对德氏乳杆菌DM8909菌株的药理学研究

由大连医科大学微生态学研究所从阴道中分离的德氏乳杆菌 DM890 9菌株经实验证明 ,其具有产乳酸和 H2 O2 的能力。为研究本菌株是否具有继续开发的前景 ,我们对其毒性及一般药理学进行了研究 ,现报告如下 :1　材料与方法1 .1　菌种及菌粉来源　实验采用的菌种是德氏乳杆菌 DM890 9菌株 ,其实验用菌粉系采用 DM890 9菌株经小罐发酵、离心分离、冷冻干燥、乳糖稀释制成 ,均由大连医科大学微生态学研究所提供。1 .2　急性毒性试验1 .2 .1　实验动物　昆明种小鼠 ,体重 ( 2 0± 2 ) g,雌雄兼用 ,共 5 0只 ,随机分成 5个剂量组 ,每组 1 0只。…     

对德氏乳杆菌DM8909菌株的发酵工艺研究

德氏乳杆菌 DM890 9菌株是大连医科大学微生态学研究所分离驯化的一株兼性厌氧菌 ,主要用于防治非特异性阴道炎等妇科疾病。本实验通过对德氏乳杆菌 DM890 9菌株进行摇瓶、小型全自动发酵罐和 5 0 0 L发酵罐发酵工艺学研究 ,考察其发酵工艺中试条件。现将研究结果报告如下 :1　材料与方法1.1　菌种　本研究所使用的菌种德氏乳杆菌 DM890 9(L actobacillus debrueckii subsp.lactis)由大连医科大学微生态学研究所提供。1.2　培养基　摇瓶种子培养基、小罐发酵培养基及大罐发酵培养基均采用 L BS培养基。1.3　培养方法1.3.1　摇瓶培养　…     

对德氏乳杆菌DM8909菌株的临床药代动力学研究

本文对大连医科大学微生态学研究所研制的阴道乳杆菌活菌制剂进行药代动力学研究 ,目的是为了探讨德氏乳杆菌活菌阴道制剂在正常志愿者阴道中的变化情况 ,确定临床观察的给药剂量、间隔时间和给药方法。现将有关试验情况报告如下 :1　材料与方法1 .1　药代动力学试验研究对象　为 1 0名志愿者进行阴道乳杆菌活菌动态研究。1 .2　药品来源　定菌生 DM890 9由大连医科大学科达药业有限公司提供 ,批号 961 0 2 0。1 .3　试验设计　分 3个剂量组 ,单次阴道给药 ,低剂量组 ( 0 .2 5× 1 0 6CFU/粒 )、中剂量组 ( 0 .2 5×1 0 7CFU/粒 ) ;高剂…     

德氏乳杆菌DM8909冻干工艺及产品稳定性研究

益生菌制剂的生产 ,除菌种的遗传特征影响其产品稳定性因素外 ,发酵、分离、冻干、分装等多个生产环节都会影响其产品稳定性。本文介绍德氏乳杆菌 DM890 9菌株冻干保护剂的筛选及产品稳定性及菌种稳定性的研究。1　材料与方法1 .1　菌种　德氏乳杆菌 DM890 9( L actobacillus de-brueckii subsp.lactis) ,由大连医科大学微生态学研究所提供。1 .2　设备　离心机采用日立公司生产的 CR- 2 2连续流式离心机 ;冷冻干燥设备采用美国 FTS sys-tems公司生产的 Dura- stopμp型冷冻干燥机。1 .3　保护剂　脱脂奶粉、谷氨酸钠、海藻糖、乳糖等…     

对乳杆菌DM8909菌株质粒的检测

德氏乳杆菌乳酸变种（ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｕｓｄｅｂｒｕｅｃｋｉＳｕｐｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）是阴道正常菌群成员之一,探讨该菌株是否存在质粒对于研究乳杆菌耐药性具有一定意义。现将ＤＭ８９０９质粒检测情况报告如下。１材料与方法１１菌株与培养基菌株德氏乳杆...     

