基因诱变、重组、克隆

、舀巧‘,‘...Jf护.口.曰口,今.二‘J舀函~....阅.侧尸‘J月..‘.924315用寡核普酸杂交检测非邻接短序列〔英〕/Borghesi一N ieoletti,C.…了BioTeehniques一1092-12(4)一凌74一475〔译自DBA,1992,11(11),92一06022〕 模型系统采用的寡核普酸互补于免疫球蛋白可变区基因3产侧翼保守性七聚体和九聚体序列的各区。单独的短核普酸(7 bp或gbP)不能作为杂交探针,但含有由电桥相连的两个保守序列的构建物能够杂交。通过降解碱基和保留七聚体与九聚体间的起始间隔物形成桥。这种桥连寡核普酸探针可用于Southern印迹和细菌基因文库筛选的杂交…     

基因诱变、重组、克隆

920441Re几公bac‘e,‘。。saloo丽,a,u二DNA片段的克隆〔英〕/Etehegaray,J.P.…f FEMSMierobiol.Lett。一1991,79(i)一61~64〔译自DBA,1991,10(10),91一05433〕 构建了Ren畜baete于云拙仍召al仍on坛砚ar饥重组基因库,以分离用于检测大马哈鱼肾致病菌基因序列的探针DNA。消除与Sau 3A限制酶切的杀缝气单胞菌(Aeromo.as吕al仍0.‘e云‘a)ATCC33658、Ye,s玄介‘ar留e无er云ATCC29473、Y。了比劣:e八、小肠结肠炎耶尔一森氏菌(Y。e耐e,。-co乙“‘ca)、弗氏志贺氏菌(召h名gella fle劣:e-,云)、伤寒沙门氏菌(Ba乙mooe乙王a切尹而…     

DNA分析与扩增

924297降解2,4一二氯苯氧乙酸(2,4一O)的质粒pJP4的PCR和基因探针检测〔英〕/Neilson,J.W.一/Appl .Environ.Mierobiol一1992,55(4)一1271~1275[译自DBA,1992,11(11),92-06019〕 用PCR和DNA探针灵敏性检测2,4一D降解菌真养产碱菌(Azca不‘夕e,ese:t,o,hos)JMPi34(含质粒pJP4)。甩2个20一聚寡核普酸DNA引物扩增pJP 4 tfdB基因的Zosbp区,并优化扩增条件 (94℃变性1分30秒、72℃退火并延伸1分钟、72℃最后延伸7分钟,共进行25轮)。PCR和5产端标记DNA探针的杂交都是对含pJP4或其衍生质粒pRO103菌株专性的。检测灵敏性为30oocfu…     

生物防治

920602杀坟幼虫球形穿抱杆菌的分离与鉴定麟刀G ueri-neau,M.…了J.Invertebr.Pathol一1991,57(3)一325~333〔译自DBA,1091,10(14),91一08090〕 使用3种回收球形芽抱杆声(Bac‘11“88尹吞-aor艺“u约昆虫致病株的培养基从泥浆样品中分离到84种B.‘夕ha“r‘,“8,并用名种计算机方案进行鉴定。第一个方案以27种表型测试为基础,第二个是13种。以腺嗦吟作主要碳源的BATS培养基(以Anagnostopoulos和Spizizen基本培养基为基础,补加19/l酵母膏、29/l酪蛋白水解物、100声g/ml链霉素和49/l腺嚷岭)回收菌株1593的抱子最有效。以邻氨鉴苯甲酸作…     

我国葡萄根癌农杆菌Ti质粒的特征

以窄宿主葡萄农杆菌Ag162Ti质粒的T-DNA区tmr、tmsl和ocs基因座位以及T_A-DNA和T_B-DNA片段为探针,对12株我国分离的不同生物型、质粒类型和寄主范围的葡萄根癌农杆菌的引质粒转移DNA(T-DNA)进行Southern杂交分析。在9株生物3型octoplne Ti质粒菌株中,与上述探针均同源。其中窄宿主葡萄根癌农杆菌菌株杂交片段彼此较一致。广宿主葡萄根癌农杆菌菌株的杂交片段彼此差异较大。1株无致瘤能力的生物1型菌株与5个探针均不杂交。1株生物3型nopaline Ti质粒菌株及1株诱导冠瘿瘤中只合成精氨酸的菌株,杂交带的变化也大。由此可见葡萄农杆菌在生物进化过程中其转移DNA呈多态性,成为农杆菌中特殊类群。本分析对葡萄根癌农杆菌致病菌株的鉴定亦有帮助。     

