中性粒细胞胞外诱捕网在炎症相关疾病中的研究进展

中性粒细胞是抵御病原体入侵机体的第一道防线,通过趋化和吞噬作用使病原体失活,从而进行免疫防御,杀灭病原体。研究证实,中性粒细胞通过吞噬病原体、分泌抗微生物蛋白颗粒来杀灭病原微生物。2004年Brinkmann发现了一种中性粒细胞新型抗感染机制,即中性粒细胞经病原体活化刺激后释放中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trap,NET)至细胞外。NET是由双链DNA染色质和镶嵌在染色质上的抗菌蛋白构成的纤维网格状结构,通过网罗、捕获而杀灭病原体。诸多研究表明,NET在炎症相关疾病中起重要作用,其生成和降解会影响急慢性炎性疾病的病理过程。本文主要从NET的特征、产生机制、抗菌作用及其在炎性相关疾病中的作用等方面着手,概述其最新研究进展,为炎性疾病的治疗及其药物开发提供新的思路和方向。     

PAD4参与中性粒细胞胞外诱捕网的抗菌作用

蛋白质精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)是中性粒细胞胞外诱捕网(NET)介导的细菌杀灭途径中的重要免疫因子。PAD4催化组蛋白瓜氨酸化,促进细菌感染期中性粒细胞形成NET。PAD4/中性粒细胞在炎性因子或细菌作用下不能形成NET,PAD4/鼠相对于PAD4+/+鼠更易受细菌感染。     

中性粒细胞胞外诱捕网与急性肺损伤

中性粒细胞胞外诱捕网(NET)有助机体抵抗病原体入侵。研究表明NET与许多疾病的病理过程有关,包括肺部疾病。急性肺损伤(ALI)或急性呼吸窘迫综合征(ARDS),以及肺部的细菌、病毒、真菌感染都发现了NET。病原体和宿主因素刺激NET形成。NET的某些组分具有免疫原性,且能损伤宿主组织。形成与清除NET之间的平衡是有效杀灭病原体而损伤最小化所必需的,发现与开发调节NET形成与清除的物质有助于设计ALI/ARDS治疗方案。     

CARD9缺陷的暗色丝孢霉病患者中性粒细胞抗白念珠菌免疫功能的研究

目的探讨CARD9缺陷的暗色丝孢霉病患者中性粒细胞抗白念珠菌的免疫功能。方法提取CARD9缺陷患者及正常人外周血中性粒细胞,并使其与白念珠菌进行孵育。采用菌落计数法及MTT法检测中性粒细胞对白念珠菌的杀伤,流式细胞术检测中性粒细胞活性氧的产生及吞噬能力,电镜观察吞噬溶酶体的超微结构,流式微球检测试剂盒检测培养上清中IL-8的分泌情况。结果与对照组比较,CARD9缺陷患者中性粒细胞对白念珠菌孢子的杀伤及IL-8的表达存在缺陷,菌丝杀伤能力、活性氧的产生、吞噬能力以及吞噬溶酶体的结构无明显异常,且血清调理后杀伤能力以及IL-8的表达得到恢复。结论 CARD9蛋白在中性粒细胞杀伤白念珠菌孢子免疫过程中发挥着关键作用,血清调理可恢复该缺陷。     

中性粒细胞胞外诱捕网与子痫前期

子痫前期与母体先天免疫系统过度激活有关.激活的循环中性粒细胞形成细胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs).NETs由染色质-DNA、抗微生物肽和抗微生物酶构成,具有捕获与杀灭微生物的作用.中性粒细胞形成NETs是先天免疫应答机制之一.胎盘衍生因子IL-8和合体滋养细胞微粒激活循环中性粒细胞并产生NETs.子痫前期NETs含量增加提示NETs与子痫前期病因有关.     

粒细胞减少患者真菌感染的临床研究

真菌感染病例逐年增加,除了患者长期使用广谱抗生素、免疫抑制剂以及肿瘤、艾滋病等致人免疫力低下是发生真菌感染的重要发病因素外,现在人们对中性粒细胞减少导致真菌感染的研究也越来越多,很多资料已将中性粒细胞的减少作为真菌感染的主要因素,尤其是在血液病患者、肿瘤患者的治疗过程中,应注意其粒细胞的变化,避免因此造成的真菌感染。为了解住院患者在粒细胞减少的情况下发生真菌感染的情况及其真菌种类,本研究对2002～2004年3年间发生的真菌感染病例进行调查,结果报告如下。     