德氏乳杆菌DM8909菌株对细菌性阴道病治疗的Ⅱ期临床试验研究

从微生态学的角度出发 ,通过生态制剂调整疗法 ,扶正和保护阴道内的正常菌群的组成和比例 ,恢复其自然的抵抗外来菌侵扰的能力 ,促进其本身的自净作用是治疗此类疾病的一种必然趋势。大连医科大学微生态学研究所在调查大量健康妇女和患病妇女阴道菌群的基础上 ,阐明了阴道菌群与妇女阴道疾病的关系 ,同时开发出一种用于防治妇女阴道细菌病及阴道菌群失调的微生态调节剂。在基础研究完成之后 ,经过报批 ,1 996年经卫生部药品评审中心批准 ,进行 期及 期临床研究。根据卫生部药政局 ( 96)制申体第 30号批件 ,指定北京协和医科大学为临床观察…     

乳杆菌DM8909菌株抑制小鼠阴道感染的研究

目的 :探讨乳杆菌 DM880 9菌株对小鼠阴道内其他菌群的抑制及调整阴道菌群的作用。方法 :通过用阿莫西林钠溶液对小鼠阴道冲洗处理后 ,接种致病性大肠埃希菌 EPEC10 4 ,建立起大肠埃希菌在小鼠阴道内的定植 ;用乳杆菌 DM890 9菌液冲洗治疗来去除大肠埃希菌 EPEC10 4在小鼠阴道的定植。结果 :通过各组小鼠阴道冲洗液检出的平均对数值比较 ,乳杆菌治疗组的小鼠阴道内大肠埃希菌的数量 ( 3.82±0 .6 2 )较自然恢复组小鼠阴道内大肠埃希菌的数量 ( 6 .72± 1.16 )减少明显 ( P<0 .0 5 ) ,而且治疗组的症状好转率 ( 8/10 )显著好于自然恢复组的症状好转率 ( 2 /10 ) ( P<0 .0 5 )。结论 :乳杆菌 DM890 9菌株能有效去除大肠埃希菌 EPEC10 4在小鼠阴道的定植和改善小鼠外阴的炎症症状     

对DM8909菌株治疗菌群失调性阴道病作用机制的研究

自 Doderlein( 1 894)首次报道乳杆菌以来 [1] ,人们普遍认为 ,乳杆菌是阴道优势菌群 ,能抑制内源性及外源性病原菌的过度生长 ,对维持阴道生态平衡起重要作用。资料指出 ,非特异性 (细菌性 )阴道炎的发病原因是阴道乳杆菌生物拮抗活性降低或消失 [2 ]。虽然许多研究者用外源性乳杆菌调整肠菌群失调及治疗非特异性阴道炎具有一定效果 [4 ] ,但乳杆菌产生保护作用的机制仍不十分清楚。本试验以从阴道分离的乳杆菌 DM890 9菌株作为试验菌株进行了乳杆菌治疗菌群失调性阴道病的机制研究 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 .1　降低阴道 p H1…     

乳杆菌DM8909对阴道上皮细胞粘附现象的初步研究

本文分析了乳杆菌DM8909菌株及自阴道分离的肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌对阴道上皮细胞的粘附能力。结果显示,在正常阴道酸性条件(pH3.5—4.5)下,DM8909菌株对阴道上皮细胞的粘附能力明显高于肠杆菌(P<0.01)、葡萄球菌(P<0.01)、白色念珠菌(P<0.01);随pH增加,DM8909粘附能力降低,肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌粘附能力增强;DM8909菌株能较强地抑制肠杆菌、葡萄球菌对阴道上皮细胞的粘附。本文提示,乳杆菌粘附形成的空间占位是防止其他菌对阴道组织附着的一个重要的保护性机制。     

乳杆菌DM8909对大肠杆菌粘附阴道上皮细胞抑制作用的研究

本文对乳杆菌ＤＭ８９０９对大肠杆菌粘附阴道上皮细胞的抑制作用进行了研究。采用３Ｈ－ＴｄＲ将由阴道分离的大肠杆菌进行同位素标记。刮取健康妇女阴道上皮细胞与其进行体外粘附试验作为对照组,试验组先行阴道上皮细胞与乳杆菌ＤＭ８９０９粘附后,再加入标记的大肠杆菌。结果显示：试验组阴道上皮细胞粘附的大肠杆菌的ｃｐｍ值明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）,说明乳杆菌ＤＭ８９０９能有效地抑制大肠杆菌对阴道上皮细胞的粘附。     