基因标记、转化、表达与检测

351594利用一寡核苷酸探针检测人工污染牡蛎中的剐溶血弧曹[英3/Lee,C.…/Appl.Environ.Microbi01.-1992,58(10).一3419～3422~译自DBA,1992,11(23),92—12853~ 用副溶血弧菌中1275bp热稳定直接溶血素(tdh)基因的核苷酸序列合成了一廿六聚体的寡核苷酸(VPs),5,.GCTAAGTTTGTTGG.TGAAGATGAAGG-3,。采用95个副溶血弧菌培养物和48个非副溶血弧菌菌株通过DNA克隆杂交测试了VP5的专一性。在严格的杂交条件下,VP5不与其它弧菌种和其它属种菌株杂交,但与临床和食物样本分离出的副溶血弧菌的杂交率分别为100％和91％。此DNA探针能…     

环境保护及农业废物利用

924252通过脱氮细菌纯培并物厌级降侧甲笨〔英〕/Soh。-eher,R.J.…j Areh.Mierobiol一1991,157(1)一7~12〔译自DBA,1992,11(s),92一04791〕 从各种芳香化合物中分离到几株脱氮的假单胞菌,并试验其在有分子氧时降解甲苯的能力。从苯乙酸(SP)、对一苯基苯乙酸(B‘P)以及苯丙氨酸(FF)中富集并分离的菌株不能够使甲苯无机化。从脱氮、降解甲苯的试验室蓄水柱中分离的假单胞菌(pse:‘o仍o.as)T菌株、从苯酚中富集分离的K170和5100菌株、从水杨酸中富集并分离的52菌株,在有N:O作为唯一电子供体时可降解甲苯。从苯环标记甲苯中50%以上的“…     

基因库构建

922884直接偏选含YAC克隆的cosmid文库〔英〕/Bax“-ndale,5.…/Nueleio Aeids Res一i。。1,1。 (25)一6651〔译自DBA,1992,11(4),92-01865〕 介绍了直接筛选含人类人造染色体(HAC)的cosmid基因文库的方法。从48XXXX人类细胞系的酵母人造染色体(YAC)基因文库中分离出重叠YAC克隆〔YGAS(41okb)和YGAio(4‘okb)〕,置于亨廷顿舞蹈病基因4 p16。3候选区内在紫外光下(36Onm)从凝胶上的酵母染色体带中切下HAC带。用(a一‘ZP)一dGTP和一dATP对D NA进行随机引物标记。通过与人切变胎盘DNA预杂交,从探针和经流式分拣的人第4染色…     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化*

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。     

中国东部栗疫病菌群体的遗传分化

本实验采用RFLP技术,对中国东部栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)进行了群体遗传结构的研究。313个参试菌株来自10个省(市)的16个群体(子群体),样本分布在北纬24°N—41°N。各菌株的DNA分别用限制性内切酶Pst Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切,先后以10个低拷贝DNA探针和1个DNA指纹图谱探针进行了杂交和检测。结果表明,两个探针(pCB29和pMS29.1)的杂交图谱呈单态性;探针pCB19的杂交图谱显示,菌株DNA以PstⅠ酶切的为单态性,以EcoR Ⅰ酶切的则呈多态性;其他7个低拷贝探针的杂交图谱都呈多态性(Pst Ⅰ酶切)、指纹图谱探针的检测结果显示,辽宁凤城群体的菌株与中国东部其他群体的菌株相比,具有更多的限制性杂交片段,菌株间的遗传变异性也更大。     

综合遗传学公司推出食品沙门氏菌快速诊断试验盒

综合遗传学(Integrated Genetics)公司最近推出它的第一个产品--检出食品沙门氏菌用的快速诊断试验盒。它被称为GENE-TRAK,是以DNA杂交技术为基础的。目前只能用于沙门氏菌的检出。该公司的科学家已分离出DNA探针,含有与沙门氏菌DNA互补的碱基序列模式。分离出可能存在于食品样品中的任何微生物的DNA链后,将沙门氏菌DNA探针加入样品中,若探针与存在于样品中的DNA单链杂交,则表明其中有沙门氏菌存在。     

