异孢耳霉的分离和鉴定*

本文报道了1987年冬季在南平地区分离的一个腐生耳霉新纪录——异孢耳霉(Conidiobolus incongruus),分生孢子梗无色,不分叉,6—10×50—130μm,分生孢子无色,多数球形,少数亚球形至椭圆形,13—33×16—35μm,易萌发,多数形成菌丝体,少数可形成次生分生孢子或三生分生孢子,弹射在水琼脂上的分生孢子常能迅速产生小分生孢子。接合孢子球形,淡黄色,光滑,直径18—29μm,壁厚2.5—5μm。     

异孢耳霉的分离和鉴定*

本文报道了1987年冬季在南平地区分离的一个腐生耳霉新纪录——异孢耳霉(Conidiobolus incongruus),分生孢子梗无色,不分叉,6—10×50—130μm,分生孢子无色,多数球形,少数亚球形至椭圆形,13—33×16—35μm,易萌发,多数形成菌丝体,少数可形成次生分生孢子或三生分生孢子,弹射在水琼脂上的分生孢子常能迅速产生小分生孢子。接合孢子球形,淡黄色,光滑,直径18—29/μm,壁厚2.5—5μm。     

医学昆虫的病原真菌*

昆虫病原真菌在自然环境中对害虫数量起着抑制作用,在害虫的微生物防治中也占有独特的地位。长期以来,在应用昆虫病原真菌防治人畜害虫方面研究进展较为缓慢,六十年代以来才有较大的发展。本文介绍了近十年的发展概况,并讨论了影响这个研究领域迅速发展的原因及病原真菌在生物防治中应用的潜力。认为尽管至今对这类真菌了解还较少,但通过今后加强有关方面的研究工作,其应用前景是广阔的。     

球孢白僵菌凝乳弹性蛋白酶(BbPr1)的纯化与特性*

以几丁质为底物,加入基本盐培养基中,诱导球孢白僵菌（Beauveriabassiana）产生分解昆虫表皮的蛋白酶。诱导物中,蝉蜕诱导的蛋白酶总活性、比活较高,经超滤、离子交换层析、亲和层析、制备性IEF电洗脱纯化了一种有凝乳弹性蛋白酶（Pr1）活性的蛋白酶BbPr1。经SDS－PAGE电泳银染后是单带,HPLC凝胶过滤显示单峰。BbPr1为单体酶,分子量为33.6kD左右,pI为7.4。底物专一性测定显示,BbPr1能水解Phe或Leu形成的酸胺键和肽键。BbPrl可被PMSF抑制,表明其活性中心有Ser残基;BbPr1还可被胰凝乳蛋白酶抑制剂TPCK和凝乳弹性蛋白酶抑制剂TEI等所抑制;胰蛋白酶抑制剂beupeptin和Epianstatin,及胃蛋白酶抑制剂Pepstain对BbPr1活性无影响。还研究了BbPr1的最适作用pH和pH稳定性。     

整合型碱性蛋白酶基因工程菌中抗性基因的敲除*

要：利用大肠杆菌载体pET—韶a和穿梭载体PHY3肋队构建了敲除载体p10c,通过DP4A变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程茵BP旧1中的卡那霉素抗性基因(M),得到11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验,并为微生物来源的转基因产品安全性的研究提供了模型。     

碱性木聚糖酶研究进展*

木聚糖是一种在自然界中含量仅次于纤维素的丰富的可再生资源,木聚糖酶是一类可以将木聚糖水解成单糖和寡糖的酶,利用木聚糖酶将木聚糖分解后的产物被广泛应用于食品、造纸以及纺织等行业。木聚糖酶按其对酸碱环境的耐受能力分为碱性木聚糖酶、中性木聚糖酶和酸性木聚糖酶,其中碱性木聚糖酶适合应用于造纸工业中,尤其在造纸的制浆、促进漂白及废纸脱墨等多种工艺中,可以显著提高纸张质量,有效降低氯气排放量,从而减少对环境的污染。随着生物技术的进步,利用基因工程技术可以对碱性木聚糖酶进行分子改造,以提高其耐碱、耐热能力,扩大其在工业应用中的条件范围。介绍碱性木聚糖酶在分子改造方面的研究进展以及其在造纸漂白和制浆、废纸脱墨中的应用。     

