大岩桐叶片愈伤组织的诱导和植株再生

植物名称:大岩桐(Sinningia speciosa)。材料类别:幼叶片。培养条件:诱导愈伤组织培养基为MS+BA2.0mg/L(单位下同)十NAA0.01+2,4-D0.1～0.5;丛芽分化培养基为MS+BA2.0+NAA0.01～0.1;生根培养基为1/2MS+NAA0.5。培养温度     

人参愈伤组织的PSY基因遗传转化

将八氢番茄红素合成酶基因（PSY）重组于植物双元表达载体pBin438,得到重组质粒pBin438-PSY。用冻融法将其导入农杆菌EHA101中,采用叶盘法转化人参愈伤组织,对所获得的抗性细胞系进行PCR和Southern检测,并对表达产物进行了薄层层析（TLC）、光谱分析、高效液相色谱（HPLC）检测及含量测定。结果表明PSY基因已成功导入人参愈伤组织细胞基因组,并已得到高效表达,表达产物β-胡萝卜素含量为143μg·g^-1人参细胞干重。本研究利用转基因方法在人参愈伤组织细胞中成功地表达了八氢番茄红素合成酶基因,为进一步提高人参的营养价值奠定了基础。     

人参愈伤组织的PSY 基因遗传转化

将八氢番茄红素合成酶基因(PSY)重组于植物双元表达载体pBin438, 得到重组质粒pBin438-PSY。用冻融法将其导入农杆菌EHA101中, 采用叶盘法转化人参愈伤组织, 对所获得的抗性细胞系进行PCR和Southern检测, 并对表达产物进行 了薄层层析(TLC)、光谱分析、高效液相色谱(HPLC)检测及含量测定。结果表明PSY基因已成功导入人参愈伤组织细胞基因组, 并已得到高效表达, 表达产物b-胡萝卜素含量为143 ug.g-1人参细胞干重。本研究利用转基因方法在人参愈伤组织细胞中成功地表达了八氢番茄红素合成酶基因, 为进一步提高人参的营养价值奠定了基础。     

小麦愈伤转化成功

Florida大学和Monsanto公司的合作组曾用高速微射轰击法导入3种不同的选择性标记报道基因,产生了稳定转化的愈伤系。玉米和水稻的转化已获成功,只是小麦的转化始终使科学家们为难。California大学前任植物基因表达中心的负责人Michael Fromm是将此微弹转化法用于玉米的先驱者之一,他正在研究小麦的转化。以前曾成功地在小麦和大麦胚或悬浮培养的细胞中暂时性表达直接射入的基因。另外,小麦胚性悬浮培养物和原生质体培养物都可再生成株。由Sherri Brown、Diane Re和Michael Fromm在Monsanto,以     

玉米优良自交系愈伤组织基因枪转化的研究

利用基因枪将Ｂｔ基因导入玉米Ｅ２８幼胚愈合组织中,在潮霉素浓度为５ｍｇ／Ｌ选择培养基上,经过３５天的继代和分化２次选择及４５天继代继续３次选择后分化再生成植株,ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交结果表明,潮霉素基因及Ｂｔ基因已导入并整合到玉米基因组中,Ｅ２８２次选择的转化频率达到７．８％,显著地高于３次选择２．９％的转化频率,选择至再生的时间缩短２５天;自交系Ｐａｌ３７２次选择的转化频率为１３．３％     

枸杞叶片愈伤组织的诱导及植株的再生

枸杞属植物(Lycium haminifoliumMill)花粉粒发育成胚和植株的形成已有报导。本文报导枸杞叶外植体的愈伤组织诱导及其植株的再生。从未开花植株上摘取无病虫害的叶片作材料,先用流水冲洗除去尘土,然后在70％的酒精中浸20秒左右,再在含万分之二昇汞和5％安替福民的溶液中消毒4～5分钟(消毒时间不能过长,以免伤害叶片)。用无菌水淋洗3～5次后,在无菌条件下将叶片横切成1厘米左右的切段,接种在Murashige和Skoog培养基上,培养基附加激动素(K)2.0,吲哚乙酸(IAA)2.0或K4.0,IAA     

