Pm—1蝗虫病原菌的鉴定

从蝗虫自然病死虫尸上分离到的一株病原菌,按照《Bergey's Manual of Systematic Bacterio logy》鉴定方法,作了形态观察,生理生化和生态学实验,用Marmur和Doty的DNA热变性解链法,测得细胞中DNA的GC值含量为66.6％,对照检索表确定该菌株为产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes)。     

抑制Pm8抗性表达的遗传学研究及Pm8抗性抑制基因的染色体定位

对不同１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种中Ｐｍ８抗性表达的差异进行了遗传学及生化研究。结果表明,小麦抗白粉病基因Ｐｍ８位于１ＲＳ染色体上,但在一些１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种中,Ｐｍ８的抗性表达受一对位于小麦染色体组中的显性抑制基因所控制。生化研究结果显示,在种子蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱上的低分子量区域,有一条醇溶蛋白带（称为ＳＢ带）与Ｐｍ８的抗性表达紧密相关。所有ＩＢＬ·ＩＲＳ感白粉病基因型都含有ＳＢ带。利用ＳＢ蛋白带做生化标记,可以准确预测１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种对白粉病的抗感性。通过时１ＢＬ·１ＲＳ易位系品种格蓝森８１单体１Ａ种质的综合分析,进一步将Ｐｍ８抗性抑制基因定位于其相应的部分同源染色体１Ａｓ上。这一结果可能预示着小麦部分同源染色体之间的某些内在联系。     

小麦抗白粉病基因Pm23的RAPD标记

小麦抗白粉病基因Pm23对世界上很多麦区流行的白粉病表现高抗或免疫.本研究以Pm23和Chancellor为抗感亲本,用集群分离分析法对抗性基因Pm23进行了RAPD分析,从320个十碱基随机引物中筛选到一个与Pm23紧密连锁的相引相标记OPE051100. 对F2分离群体进行RAPD分析表明,该标记与Pm23基因之间的连锁距离为10.65±3.25 cM.该标记可以有效用于小麦育种分子标记辅助选择中.     

小麦抗白粉病基因Pm6的RAPD标记

从提莫菲维小麦转移到普通小麦中的小麦白粉病抗性基因Ｐｍ６是小麦白粉病（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｈｒａｍｉｎｉｓ ｆ ｓｐ．ｔｒｉｔｉｃｉ）的有效抗性基因。用７００个随机引物对Ｐｍ６近等基因系进行ＲＡＰＤ分析,发现引物ＯＰＶ２０可在抗病近等基因系中产生大小为２ｋｂ的稳定的多态片段。用该引物检测１０个其他携Ｐｍ６的渐渗系材料,均可稳定扩增出该２ｋｂ的多态片段。理一步用ＯＰＶ２０对Ｐｍ６Ｆ２（ＩＧＶ１－４６３     

与小麦抗白粉病基因Pm6紧密连锁的分子标记筛选

以Ｐｒｉｎｓ＊ＰＩ１７０９１４／７＊ＰｉｎｓＦ２分离群体对在Ｐｒｉｎｓ与其Ｐｍ６近等基因系ＰＩ１７０９１４／７＊Ｐｒｉｎｓ之间呈现多态性的ＲＦＬＰ标记进行遗传和图,发现８个多态性标中有３个与转称到普通小麦２Ｂ染色体长臂上的来源于。     

小麦抗白粉病基因Pm21的分子鉴定和标记辅助选择

利用小麦抗白粉病基因Ｐｍ２１的ＲＡＰＤ标记、ＳＣＡＲ标记和荧光源位杂交技术对小麦抗病育种材料中的抗白粉病Ｐｍ２１基因进行了分子鉴定和标记辅助选择。     

与小麦白粉病抗性基因Pm2紧密连锁PAPD标记的筛选研究

以２５６个随机引物对含小麦抗白粉病基因Ｐｍ２近等基因系进行ＲＡＰＤ分析,发现１７个随机引物的扩增产物在抗、感ＮＩＬｓ材料间表现多态性,且其中５个引物经４次以上重复,均获相同结果,其多态性标记分别为ＯＰＭ０８１６００、ＯＰＩ０４１７００、ＯＰＨ１９９００及ＯＰＭ１６８５０。当以这５个随机引物对１４个已知含Ｐｍ２基因的抗病材料及９个不含Ｐｍ２基因的感病材料进行检测时,只有标记ＯＰＩ０４１７００在１２个     