抗生素和干扰素

931246定位于Laetoeoceu:lactis ATCC 11454染色体上的肚类抗生素乳酸链球菌肚前体的编码甚因〔俄〕/Rumer,L.M.…j Biotekhnologiya一1092,3一20~24〔译自DBA,1992,11(21),92一11798〕 通过接合作用将编码肤类抗生素乳酸链球菌肤的生物合成基因由Lae名oeoee翻s乙aet‘:ATCC11‘54转移到少质粒的 L.lac“s菌株(LMo23o、LPIT6)中。采用不同方法,从产乳酸链球菌肤的转接合体中分离出质粒的所有尝试均告失败。利用乳酸链球菌肚前体甚因的寡核普酸探针进行的印迹杂交实验表明,编码基因位于供体和转接合体的染色体上。(陶冶)931247卡那…     

质粒研究与载体构建

920814蟀传染的脑炎病毒cONA克隆片段的分子杂交〔英〕/Pogodina,V。V。…/Aeta Virol一1901,35(i)一71~80〔_译自DBA,1991,10 (15),91一08440〕 以重组D NA质粒做探针,在潜伏期、急病期和持续感染叙利亚仓鼠时检测脾传染的脑炎(TB-E)病毒RNA。通过克隆TBE病毒RNA(大于染色体RNA的50%)的非交叠的RNA拷贝构建探针。构建T质粒pBR一TBEVi、pBR一TBEV7、pBR-TBEVio和pBR一TBEVis,“ZP放射标记后用于dot一blot杂交。在感染后的最初三周内,脑中直接的病毒分离率和RNA检测率为100%,病毒滴度在1.9,至10.5.LDs0/口1范围内,…     

一种用分子杂交技术检测谷氨酸生产菌溶原性的方法

谷氨酸生产菌用于发酵生产谷氨酸和其他氨基酸,由于外源噬菌体污染或者由溶原菌内诱导出的噬菌体污染,往往给工业发酵带来严重的危害,于是测定谷氨酸生产菌是否为溶原菌便成了当务之急。本文以溶原菌E.coli K_(12)为研究模型,首先用~(32)P标记的λDNA作探针,建立了检测溶原菌株的分子诊断方法,继而通过寄主菌株从生产环境样品中分离筛选到7_6和7_(?)两大类共20多株噬菌体。由该两类噬菌体制得的~(32)P-7_(?)和7_(?)探针,可分别与以生产谷氨酸的棒杆菌B_9、7338和T_(?)三个菌株为寄主,从环境样品中分离的18个和6个噬菌体分离物杂交。而采用缺口翻译系统制备的7_(?)和7_(?)混合探针,或混合使用7_(?)和(?)探针,使得检测方法更为简便易行。通过Southern Blot技术和菌落杂交对菌DNA的分析,结果表明三个寄主菌株均不是所分离的噬菌体的溶原菌。最后,本文还就烈性噬菌体和温和噬菌体之间的同源性与分子诊断的可行性作了初步探讨。     

通用引物PCR检测临床常见致病菌的实验研究

通用引物可一次性扩增18种临床常见致病菌和耐药菌株的DNA,扩增片段长度在220bp左右,18种特异性探针分别与18种标准菌株的PCR扩增产物杂交结果显示探针都具有高度特异性;5种37例经法国梅里埃API细菌鉴定系统确定的临床分离菌株进行杂交鉴定,鉴定结果与分离株一致,表明设计的探针具有高度特异性及准确性。80例临床标本分别用法国梅里埃API细菌鉴定系统及PCR杂交法进行检测,阳性率分别为(52.5%)和(67.5%),表明PCR结合寡核苷酸杂交法比传统的生物学培养法更为灵敏,值得推广。     