板栗愈伤组织瞬时转化体系的优化与应用

愈伤组织瞬时转化体系可初步快速地验证基因功能和鉴定相关表型。为提高板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,并鉴定板栗淀粉合成酶基因的功能,该研究以板栗‘燕山红栗’幼胚胚芽诱导形成的愈伤组织为材料,通过不同状态的愈伤组织和表达载体优化板栗愈伤组织瞬时转化体系;并构建板栗淀粉合成关键酶基因CmSSⅠ沉默载体,验证CmSSⅠ基因在板栗中的功能。结果表明:(1)愈伤组织可按照体细胞胚起动难易程度划分为胚性愈伤组织(EC_E)和胚性愈伤组织早期阶段(EC_DⅠ、Ⅱ、Ⅲ),且白色、外表相对分散的胚性早期阶段愈伤(EC_DⅢ)更适合板栗瞬时转化体系。(2)转化材料为胚性愈伤早期阶段(EC_DⅢ)时,RNAi沉默载体pK7GWIWG2(Ⅱ)RR-277的瞬时转化效率高达87.67%。(3)通过最适愈伤组织瞬时转化体系,基因CmSSⅠ在转基因愈伤组织中表达显著下调,且沉默CmSSⅠ阳性愈伤组织的总淀粉和支链淀粉含量显著降低,直链淀粉变化差异不显著。该研究提高了板栗愈伤组织瞬时转化体系的转化效率和稳定性,证明基因CmSSⅠ正调控板栗淀粉的合成,这为板栗基因功能的研究奠定了基础,进一步为分子辅助育种提供了技术平台。     

GFP基因转化香樟胚性愈伤组织的研究

以香樟胚性愈伤组织作为受体,利用根癌农杆菌介导法进行了绿色荧光蛋白基因(GFP)的遗传转化研究。经农杆菌侵染后的胚性愈伤组织通过共培养、选择培养后获得抗性愈伤组织和体胚,对抗性愈伤组织及体胚的诱导过程进行了GFP荧光检测。结果表明,GFP基因能在抗性愈伤组织和体胚中强烈表达,证明GFP基因能够在香樟遗传转化中得到应用。对抗性愈伤组织的PCR检测初步证实外源GFP基因已整合到香樟胚性愈伤组织的基因组中。     

用Ti质粒体外转化植物原生质体

进行遗传工程研究需要有一种方法把DNA引入宿主细胞,继而让其整合进宿主基因组并表达其基因功能。虽然,在哺乳动物、酵母和细菌中已有若干媒介DNA转移基因的方法。不过,还没有这样的方法可用于植物细胞。植物细胞吸收DNA的主要障碍是细胞壁,但用植物原生质体时,这一障碍是可所克服的。     

以花药愈伤组织为受体的水稻转化和RNA干扰研究

在优化花培诱导培养基成分的基础上, 通过延长花药愈伤组织在诱导培养基上培养的时间和降低共培养过程中农杆菌浓度等, 成功地建立了以花药愈伤组织为受体的农杆菌转化体系. 并将白叶枯菌抗性基因Xa21作为该体系的模式基因导入到多个粳稻品种的花药愈伤组织中, 共得到了145个独立的转基因株系. 分子检测和田间抗性检测发现其中的140个株系的基因组含有外源的Xa21基因, 包括单倍体45株、二倍体87株和混倍体植株8株. 根据后代性状分离比和染色体的FISH分析可以确定, 在87个二倍体植株中有15株为纯合的加倍单倍体转基因植株; 再加上田间自然加倍和由秋水仙碱处理单倍体所获得的28株加倍单倍体, 共得到了43个纯合的加倍单倍体转基因株系. 还将该转化体系用于反向遗传学的研究. 一个在植物体内能转录产生双链RNA(double strand RNA, dsRNA)发夹结构的质粒pZ2RNAi被导入到水稻单倍体基因组中, 该dsRNA的靶目标是水稻的OsMADS2基因的转录物, 结果表明, 在转pZ2RNAi的单倍体水稻中, 靶基因OsMADS2的表达被特异地抑制, 并导致花器官形态的明显改变. 因此, 单倍体转化体系与RNAi技术相结合有可能成为在水稻和其他植物中功能基因组研究的一个新途径.     