妊娠女性阴道中两种德氏乳杆菌亚种的生物学特性

目的 探讨妊娠女性阴道中德氏乳杆菌的生物学特性,以供临床进一步研究。方法 采用质谱鉴定仪初步鉴定菌种,再用16S rRNA基因和一代测序技术进行确认,同时观察德氏乳杆菌在培养基上的生长特征、染色情况、生化反应和抑菌现象。结果 在妊娠女性阴道中首次分离出德氏乳杆菌印度亚种和sunkii亚种。两种细菌16S rRNA基因扩增产物1 438 bp中存在3个碱基的差异。两种细菌均为革兰阳性兼性厌氧长杆菌。德氏乳杆菌印度亚种菌落边缘不整齐、菌落粗糙,而德氏乳杆菌sunkii亚种菌落边缘整齐微凸起且中间凹陷、菌落湿润,都能产生α-溶血环。两种细菌均能产生精氨酸双水解酶1(ADH1)、精氨酸双水解酶2(ADH2s)、丙氨酸芳胺酶（AlaA）、丙氨酸—苯丙氨酸—脯氨酸芳胺酶（APPA）,分解蔗糖（SAC）和D-葡萄糖（dGLU）,同时奥普托欣耐受试验（OPTO）呈阳性,过氧化氢试验为阴性,能分解葡萄糖产酸。两种菌都能抑制金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的生长。结论 两种德氏乳杆菌亚种核苷酸序列存在单个碱基差异,直接影响其部分生物学特性。     

乳杆菌DM9811发酵液的挥发性脂肪酸组分分析

目的：通过分析乳杆菌DM9811发酵液的挥发性脂肪酸,探讨乳杆菌对机体作用的分子机制。方法：采用高压气相色谱方法。结果：乳杆菌DM9811发酵液中存在乙酸、9-十六碳烯酸,十六烷酸,9,12-十八碳二烯酸,9-十八碳烯酸,其中乙酸浓度为1.6mg/ml。结论：乳杆菌DM9811发酵液中除含有乙酸外,还含有十六～十八碳饱和与不饱和脂肪酸。     

乳杆菌DM8909对金黄色葡萄球菌与阴道上皮细胞粘附影响的研究

本文对乳杆菌ＤＭ８９０９对阴道主要致病菌金黄色葡萄球菌与阴道上皮细胞的粘附影响作了补充实验。将等量ＤＭ８９０９液与金黄色葡萄球菌液同时与上皮细胞粘附进行了观察。结果表明,体外试验中,在ｐＨ７２情况下,乳杆菌与葡萄球菌同时加入时葡萄球菌粘附数量比葡萄球菌单独粘附少（Ｐ＜００１）,乳杆菌与金葡菌粘附数量相差不大（Ｐ＞００５）;乳杆菌与金葡菌先于ｐＨ４５下作用８１２ｈ,然后与上皮细胞同时孵育２小时,粘附的乳杆菌与金葡菌量比ｐＨ７２时均有减少,而金葡菌量比其单独粘附明显减少（Ｐ＜００１）,且明显少于乳杆菌（Ｐ＜００１）。说明乳杆菌能抑制葡萄球菌对阴道上皮细胞的粘附     

保加利亚乳杆菌H+-ATPase缺陷型菌株的筛选

【目的】从传统乳制品中筛选具有新霉素抗性的H+-ATPase缺陷的德氏乳杆菌保加利亚亚种自发突变株,为最终开发弱后酸化的酸奶发酵剂奠定基础。【方法】利用API 50 CH细菌鉴定系统和16s rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定。新霉素作为筛选压力,筛选具有新霉素抗性自发突变菌株,比较亲本和突变菌株的H+-ATPase活力及其代谢情况。【结果】从内蒙古地区的传统发酵酸奶中分离鉴定出一株德氏乳杆菌保加利亚亚种（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）,并命名为KLDS 1.9201。以此为出发菌株,筛选出两株H+-ATPase缺陷的自发突变株,分别命名为KLDS 1.9201-1、KLDS 1.9201-4,它们的H+-ATPase活力分别比亲本KLDS 1.9201降低了46%和60%。在MRS培养基中生长24 h后,KLDS 1.9201、KLDS 1.9201-1和KLDS 1.9201-4对初始葡萄糖的代谢率分别为65%、41%和31%,终产物中乳酸的浓度分别为26g/L、18g/L和15g/L,突变菌株的生物量均低于亲本。【结论】H+-ATPase活力降低的德氏乳杆菌保加利亚亚种的自发突变株具有较低的生长速率和弱产酸能力,它们可被用于制作弱后酸化的酸奶发酵剂。     