飞虱虫疠霉液培菌丝的凝胶化及其杀蚜活性*

用丙烯酰胺淀粉凝胶包埋飞虱虫疠霉(Pandora delphacis)液培菌丝,制成含营养和不含营养的虫霉凝胶,并测试其产孢能力及对桃蚜(Myzus persicae)的侵染力。经持续9 d产孢观察,相同菌丝量条件下,含营养的虫霉凝胶的累计产孢量(1910.9 个/mm2）为不含营养的虫霉凝胶的3.14倍（608.5个/mm2）和对照（纯液培菌丝）的4.69倍（387.5个/mm2）。用虫霉凝胶的“孢子浴”接种桃蚜居群（成蚜与不同龄期若蚜的混合）,在2.23个/mm2的剂量下,接种后第7 d的死亡率达82.3%。结果表明,丙烯酰胺淀粉凝胶作为载体材料,与飞虱虫疠霉的基本生物学特性相容,对虫霉的剂型化具有重要意义     

极端微生物产碱性蛋白酶菌株的筛选及发酵条件研究

从深海的38份水样和泥样中筛选到一株产蛋白酶的菌株DY－A,其最适生长温度为10℃,能适应较大范围的pH值和盐度,此菌株只在酵母膏存在的情况下产酶,不利用单一氮源,最适产酶条件为,pH10.0,10℃,接种量0．5％,200r/min摇床培养40－72h,粗酶液的最适作用温度为40℃,最适pH值为10,在pH9-12内稳定,是一碱性蛋白酶。     

一株地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究I.

从皖北盐碱地土样中分离到 0 1 1菌株 ,对其进行了菌种鉴定以及胞外碱性蛋白酶的初步研究。结果表明 :0 1 1菌株符合地衣芽孢杆菌种的特征 ,但该菌芽孢端生、孢囊膨大、中度耐盐、高度耐碱 ,可在NaCl浓度为 1 3%和pH1 1的培养基中生长 ,这些特征又不同于该种几个模式株 ,因而将 0 1 1菌株鉴定为地衣芽孢杆菌的一个亚种 ,命名为地衣芽孢杆菌砀山亚种(Bacilluslicheniformissubsp .dangshanensis)。该菌在发酵培养基中能产生较高产量的胞外碱性蛋白酶 ( 72 5u/mL)。酶的最适作用条件 :60℃、pH9.0 ,该酶在pH6.0～ 1 1范围内稳定     

棉铃虫幼虫中肠主要蛋白酶活性的鉴定

根据棉铃虫Helicoverpa armigera(Hubner)中肠酶液对蛋白酶专性底物在不同pH下的水解作用,棉铃虫中肠的3种丝氨酸蛋白酶得到鉴定。它们是：强碱性类胰蛋白酶,水 解a-N-苯甲酰-DL-精氨酸-p-硝基苯胺的最适pH在10.50以上;弱碱性类胰蛋白酶,水解p-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯的最适pH为8.50～9.00;类胰凝乳蛋白酶, 水解N一苯甲酰-L-酪氨酸乙酯的最适pH亦为8.50-9.00。中肠总蛋白酶活性用偶 氮酪蛋白测定,最适pH亦在10.50以上。Ca²⁺对昆虫蛋白酶无影响,Mg²⁺仅对弱碱性类胰蛋白酶有激活作用。对苯甲基磺酰氟和甲基磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮对弱碱性类胰蛋白酶的抑制作用较强,而对强碱性类胰蛋白酶的抑制作用较弱。甲基磺酰-L苯丙氨酸氯甲基酮除能抑制类胰凝乳蛋白酶外,还能激活弱碱性类胰蛋白酶。对牛胰蛋白酶有强抑制作用的卵粘蛋白抑制剂对昆虫蛋白酶却无抑制作用。大豆胰蛋白酶抑制剂对该虫的3种丝氨酸蛋白酶均有强的抑制作用。     

复合诱变原生质体选育耐热碱性蛋白酶高产菌

以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)53号为原始菌株,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行复合诱变,对大量再生突变株进行筛选,最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌53-G38-6,产酶活力由1104U/ml提高到22080U/ml。适宜的发酵条件:培养基(％)胰蛋白胨1,酵母膏0.5,玉米粉5,Na_2HP0_4·12H_20 0.4,KH_2P0_4 0.03,Na_2CO_3 0.1,自然pH。42℃旋转培养44～48h,得到的蛋白酶热稳定性强,60℃处理1h剩余酶活55％。酶反应最适条件:62℃,pH10.0,在pH9～10.5范围内稳定。     

PURIFICATION AND PROPERTIES OF DETERGENT-COMPATIBLE EXTRACELLULAR ALKALINE PROTEASE FROM Scopulariopsis spp.