病原体逃逸中性粒细胞胞外诱捕网机制

中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是新发现的中性粒细胞抗病原机制,是天然免疫系统的重要组成部分。但病原体在进化中形成了针对NETs的免疫逃逸机制。不同的病原体逃逸NET的机制不同,本文主要介绍3种机制：降解NETs-DNA、表面分子机制和NETosis调控。     

中性粒细胞在抗结核免疫中的作用

结核病是世界范围内的重要传染性疾病之一,严重威胁人类健康。免疫细胞在抗结核免疫过程中起重要作用,各细胞亚群通过不同作用机制影响结核病的病程及转归。中性粒细胞为机体应对结核分枝杆菌感染的第一道防线,在宿主免疫应答过程中是一把双刃剑。一方面,机体感染结核分枝杆菌后,中性粒细胞于第一时间向感染部位聚集,通过多种方式对抗感染：中性粒细胞吞噬结核分枝杆菌后,通过自身凋亡而杀菌;参与形成肉芽肿,形成胞外陷阱来限制结核分枝杆菌的生长和传播;产生功能性细胞因子,调控宿主的抗结核免疫反应。另一方面,中性粒细胞还参与机体的病理损伤过程,甚至促进体内结核分枝杆菌的生长。本文综述了中性粒细胞在抗结核免疫中作用的最新研究进展。     

巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞及吞噬诱导巨噬细胞死亡的实时动态观察

巨噬细胞有效地吞噬清除凋亡的中性粒细胞,对急性炎症的消退、恢复机体的稳态至关重要.但目前对巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的动态过程以及巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞后的命运转归还知之甚少.本研究动态观察了巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的全过程,发现巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞过程也可分为识别黏附、内吞、消化和残体外排等阶段,同时观察记录了吞噬凋亡中性粒细胞后巨噬细胞被诱导激活死亡的动态过程.通过透射电子显微镜、激光共聚焦扫描显微镜以及特殊染色法显示,吞噬凋亡中性粒细胞诱导巨噬细胞死亡的方式有自噬、凋亡和胀亡等,其中自噬率为(8.00±2.00)%、凋亡率为(12.33±2.08)%、胀亡率为(3.66±1.50)%.这些结果表明,巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞后自身也经历自噬和凋亡过程,可能是巨噬细胞参与免疫反应的新机制.     

细胞外诱捕网介导的抗微生物途径

活化中性粒细胞与肥大细胞在细胞外形成纤维样诱捕网结构（ETs）。ETs以染色质-DNA为骨架,吸附有抗微生物肽和抗微生物酶组成,具有捕获与杀灭微生物的作用。由ETs介导的抗微生物途径构成了一种重要的先天免疫应答机制。     

持续灌注和静态保存对中性粒细胞凋亡的影响

为研究体外循环机持续灌注、间断压力灌注、单纯低温保存犬离体肺对支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞凋亡变化以及对肺泡巨噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的影响,探索最佳的离体肺保存方式,将30只Mongrel犬随机分成3组,为体外循环组、压力灌注组和低温保存组,每组10只。在保持机械通气的条件下,完整摘取双肺,3种不同方式保存离体肺,并按时间点留取支气管肺泡灌洗液标本。流式细胞仪检测犬离体肺支气管肺泡灌洗液中中性粒细胞凋亡,免疫组织化学法检测犬离体肺肺泡巨噬细胞对凋亡中性粒细胞吞噬。随着犬肺离体时间的推移,各实验组离体肺支气管肺泡灌洗液中凋亡的中性粒细胞明显减少,在每个时间点上,体外循环组中性粒细胞的凋亡最多,压力灌注组中次之,低温保存组中最少。各实验组吞噬凋亡中性粒细胞的巨噬细胞随着离体时间的延长呈逐渐减少的趋势,在肺离体各时间点上,体外循环组中巨噬细胞对凋亡中性粒细胞的吞噬清除优于间断压力灌注组和单纯低温保存组。采用体外循环机持续灌注犬离体肺,能增加中性粒细胞凋亡,促使吞噬细胞吞噬凋亡的中性粒细胞,避免发生凋亡延迟,从而减轻离体肺组织的缺血再灌注损伤,具有较好的肺保护作用。     

