配比及含量进行了优化。优化后的培养基组分为胰蛋白胨3.0 g·L-1,酵母浸粉3.0 g·L-1,葡萄糖1.0 g·L-1,琼脂15.0 g·L-1。与市售平板计数琼脂相比,能检出的细菌总数提高6.9%。     

梅花花粉离体萌发和花粉管生长研究

(南京农业大学园艺学院,南京210095)摘要:研究培养基成分、pH值和培养方式对梅花花粉离体萌发和花粉管生长的影响。结果表明:不同品种梅花花粉离体萌发的最适培养基为ME3+200g.L-1PEG4000(pH5.0),品种‘淡丰后’、‘久观绿萼’、‘喧妍宫粉’和‘月光玉蝶’最高萌发率可分别达到58.6%、60.6%、85.6%和50.7%。PEG4000能显著促进梅花花粉萌发,在培养基各成分中作用最大,不可替代。低浓度(50g.L-1)蔗糖对梅花品种花粉萌发作用不显著,而高浓度(≥100g.L-1)蔗糖明显抑制花粉萌发和花粉管生长。固体和液体培养对梅花花粉离体萌发的影响差异不显著。     

促进剂对Bacillus subtilis NX-21合成γ-谷氨酰转肽酶的影响

通过金属离子及表面活性剂的单因素试验及正交试验,对Bacillus subtilisNX-21胞外合成γ-谷氨酰转肽酶的发酵条件进行优化。结果表明,Mn2+、Mo6+和Tween-20的使用可有效促进菌体产酶,其最佳组合配方为:Tween-20 0.15%、(NH4)2MoO40.8 g.L-1、MnSO40.05 g.L-1。优化后该菌株产酶酶活达到3.9×103U.L-1,较原培养条件提高了21.6%。     

外源绿原酸缓解黑大豆SB铝毒害的机理研究

该文研究了外源绿原酸(CGA)对Al胁迫下铝敏感型黑大豆SB根生理生化指标以及根中胁迫相关基因表达的变化,探讨外源CGA缓解SB根铝毒害的效果及分子机理。以不同浓度Al和CGA处理SB,筛选出CGA缓解Al毒害的最佳浓度,测定Al含量、抗氧化系统酶活性、14-3-3蛋白与H~+-ATP酶的表达、H~+泵活性。结果表明:低浓度CGA能缓解Al胁迫下黑大豆SB根伸长抑制,并促进侧根数目增加,而高浓度CGA的缓解效果下降;0.01 g·L~(-1) CGA使Al胁迫下SB根尖Al含量与MDA含量下降,促进根系柠檬酸的分泌。RTPCR和Western Bloting分析表明0.01 g·L~(-1) CGA促进Al胁迫下SB根中14-3-3b、14-3-3m、14-3-3k和GHA2基因(质膜H~+-ATP酶)的表达,抑制MATE基因的表达。同时,0.01 g·L~(-1) CGA能促进Al胁迫下质膜H~+-ATP酶蛋白磷酸化水平以及其与14-3-3蛋白结合,且能提高质膜H~+-ATP酶和H~+泵活性。因此推测外源CGA可能通过增加侧根数,增强14-3-3蛋白和质膜H~+-ATP酶基因蛋白表达水平和互作,弥补Al胁迫下MATE表达的抑制,增加柠檬酸的分泌,增强SB对铝毒害的耐受性。     

景宁木兰组织培养外植体选择与抗褐化研究

该研究以景宁木兰(Magnolia sinostellata)为材料,从外植体类型的选择、消毒时间、预处理方法、离体培养条件和抗褐化剂类型选择等方面进行综合研究,以期筛选出景宁木兰组织培养的最佳方案。结果表明:利用0.1%氯化汞(HgCl_2)浸泡处理14和8 min分别是景宁木兰叶片和带芽茎段、根部的最佳消毒时间;景宁木兰叶片及茎段的褐化率在暗培养7 d时,分别为60.00%和56.67%,14 d时显著升高,而根部则在暗培养14 d时褐化率最低(45%);利用1 g·L~(-1)聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浸泡预处理景宁木兰外植体6 h可显著降低(P0.05)其褐化程度,处理后叶片、带芽茎段和根部的褐化率分别降至45.00%、28.33%和63.33%。不同的抗褐化剂均可减轻外植体的褐化程度,但针对不同外植体其效果不同。景宁木兰叶片最佳抗褐化剂为0.02 g·L~(-1)硝酸银(AgNO_3),可使其褐化率降低至16.67%,成活率为11.67%;带芽茎段和根部的最优抗褐化剂为2 g·L~(-1)柠檬酸(CA),褐化率分别降至30.00%和5.00%,成活率依次为50.00%和76.67%。综上所述,带芽茎段和根部抗褐化处理后褐化率较低且成活率较高,为景宁木兰组织培养最佳外植体。     