与小麦白粉病抗性基因Pm2紧密连锁RAPD标记的筛选研究

以２５６个随机引物对含小麦抗白粉病基因Ｐｍ２近等基因系进行ＲＡＰＤ分析,发现１７个随机引物的扩增产物在抗、感ＮＩＬｓ材料间表现多态性,且其中５个引物经４次以上重复,均获相同结果,其多态性标记分别为ＯＰＭ０８(１６００)、ＯＰＩ０４(１７００)、ＯＰＨ１９(１１００、ＯＰＥ０９(９００)及ＯＰＭ１６(８５０)。当以这５个随机引物对１４个已知含Ｐｍ２基因的抗病材料及９个不含Ｐｍ２基因的感病材料进行检测时,只有标记ＯＰＩ０４(１７００)在１２个抗病材料中出现（另两个抗病材料中未检测到）,而在９个感病材料中均未出现。进一步用 ＯＰI(０４)对１０２株（Ｃｈａｎｃｅｌｌｏｒｘ Ｕｋａ／８＊Ｃｃ）Ｆ２分离群体进行分析,估算出标记ＯＰＩ０４(１７００)与Ｐｍ２基因间的遗传距离为１２．２±３．３ｃＭ。     

表达T~+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

【目的】本研究利用Asd+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究。【方法和结果】通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC)。研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5kDa的外源保护性抗原rPmtC。C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为8.5×106CFU,毒力稍低于C500(LD50为4.4×106CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别。【结论】本研究利用Asd+平衡致死系统的原理构建表达T+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础。     

来自西尔斯山羊草的抗小麦白粉病基因Pm57抗性丧失突变体的筛选与鉴定

小麦近缘种属来源的抗白粉病基因是培育小麦抗病品种,防治白粉病危害的最重要基因来源。Pm57是位于西尔斯山羊草2S^s#l染色体长臂上的一个外源基因,对小麦白粉病具有苗期和成株期广谱抗性。为了创制Pm57白粉病抗性丧失突变体,利用基于基因突变体的植物抗病基因克隆新兴技术分离Pm57基因,选用0.625%的甲基磺酸乙酯(EMS)对1万粒小麦-西尔斯山羊草Pm57易位系89(5)69种子进行了诱变处理,M1大田密播种植,收获了1598个M2可育株系。初步对其中300个M2株系进行苗期白粉病抗性接种鉴定,并利用2个Pm57基因特异分子标记X2L4g9P4/HaeⅢ和X284274及小麦全国区试品系DUS测试所用的42对SSR核心引物对Pm57抗性丧失突变体进行鉴定,筛选出来自27个M2株系的真实抗性丧失突变体70个,Pm57基因抗性丧失突变体频率达到9.0%。本研究所获得的白粉病抗性丧失突变体为Pm57基因的后续克隆与抗白粉病分子机理研究提供了重要的材料基础。     

用新的分子标记方法（RAPD）分析小麦抗白粉病基因Pm4α的近等基因系

ＲＡＰＤ是一种新发展的分子标记技术,本实验利用这种技术对小麦抗白粉病基因Ｐｍ４ａ的近等基因系进行分析。在１００个随机引物中找到了３个引物在这对抗白粉病的近等基因系中所扩增出的带型出现差异。并根据理论计算所找到的差异与抗生基因Ｐｍ４ａ连锁的概率是０．７,即３个差异中应有２个标记与抗性基因连锁。     

小麦—簇毛麦易位系6VS—6AL中6VS的遗传传递及其所携Pm21基因的 …

以簇毛麦（Ｈａｙｎａｌｄｉａ ｖｉｌｌｏｓａ（Ｌ．）Ｓｃｈｕｒ）物种专化重复序列探针ｐＨｖ６２及小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｎ ａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）第六部分同源群短臂专化ＲＦＬＰ探针Ｐｓｒ１１３对肠９４－１３８（“扬麦１５８”的改良品系）与易位系９２Ｒ１４９配制的Ｆ２群体进行分析,观察到易位系中的６Ｖ短臂在杂交后代中的传递率为６９．５％,接近７５％的理论值。     