COPD急性加重期呼气冷凝液中性粒细胞趋化性增加与气道免疫功能障碍的关系

摘要 目的：探讨COPD急性加重期（AECOPD）呼气冷凝液中性粒细胞趋化性增加与气道免疫功能障碍的关系。方法：2018年4月到2021年5月选择在本院诊治的COPD患者88例作为研究对象,包括AECOPD患者48例（急性组）与COPD缓解期患者40例（缓解组）,检测两组中性粒细胞氧化吞噬百分率、呼气冷凝液CCL18与CC16含量、外周血T淋巴细胞亚群水平,同时记录气道总粘性阻力、气道总阻抗、近端气道粘性阻力等指标并进行相关性分析。结果：急性组的中性粒细胞氧化吞噬百分率低于缓解组（P<0.05）。急性组的呼气冷凝液CCL18、CC16含量与气道总粘性阻力、气道总阻抗、近端气道粘性阻力高于缓解组（P<0.05）。急性组的CD4⁺T淋巴细胞比例低于缓解组,CD8⁺T淋巴细胞高于缓解组（P<0.05）。二分类Logistic回归分析结果显示：中性粒细胞氧化吞噬百分率、气道总阻抗、CD4⁺T淋巴细胞比例、呼气冷凝液CCL18为导致AECOPD发生的重要因素（P<0.05）。结论：AECOPD患者伴随有呼气冷凝液CCL18、CC16含量增加与中性粒细胞氧化吞噬百分率降低,还伴随有气道阻力增加与免疫功能降低,中性粒细胞氧化吞噬百分率、气道总阻抗、CD4⁺T淋巴细胞比例、呼气冷凝液CCL18为导致AECOPD发生的重要因素。     

量子血疗对机体免疫功能影响的临床观察

该光量子血疗的患者,其治疗前后抽甸检测免疫功能指标发现,紫外线照射自血回输地确有提高高机体细胞免疫功能作用。治疗后淋巴细胞转化率,淋巴细胞亚群及中性粒细胞吞噬功能测定都有不同程度提高（Ｐ〈０．０１）。     

低聚糖奶粉与无低聚糖奶粉对稳定期COPD患者肺功能、营养状态及中性粒细胞氧化和吞噬功能影响的比较

目的：研究低聚糖对稳定期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺功能、营养状况及中性粒细胞氧化和吞噬功能的影响。方法：将符合纳入标准的稳定期COPD患者随机分成A组（试验组）（n=35）和B组（对照组）（n=26）。A组在2个月干预期内每日持续服用强化低聚糖中老年奶粉50g/d,B组则每日持续服用等量不含低聚糖的中老年奶粉,收集每组患者试验前后肺功能、血样分析营养指标及中性粒细胞氧化和吞噬功能。结果：2组肺功能及营养指标无显著差异,A组在干预后中性粒细胞氧化功能有明显提高,吞噬功能平均水平也有提高趋势,但未达到统计学意义,B组则无显著差异。结论：功能性低聚糖对肺功能及营养无明显改善,但能较明显地改善COPD患者中性粒细胞功能。     

JAK1/2抑制剂芦可替尼对中性粒细胞生存及免疫功能的影响

芦可替尼是一种免疫抑制剂,最早被用于治疗骨髓纤维化相关疾病,近期,又被临床上用于抑制急性移植物抗宿主病、新型冠状肺炎中的细胞因子风暴的发生。该文将深入探究芦可替尼对中性粒细胞存活及炎症因子分泌等免疫学功能的影响。研究中设溶剂对照组、0.1 μmol/L芦可替尼处理组、1 μmol/L芦可替尼处理组和5 μmol/L芦可替尼处理组。Percoll法分离的小鼠骨髓中性粒细胞,经芦可替尼处理0 h、24 h、48 h、72 h后通过流式细胞术分析小鼠骨髓中性粒细胞纯度及凋亡情况;经芦可替尼处理1 h后,通过免疫荧光法检测中性粒细胞吞噬酵母聚糖颗粒的能力,TAXIScan-FL趋化仪检测中性粒细胞趋向fMLP的迁移能力,涂布平板法检测中性粒细胞杀伤大肠杆菌的能力;经芦可替尼处理24 h后,ELISA、qPCR法检测经LPS(1 μg/mL)预处理和活化的中性粒细胞产生细胞因子的能力。结果表明,0.1 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L芦可替尼处理中性粒细胞24 h后,中性粒细胞的早期凋亡加速(P<0.05),吞噬指数增强(P<0.05),趋化能力和杀菌能力与对照组相比...     