喜树愈伤组织的诱导及诱导子对愈伤组织中喜树碱含量的影响

通过组织培养的方法分别对喜树营养器官进行愈伤组织的诱导和继代,筛选红色、黄色和褐色3个不同的细胞系;运用HPLC法测定各愈伤组织中喜树碱的含量,并在培养基中外加诱导子,分析其对愈伤组织中喜树碱含量的影响。结果表明,经幼叶所诱导的愈伤组织中喜树碱含量相对高于其它,红色和黄色的细胞系在不同的外植体中其喜树碱含量均高于褐色的细胞系。但从整体看来,愈伤组织中喜树碱的含量远远低于原植物中的含量。外加诱导子对愈伤组织中喜树碱的含量有影响,浓度为0.1 mg·L^-1,1 mg·L^-1的水杨酸和茉莉酸甲酯处理的愈伤组织中喜树碱含量提高,0.1 mg·L^-1的水杨酸对喜树碱的积累有明显的促进作用,茉莉酸甲酯的影响不大;浓度为3 mg·L^-1,5 mg·L^-1的水杨酸处理的愈伤组织中,喜树碱含量降低;3 mg·L^-1的茉莉酸甲酯处理的愈伤组织中,喜树碱含量降低,5 mg·L^-1处理的愈伤组织中未检测到喜树碱。     

丹参不同愈伤组织诱导及遗传转化体系优化

为了获得满足不同目的组织培养材料和稳定高效的遗传转化体系,该研究以丹参叶片和茎段为外植体,采用含不同浓度的植物激素(植物生长物质)的Murashige Skoog(MS)培养基,探索诱导丹参产生不同愈伤的条件;采用正交法考察浸染时间、共培养时间、筛选压等对农杆菌介导的丹参遗传转化体系的影响,并根据出芽率及转化阳性率优化丹参遗传转化体系。结果表明:(1)能较快诱导丹参叶片产生愈伤的是MS+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)2,4-D;诱导茎较快产生愈伤的是MS+0.1mg·L~(-1)NAA+0.5 mg·L~(-1)6-BA;1 mg·L~(-1)反式玉米素(ZR)可能有利于诱导产生含有丹参酮的愈伤组织;1.0 mg·L~(-1)2,4-D较易诱导丹参愈伤组织生根。(2)以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件为浸染5 min、共培养1 d、卡那霉素30 mg·L~(-1)筛选,经PCR鉴定转基因阳性率为60%;而用10 mg·L~(-1)链霉素筛选阳性率达70%。该研究结果确定了丹参不同愈伤组织诱导条件,明确了以卡那霉素为筛选剂时农杆菌GV3101介导的丹参遗传转化的条件,换用10 mg·L~(-1)链霉素筛选时体系更加稳定、更易操作、更易重复。     

卡那霉素对地灵愈伤组织诱导和生长的影响

卡那霉素对地灵愈伤组织的诱导和生长均有抑制作用,随着卡那霉素浓度增加,愈伤组织形成的比率降低,质量增加幅度减小。不同的外植体对卡那霉素的敏感度不同,茎的敏感度明显高于叶片。当浓度超过30mg/L时,茎愈伤组织的诱导及生长几乎完全受到抑制。因此,在地灵的遗传转化中,30mg/L是卡那霉素的适宜浓度。     

碳源种类和浓度对愈伤组织生长的影响

有关植物组织和细胞培养研究工作的进展及其应用,已有全面而系统的评述。在组织和细胞的培养中,碳源是培养基的必要成分之一。碳源一般分为三类:碳水化合物、醇和有机酸。由于醇和有机酸作为碳源不能有效地被植物组织利用,有关工作不多。这里仅介绍碳水化合物作为碳源的研究,以供选择碳源时参考。     