小麦-簇毛麦易位系 6VS/6AL中6VS的遗传传递及其所携Pm21基因的遗传稳定性分析

以簇毛麦(Haynaldiavillosa(L.)Schur)物种专化重复序列探针pHv62及小麦(TriticumaestivumL.)第六部分同源群短臂专化RFLP探针Psr113对扬94_138(“扬麦158”的改良品系)与易位系92R149配制的F2群体进行分析,观察到易位系中的6V短臂在杂交后代中的传递率为69.5%,接近75%的理论值。对来自同一个F1的另外147株F2群体以6个白粉菌菌株进行苗期抗病性测定,检测结果表明6VS上所携Pm21基因在向“扬麦158”小麦基因型转移时,按显性单基因遗传,并能很好地表达。     

小麦抗病基因Lr46/Yr29/Pm39、Sr2/Yr30和Lr68的遗传特性及其与主要农艺性状的关联分析

利用与抗病基因Lr46/Yr29/Pm39、Sr2/Yr30和Lr68等紧密连锁的分子标记,对小麦品种(系)‘RL6077’和‘西农979’构建的BC1F1和F2群体进行抗病基因遗传分析,结合主要农艺性状分析,探究小麦抗病基因Lr46/Yr29/Pm39、Sr2/Yr30和Lr68的遗传特性及其与主要农艺性状的关联性;并对检测的聚合有3个抗慢锈病基因(Lr68+Sr2/Yr30+Lr46/Yr29/Pm39)位点的聚合体进行SSR标记遗传背景回复率检测。结果表明:(1)F2群体中Lr68基因的传递率(65.41%)比理论值(75%)偏低,Lr46/Yr29/Pm39基因和Sr2/Yr30基因的传递率(分别为75.83%、74.53%)与理论值(75%)相符合;BC1F1群体中Lr68基因的传递率(44.27%)比理论值(50%)偏低,Lr46/Yr29/Pm39基因和Sr2/Yr30基因的传递率(分别为56.64%、55.11%)均比理论值(50%)偏高。(2)Lr46/Yr29/Pm39和Sr2/Yr30基因位点均与株高、穗长、穗下茎长、穗下节长呈极显著正相关关系;Lr68和Sr2/Yr30基因位点均与穗粒数呈显著或极显著正相关关系;Lr46/Yr29/Pm39基因位点与千粒重呈显著负相关、与单株成穗数呈显著正相关关系。(3)对BC1F1群体中聚合有Lr68+Sr2/Yr30+Lr46/Yr29/Pm39基因位点的92个聚合体的遗传背景回复率检测发现,轮回亲本‘西农979’遗传背景回复率最高达91.67%,其中遗传回复率达90%以上的聚合体有3株,占回交群体(655株)总体的0.46%。该研究结果为优异抗病基因资源‘RL6077’的进一步利用提供了理论参考,对创制小麦多种抗病新种质具有重要意义。     

PmST3 from <Emphasis Type="Italic">Pasteurella multocida</Emphasis> encoded by <Emphasis Type="Italic">Pm1174</Emphasis> gene is a monofunctional α2–3-sialyltransferase

Pasteurella multocida (Pm) strain Pm70 has three putative sialyltransferase genes including Pm0188, Pm0508, and Pm1174. A Pm0188 gene homolog in Pm strain P-1059 encodes a multifunctional α2–3-sialyltransferase, PmST1, that prefers oligosaccharide acceptors. A Pm0508 gene homolog in the same strain encodes a monofunctional sialyltransferase PmST2 that prefers glycolipid acceptors. Here, we report that the third sialyltransferase from Pm (PmST3) encoded by gene Pm1174 in strain Pm70 is a monofunctional α2–3-sialyltransferase that can use both oligosaccharides and glycolipids as efficient acceptors. Despite the existence of both Pm0188 and Pm0508 gene homologs encoding PmST1 and PmST2, respectively, in Pm strain P-1059, a Pm1174 gene homolog appears to be absent from Pm strains P-1059 and P-934. PmST3 was successfully obtained by cloning and expression using a synthetic gene of Pm1174 with codons optimized for Escherichia coli expression system as the DNA template for polymer chain reactions. Truncation of 35 amino acid residues from the carboxyl terminus was shown to improve the expression of a soluble and active enzyme in E. coli as a C-His₆-tagged fusion protein. This sialidase-free monofunctional α2–3-sialyltransferase is a useful tool for synthesizing sialylated oligosaccharides and glycolipids.