AGM-S3基质细胞共培养对中性粒细胞自发凋亡及其免疫功能的影响

AGM-S3细胞是从小鼠主动脉–性腺–中肾区(aorta-gonad-mesonephros, AGM)分离的细胞系。该文通过建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性粒细胞存活和功能的影响。结果表明, AGM-S3细胞共培养显著延迟了中性粒细胞的死亡(半衰期从20 h延长到48 h),同时维持中性粒细胞正常的趋化、吞噬和活性氧释放功能。进一步研究表明,AGM-S3细胞可能通过分泌细胞因子(如IL-6、MCP-1和IL-1α等)激活中性粒细胞促存活信号通路(比如Akt),促进Mcl-1和Bcl-xl持续表达,且抑制Caspase-3分子活化。在腹膜炎小鼠模型中,将体外共培养24 h的中性粒细胞从尾静脉输注到小鼠体内,其可以正常募集到炎症部位。研究结论提示,AGM-S3细胞可以维持终末分化中性粒细胞的存活和功能,而且这些中性粒细胞在移植到小鼠体内后具有正常的免疫活性。该研究将为今后针对粒缺和难治性感染病人的输注,以及中性粒细胞功能修饰等研究提供新的策略和实验依据。     

大蒜油诱发小鼠中性粒细胞的抗肿瘤活性

大蒜油诱发的小鼠腹腔中性粒细胞具有活跃的形态学特征,显示出强阳性的过氧化氢酶反应。与酵母聚糖(zymosan A)共同孵育,CeCl_3电镜细胞化学沉淀技术显示,中性粒细胞吞噬zymosan A后呈现强烈的H_2O_2生成反应。大蒜油诱发的大鼠腹腔中性粒细胞与~(51)Cr标记的S180肿瘤细胞共同孵育,它与肿瘤细胞的结合能力以及对肿瘤细胞的杀伤能力都高于糖原诱发的小鼠腹腔中性粒细胞。     

中性粒细胞胞外诱捕网抗疣状毛癣菌感染的作用研究

目的观察到1例疣状毛癣菌(Trichophyton verrucosum,T.verrucosum)致须癣患者的局部皮损中存在大量中性粒细胞。以往文献报道中性粒细胞通过形成胞外诱捕网(Neutrophils extracellular traps, NETs)参与抗真菌免疫,但T.verrucosum能否诱导NETs形成,及NETs是否具有抗T.verrucosum作用尚不清楚,故探究中性粒细胞是否通过形成NETs参与杀灭T.verrucosum。方法收集患者病历资料。从患者组织分离、鉴定T.verrucosum。免疫荧光法检测患者及T.verrucosum感染小鼠组织中的NETs。T.verrucosum刺激正常人外周血中性粒细胞,免疫荧光法检测NETs的形成。NETs与T.verrucosum共孵育,提取T.verrucosum DNA,通过实时荧光定量PCR定量检测真菌数量,观察NETs对T.verrucosum的杀伤作用。结果 T.verrucosum感染患者及小鼠组织可见明显NETs。T.verrucosum与中性粒细胞共孵育后有明显NETs形成。与NETs孵育后T.verrucosum存活率低于对照组(P0.01)。结论 T.verrucosum可以诱导中性粒细胞产生NETs,NETs对T.verrucosum具有显著杀伤作用。     

深部真菌病发病机理及免疫治疗进展

机体被微生物侵犯后,可表现为不发病或发病呈轻、中、重度甚至死亡,这是微生物的毒力、菌量与机体防御能力间相互作用的结果。真菌感染也是如此。真菌感染后机体的防御反应包括非特异（天然）免疫及特异免疫（获得性）。前者为第一线防御,发生于感染初期,包括中性粒细胞（PMNL）、单个核细胞（MNC）、单核巨噬细胞（M-φ）、自然杀伤细胞（NK）、补体（C）、树突状细胞（DC）及诸多炎症介质、天然抗体等参与。     

Calpain裂解Atg5决定中性粒细胞发生自噬还是凋亡，以及C5a在其中的可能作用

通过阐明C5a、calpain和Atg5相互作用,为开展新的研究寻找方向．中性粒细胞凋亡控制炎症反应及其强度,多种疾病和中性粒细胞凋亡失调有关,但其发生机制尚未阐明．C5a为补体片段,有多种功能,如诱导中性粒细胞趋化、呼吸爆发、增强吞噬、颗粒酶释放和延迟凋亡．已知calpain涉及中性粒细胞功能及凋亡调节并对该凋亡发生具有特异性．不同刺激因素可通过不同路径调节不同calpain亚型的活性． 已有报道C5a可以通过调节calpain亚型活性而调节中性粒细胞的趋化反应．另外,自噬是真核细胞中广泛存在的生物过程,具有细胞保护作用,Atg5对于自噬体形成必不可少．Calpain可裂解Atg5为24 ku tAtg5,使其失去形成自噬体的功能并介导凋亡．Atg5参与了自噬和凋亡的转换．