何首乌愈伤组织诱导和植株再生

1　植物名称　何首乌 (Ｐｏｌｙｇｏｎｕｍｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ)。2　材料类别　蒙山阳坡路旁野生植株上的嫩芽。3　培养条件　诱导愈伤组织培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ 1ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＮＡＡ 1 ;(2 )ＭＳ 6 ＢＡ 2 ＮＡＡ 1 ;(3) 1 /2ＭＳ ＮＡＡ 0 .3;(4) 1 /2ＭＳ 2 ,4 Ｄ 0 .1 ;(5 ) 1 /2ＭＳ 2 ,4 Ｄ0 .3;(6 ) 1 /2ＭＳ 2 ,4 Ｄ 1 ;(7)ＭＳ 6 ＢＡ 3 2 ,4 Ｄ 1。芽分化培养基 :(8)ＭＳ 6 ＢＡ 1 ;(9)ＭＳ 6 ＢＡ 2 ;(1 0 )ＭＳ 6 ＢＡ 5 ＮＡＡ 0 .1 ;(1 1 )ＭＳ 6 ＢＡ 2 ＮＡＡ 0 .4;(1 2 …     

当归愈伤组织诱导和植株再生

运用改良的 B_5、MS、KU、NT、1/2 MS 培养基,从当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels]的根、叶片、叶柄、子叶、下胚轴等器官诱导愈伤组织和植株再生。试验证明:1.根的愈伤组织产生最快,生长旺盛,分化率高;2.植物激素在愈伤组织诱导和分化中起主导作用,且细胞分裂素(6-BA)与生长素(2,4-D,NAA)的适当配合有增效作用;3.培养基的种类对愈伤组织诱导和继代培养的影响差别不大,而对分化率有明显的影响,其中以改良的 B_5和 MS 培养基较好;4.由胚状体和愈伤组织分化芽。     

枣愈伤组织诱导和再生植株

以民勤小枣幼茎和幼叶为外植体,诱导出愈伤组织,用茎尖诱导生根获得再生植株。从茎段诱导的愈伤组织属淡绿色致密的Ⅰ型和白色疏松的Ⅱ型。它们都是非胚性愈伤组织。研究了渗透压、外植体取材时间等因素对愈伤组织诱导及生长的影响。幼嫩的材料易诱导出愈伤组织,在各种基本培养基中,以３／４ＭＳ培养基诱导率最高,暗培养较光下培养有利,３％￣５％蔗糖浓度最适宜,而高渗透压不利。各种激素对继代培养的作用依次是２,４－Ｄ〉     

元宝草愈伤组织诱导和器官分化

在 2 ,4 D 1或 2mg·L-1的MS培养基上 ,愈伤组织极易诱导 ,生长速度快。在 6 BA 2mg·L-1的MS培养基上带芽愈伤组织继代培养能力强 ,繁殖系数高。带叶茎段在BA或KT的诱导下 ,结节可直接产生不定芽 ,并分化成一圈成簇的丛芽     

核桃愈伤组织的诱导

植物名称:核桃(Juglans regia) 材料类别:核桃实生苗茎尖、叶片、叶柄、叶脉及子叶。培养条件:茎尖、叶片、叶柄、叶脉诱导愈伤组织的培养基为木本植物培养基(WPM),附加(mg/1,下同)NAA4,BA10,赤霉素2。诱导子叶愈伤组织的培养基为K培养基,附加 NAA5,BA0.5,赤霉素 2,在WPM和K培养基中都附加20％硫代硫酸钠5ml/1。培养温度为25℃±2℃,每日光照16 小时,光强度为20001ux。     

何首乌愈伤组织的诱导

研究了外植体、光暗条件、植物激素等因子对何首乌愈伤组织诱导的影响 ,以及 6 -BA和何首乌组织提取液对愈伤组织增殖的影响。结果表明 :茎段的愈伤组织诱导优于带侧芽茎段和叶片 ;光照有利于愈伤组织的诱导 ;4因子 4水平的正交实验表明 ,对何首乌茎段愈伤组织诱导的影响 2 ,4 -D >6 -BA >IBA >IAA ,最佳激素搭配是 :MS +2 ,4 -D 2mg L +6 -BA 1mg L +IBA1mg L或MS +2 ,4 -D 2mg L +6 -BA 2mg L +IAA 1mg L ;MS培养基中附加 6 -BA或组织提取液均促进愈伤组织的增殖。