德氏乳杆菌保加利亚亚种电转化平台的构建和优化

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisub sp.bulgaricus)是最具经济价值的乳酸菌之一,在世界上广泛应用于酸奶和其它发酵乳生产。当前对该菌的代谢机制研究甚少。外源基因的转化效率是制约其分子代谢机制研究的重要因素。本研究以pMG36c为材料,对L.delbrueckiisub sp.bulgaricus CH3进行电转化条件研究。结果表明,在电转化过程中,电场强度、质粒的浓度、细胞生长状态均对转化效率有明显影响,得到了该菌株的最适电转化条件为:对数初期的细胞,质粒浓度为100 ng/50μl菌液,在10 kV/cm电场强度下电转化,转化后细胞在复壮培养液中培养3 h后涂布选择性培养基,转化率可达2.6×103CFU/μg DNA。以甘氨酸、醋酸锂、二硫苏糖醇处理细胞壁,发现醋酸锂和二硫苏糖醇共同处理对转化效率有明显改善,可提高转化效率。     

鼠李糖乳杆菌-格氏乳杆菌联用对阴道致病菌的抑制作用

目的本文通过提取细菌基因组进行16S rDNA PCR扩增和测序,分析菌株的进化树分支,鉴定一株乳酸菌菌株RD-0060并检测RD-0060与已有菌株RD-0046联用的抑菌能力和细胞粘附能力。方法结合现有菌株RD-0046(格氏乳杆菌,Lactobacillus gasseri),采用牛津杯法研究RD-0060单菌、RD-0060和RD-0046联用抑制致病菌的能力。通过共培养细菌和阴道上皮细胞VK2/E6E7,研究RD-0060单菌和RD-0060/RD-0046二联菌粘附能力。结果 RD-0060为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus),具有抑制阿托波菌、阴道加德纳菌和常见好氧型病菌的功能,对阴道上皮细胞也有较强的粘附能力;RD-0060和RD-0046二联菌的抑菌效果和细胞粘附能力比单菌株更强。结论鼠李糖乳杆菌和格氏乳杆菌联用能显著抑制阴道致病菌生长,并且能够大量粘附阴道细胞,而且两菌株联用有协同效果,具有良好的临床应用和开发前景。     

罗伊氏乳杆菌的益生功能

罗伊氏乳杆菌是目前已报道的几乎可存在于所有脊椎动物和哺乳动物肠道内的乳酸杆菌,是具有益生功效的肠道益生菌.通过对罗伊氏乳杆菌良好的肠道定植能力和其产生的罗伊氏菌素的介绍,阐明其可能的益生作用机理.重点论述了罗伊氏乳杆菌促进人类和动物健康功能的研究进展,并探讨了今后罗伊乳杆菌益生菌制剂的工业化发展趋势.     

植物乳杆菌ST-Ⅲ菌株降胆固醇作用的研究

ST-Ⅲ菌株是经体外体内实验证实的具有降低胆固醇功能的一株植物乳杆菌,本实验对其体外降胆固醇机理进行了研究.结果表明,植物乳杆菌ST-Ⅲ菌株是通过同化作用和沉淀作用来共同降低胆固醇,其中同化作用为主导作用,可降低胆固醇76.38ug/mL(25.5%);沉淀作用为辅助作用,可降低胆固醇44.62ug/mL(14.85%);并且沉淀作用和pH值具有相关性,在控制pH6.0和不控制的条件下,分别为29ug/mL,与41ug/mL,这表明在酸性条件下ST-Ⅲ菌株的沉淀作用更易发生.在抗超声破碎实验中发现添加有胆固醇培养的ST-Ⅲ株抗超声能力明显高于对照的ST-Ⅲ菌株,这有可能是胆固醇进入到细胞膜中改变其结构增强韧性所致;在细胞荧光标记检测实验中也发现了胆固醇能改变细胞膜的组成成分,导致通透性变化,添加有胆固醇培养的ST-Ⅲ菌株荧光强度为106.22,仅为对照组的15.1%.     

有机溶剂与乳杆菌相容性的研究

以乳酸发酵——溶剂萃取耦合过程为背景,研究了十二种有机溶剂在发酵培养基中的不同浓度水平,对德氏乳杆菌(LactobacilIus delbreuckii)生理活性的影响。根据乳杆菌生理活性随溶剂浓度变化的特征,将有机溶剂与乳杆菌的相容性分为四种类型,对比溶剂在水中溶解度与溶剂对乳杆菌特征毒性浓度的相对大小,对四种类型作了定性描述。