A fungal alkaline protease of Scopulariopsis spp. was purified to homogeneity with a recovery of 32.2% and 138.1 U/mg specific activity on lectin-agarose column. The apparent molecular mass was 15 ± 1 kD by sodium dodecyl sulfate polyacryalamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). It was a homogenous monomeric glycoprotein as shown by a single band and confirmed by native PAGE and gelatin zymography. The enzyme was active and stable over pH range 8.0–12.0 with optimum activity at pH 9.0. The maximum activity was recorded at 50°C and remained unaltered at 50°C for 24 hr. The enzyme was stimulated by Co²⁺ and Mn²⁺ at 10 mM but was unaffected by Ba²⁺, Mg²⁺, Cu²⁺, Na⁺, K⁺, and Fe²⁺. Ca²⁺ and Fe³⁺ moderately reduced the activity (～18%); however, a reduction of about 40% was seen for Zn²⁺ and Hg²⁺. The enzyme activity was completely inhibited by 5 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and partially by N-bromosuccinimide (NBS) and tocylchloride methylketone (TLCK). The serine, tryptophan, and histidine may therefore be at or near the active site of the enzyme. The protease was more active against gelatin compared to casein, fibrinogen, egg albumin, and bovine serum albumin (BSA). With casein as substrate, Km and Vmax were 4.3 mg/mL and 15.9 U/mL, respectively. An activation was observed with sodium dodecyl sulfate (SDS), Tween-80, and Triton X-100 at 2% (v/v); however, H₂O₂ and NaClO did not affect the protease activity. Storage stability was better for all the temperatures tested (?20, 4, and 28 ± 2°C) with a retention of more than 85% of initial activity after 40 days. The protease retained more than 50% activity after 24 hr of incubation at 28, 60, and 90°C in the presence (0.7%, w/v) of commercial enzymatic and nonenzymatic detergents. The Super Wheel–enzyme solution was able to completely remove blood staining, differing from the detergent solution alone. The stability at alkaline pH and high temperatures, broad substrate specificity, stability in the presence of surfactants and oxidizing and bleaching agents, and excellent compatibility with detergents clearly suggested the use of the enzyme in detergent formulations.     

新蚜虫疠霉连续液体培养的菌丝生物量、产孢量及杀蚜毒力

继代培养常被疑为虫霉菌种毒力下降或某些生物学性状发生改变的原因之一。从研究新蚜虫疠霉 (Pandoraneoaphidis)固体平板菌落的液体培养获得的初始菌液出发 ,连续 6次继代液培 ,测定了其在萨氏营养液中继代培养生产的菌丝生物量、产孢量及其对桃蚜 (Myzuspersicae)的毒力。在初始菌液的生物量 8 8mg mL和产孢量 7 2× 1 0 5孢子 mg的条件下 ,以三种转接比 (种液 营养液 ,v v)连续 6次继代培养 ,在 1 2 0转接比下的菌丝生物量和产孢量分别为 6 4～ 1 0 0mg mL和 7 3× 1 0 5～ 1 0 8× 1 0 5孢子 mg,在 2 2 0下为 5 7～ 8 5mg mL和 1 0 0× 1 0 5～ 1 2 1× 1 0 5孢子 mg ,在 4 2 0下为 5 5～ 1 0 9mg mL和 6 4× 1 0 5～ 1 0 9× 1 0 5孢子 mg。方差分析表明 ,继代培养对生物量和产孢量均无显著影响 (P <0 0 5)。用初始菌液和 1 2 0转接比下继代培养的菌液制备而成的接种体对桃蚜进行两组毒力测定 ,每一组测定的接种…     

S-PI对香菇酸性蛋白酶的抑制机理及其促进出菇的生化解释

S-PI对纯化的香菇酸性蛋白酶具有强烈的抑制作用,10μmol／L的S-PI可使酶活降低77％,这种抑制属于可逆竞争抛物线型抑制。经25μmol／L酸性蛋白酶水解6小时后,香菇胞外酸性磷酸酶的活性从24．6单位降低到20．8单位,同时C1酶和Cx酶的活性分别比对照降低了76％和58％,这表明香菇酸性蛋白酶不仅直接左右着香菇发育的氮代谢,同时也间接地影响着碳代谢及能量转换。     

EFFICIENT PROTEOLYSIS AND APPLICATION OF AN ALKALINE PROTEASE FROM HALOPHILIC Bacillus sp. EMB9

A salt-stable alkaline protease from moderately halophilic Bacillus sp. EMB9, isolated from the western coast of India, is described. This protease was capable of efficiently removing silver from used/waste X-Ray films, as well as hydrolyzing defatted soy flour with 31% degree of hydrolysis (DH). Production of the protease was optimized by using response surface methodology. Ca²⁺ and NaCl were the most critical factors in enhancing the yield. Under optimized culture conditions, a maximum of 369 U protease/mL was obtained, which is quite comparable to the yields of commercial proteases. The elevated production level coupled with ability to efficiently hydrolyze protein-laden soy flour and complete recovery of silver from used X-Ray films makes it a prospective industrial enzyme.