一株牛源都柏林沙门氏菌的全基因组测序及毒力与耐药性分析

【背景】沙门氏菌(Salmonella spp.)是重要的人畜共患病原菌,其毒力和耐药性的不断增强引起广泛关注。【目的】了解从通辽市一犊牛死亡病例中所分离牛源都柏林沙门氏菌的毒力及耐药性情况。【方法】以病死犊牛肺脏为材料,经细菌分离纯化及16S rRNA基因测序,鉴定病原为沙门氏菌。采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性,以及毒力基因和耐药基因检测,并对其进行全基因组测序分析。【结果】分离菌具有较强毒力,对小鼠半数致死量为2.8×10⁶ CFU/mL。分离菌为多重耐药菌,仅对多粘菌素B和噻孢霉素敏感,对强力霉素和恩诺沙星中度敏感。检测13种沙门氏菌常见毒力基因,检出率为92.3%。对分离菌进行全基因组测序分析,该菌株为都柏林沙门氏菌,基因组大小为4 965 370 bp,GC含量为52.12%,同时携带2个质粒,大小分别为79 524 bp (pTLS-1)和45 301 bp (pTLS-2)。分离菌中共携带996个毒力基因和24个毒力岛;共携带42个耐药基因,其中4个为可水平转移基因,基因组中存在9个可移动遗传元件,包括插入序列和转座子等。【结论】分离牛源都柏林沙门氏菌菌株具有较强毒力且为多重耐药株,携带大量毒力基因及耐药基因。     

动物学杂志1981年总目录

第1期鼠疟原虫动合子休外培养初步研究…陈佩惠等(1)湿度对赤子爱胜酬产卵包和卵包孵化的影响… “‘’‘’‘”‘’.‘二‘一’·’·········……天津师范学院(3)叉尾斗鱼一对相对性状单因子杂交试验···……、.声、、.产、、尹、.7、.尹﹄、口产、.2、,少、1产、、户子、.JJ‘,口。丹n甘J马‘U QUI目r,石U︸l),‘,j山‘U‘且几,‘,︸,山,乙,、,j ZJ月份在.曰份d月才‘,沪‘、z‘、‘、/吸、了r、了了、龟r百、r.、Zr、了r‘几Z、、“利用益鸟防治落叶松林害虫的研究4二刘益康等促性腺激素与动情家兔卵巢中卵子成熟分裂的…     

抗生素和干扰素

923251鉴别扭甚按普类抗生素的筛选方法〔英万Etie双ne,G。…ZJ。Antibiot一1991,44(12)一1357~1366〔译自DBA,1992,11(5),。2一0256幻 筛选的第一阶段,用粘质沙雷氏菌(厅。帕‘沁彻,仰。ce助)2个菌株(一个是野生型氨基箱昔 (AMG)感受态菌株(S ma 62),另一个是专性AMG一杭性突变株(AG只10))分离具有产AMG型活力的菌株。用产链丝菌素的淡紫灰链霉菌菌株A TCC鱿6魂从AMG中区分出链丝萨素类抗生素。通过测定热处理对其生物学活性的影响,鉴别AMG型化合物。筛选的第二阶段,根据一组细菌苗株合成各种AMG失活酶时,各种AMG显示特定故…     

沙门氏菌IIIb的一个新血清型

从蛇肠内容物中分离到一株沙门氏菌,编号为S3188,符合沙门氏菌属的生化特性,但具有靛基质阳性的异常反应。该菌株能利用丙二酸钠,不发酵卫矛醇,迅速发酵乳糖,ONPG为阳性,具有双相H抗原,应归属于沙门氏菌IIIb。经抗原分析。该菌株的抗原式确定为53：1,Z13：c,n,(z15)…,是新的沙门氏菌血清型。     

涅斯捷连科氏菌属菌株的分离及系统学研究

从我国新疆及埃及东部高盐环境中分离到 4株形态上类似于涅斯捷连科氏菌属的革兰氏阳性菌株。以该属的 2个典型菌株 (NesterenkoniahalobiaDSM 2 0 5 4 1T和NesterenkonialacusekhoensisDSM 12 5 4 4 T)为对照 ,对 4个分离菌株进行了包括形态学 ,生长pH范围 ,温度范围 ,耐NaCl,KCl,MgCl2 ·6H2 O ,CaCl2 实验及酶学特性以及细胞化学组份、(G C)mol%含量测定 ,16SrDNA分析及DNA DNA杂交在内的多相分类研究。结果显示 ,4个分离菌株属于涅斯捷连科氏菌属 ,但与涅斯捷连科氏菌属的 2个有效发表种有显著差异 ,因此 4个分离菌株均为该属的新种