茶条槭悬浮培养体系的建立与没食子酸合成的优化条件

初步建立茶条槭(Acer ginnala)细胞悬浮培养体系: 以茶条槭子叶为外植体, 接种于WPM培养基中, 对茶条槭愈伤组织进行诱导和继代培养。悬浮培养中, 每代增长指数达到11.6, 没食子酸含量达到1.518%。通过对比NT、IS、WPM、B5和MS培养基所含成分对茶条槭愈伤组织悬浮培养的影响, 综合考虑悬浮细胞的生长速率和有效成分的含量, 确定WPM为基本培养基。WPM培养基大量元素的浓度对细胞的生长和没食子酸的积累有显著影响, 其浓度越高, 促进作用越明显。3倍浓度的大量元素最有利于没食子酸的积累。蔗糖浓度为10 g.L-1最适于没食子酸的积累, 浓度为30 g.L-1最适于茶条槭细胞生长和没食子酸合成。     

雪松松针挥发油化学成分及抗氧化活性研究

采用水蒸气蒸馏法提取雪松松针挥发油,利用气相色谱-质谱联用技术分析其化学成分。使用维生素C为阳性对照,以DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基清除作用为指标评价挥发油的抗氧化活性。从雪松松针挥发油中鉴定了37种化学成分,占挥发油总量的95.10%,以烃类和醇类为主;挥发油对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基有明显的清除作用,其IC₅₀分别为0.30、0.22及0.96 μg·mL^-1,且呈现一定的量效关系。可见,雪松松针挥发油中含有多种有应用价值的化学成分,具有显著的抗氧化活性。     

Brefeldin A: a specific inhibitor of cell wall polysaccharide biosynthesis in oat coleoptile segments

The effect of brefeldin A (BFA) on the synthesis and incorporation of polysaccharides, proteins and glycoproteins into the cell wall of subapical coleoptile segments isolated from etiolated oat seedlings (Avena sativa L. cv. Angelica) has been investigated. In the presence of D-[U-¹⁴C]-glucose, the incorporation of radioactive glycosyl residues into buffer-soluble, membrane (matrix polysaccharides) and cell wall polysaccharides was drastically inhibited by increasing concentrations of BFA up to 10 μ·mL⁻¹. BFA also altered the pattern of these polysaccharides suggesting a different sensitivity of glycosyltransferases toward the action of the drug. The incorporation of [U-¹⁴C]-glycine or L-[U-¹⁴C]-leucine into non-covalently- and covalently-bound cell wall proteins as well as the incorporation of radioactive N-acetylglucosamine residues into the newly synthesised oligosaccharidic chains of cytosolic, membrane and cell wall glycoproteins remained unchanged in the presence of 10 μg·mL⁻¹ BFA. The data demonstrate that, in oat coleoptile segments, BFA specifically inhibits the synthesis of cellulose and matrix polysaccharides without altering the synthesis and incorporation of proteins and glycoproteins into the cell wall. In addition, it is demonstrated that BFA does not affect the in vivo activity of glycosyltransferases involved in the transfer of N-acetylglucosamine from UDP-N-acetylglucosamine to the oligosaccharidic chains of glycoproteins.     

透明质酸产生菌的选育及发酵培养基的优化

将实验室保存UVD-34透明质酸产生菌再进行超声波处理,挑选出了一株透明质酸产量较高的菌,并对其发酵培养基进行初步优化。结果表明当可溶性淀粉质量分数为2%,复合氮源为3%,碳酸氢钠为0.1%时,其透明质酸的产量可达4.59 g.L-1,比优化前提高了1.29倍。该突变株值得进一步研究。