IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响

探讨IL-18基因转染对大鼠C6胶质瘤细胞生长特性的影响。用MTT法和流式细胞术检测C6／IL-18细胞和C6细胞的增殖特性和细胞周期分布。免疫细胞化学检测C6／IL-18细胞和C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、波形蛋白表达。结果显示,与C6细胞相比C6／IL-18细胞的增殖能力降低,G0/G1期细胞增多而G2／M期细胞减少;PCNA、波形蛋白表达降低。研究表明,IL-18基因具有抑制C6胶质瘤细胞增殖、降低其恶性程度的作用。     

人胎脑源性神经前体细胞致瘤性评价

目的:研究体外培养的人胎脑源性神经前体细胞的致瘤性。方法:将人胎脑源神经前体细胞体外培养至第1、25、40、60代,且每代细胞分别制备成神经球及单个细胞混悬液两种制剂,并取293T细胞作为阳性对照,共9组,每组5只,分别皮下接种于4~8周龄的BALB/C裸鼠,接种后饲养6个月,定期观察裸鼠精神状态、饮食、排便、以及接种局部有无出现结节或肿块,接种6个月后处死裸鼠,对接种局部及内脏进行组织病理切片及HE染色。结果:将人胎脑源性神经前体细胞接种于裸鼠皮下6个月未见肿瘤形成,且未见其他异常组织形成;而阳性对照组293T细胞接种于裸鼠皮下1个月后可见明显肿瘤形成。结论:人胎脑源神经前体细胞对裸鼠不具有体内致瘤性。     

软骨多糖诱导小鼠S180细胞凋亡的作用机制

目的研究软骨多糖对S180荷瘤小鼠的作用,并探讨其抑瘤作用机制。方法采用小鼠肉瘤S180细胞建立动物腹水瘤模型,通过腹腔注射软骨多糖进行治疗,治疗期间抽取腹水瘤细胞进行细胞生物学分析。通过HE染色,流式细胞术、TUNEL法检测细胞形态学方面、细胞周期及凋亡率的变化情况;通过免疫荧光方法检测Fas、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果软骨多糖可以明显提高S180荷瘤小鼠的生存率,细胞形态学观察可见细胞出现细胞质浓缩、核固缩及凋亡小体等现象。软骨多糖作用后的S180细胞,其细胞周期被阻遏于G2/M期,Fas蛋白的表达水平于给药24 h后升高,增殖细胞核抗原PCNA表达下降。结论软骨多糖可能通过影响肿瘤细胞周期和Fas、PCNA蛋白的表达来诱导S180细胞凋亡,并显著抑制肿瘤细胞的生长,延长S180荷瘤小鼠的生存时间,研究证实动物软骨多糖具有潜在的药用价值。     

MTHF对C57BL/6鼠Lewis肺癌细胞生长的影响

通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后测量瘤体质量,并进行电镜以及组织学分析,通过免疫组化检测肿瘤组织PCNA、Bcl-2及Bax的表达。结果表明MTHF组、顺铂组抑瘤率分别为46.2%、54.5%。电镜显示MTHF组出现细胞凋亡。MTHF处理Lewis肺癌细胞后,PCNA和Bcl-2基因下调,Bax基因上调。MTHF可显著抑制C57BL/6鼠移植瘤肺癌细胞的生长,其机制可能与诱导Lewis肺癌细胞凋亡并抑制其增殖有关,是一种有前景的抗肿瘤药物。     

PVAX-MAGE-1基因疫苗延缓小鼠肝癌细胞H22腹水瘤和实体瘤的生长

为观察重组基因疫苗PVAX-MAGE-1的抑瘤效应,构建黑色素瘤抗原-1(melanoma antigen-1,MAGE-1)真核基因表达载体--PVAX-MAGE-1.以重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,ELISA法检测表明,与对照鼠(PVAX-1和生理盐水注射小鼠)比较,免疫小鼠脾淋巴细胞上清液中的细胞因子IL-2和IFN-γ明显升高(P0.05);淋巴细胞-肿瘤细胞混合培养证明,免疫小鼠外周血CD8+T细胞对靶细胞的特异性杀伤作用明显增强(P0.05).体内实验证明,PVAX-MAGE-1免疫C57BL/6小鼠,可显著延缓移植性H22腹水瘤及实体瘤在小鼠体内的生长.实验结果提示,重组基因疫苗PVAX-MAGE-1有明显的延缓肿瘤生长的作用,其抑瘤作用与提高T淋巴细胞IL和IFN表达,增强对肿瘤杀伤作用直接相关.     

茶多酚抑制肺鳞癌细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的:探索茶多酚对肺鳞癌细胞的抑制效应及相关机制.方法:以肺鳞癌PC10为研究对象,进行裸鼠成瘤实验.观察茶多酚对裸鼠成瘤的影响.应用免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关Bc12和Caspas3和增殖相关蛋白PCNA的表达,应用TUNNEL法检测细胞凋亡.结果:茶多酚可抑制裸鼠移植瘤的生长.茶多酚可促进促凋亡蛋白caspase3表达并抑制抑凋亡蛋白Bc12表达,并抑制增殖细胞核抗原的表达.TUNNEL实验结果提示茶多酚可促进PC10细胞凋亡.结论:茶多酚可抑制肺鳞癌移植瘤生长,与促进癌细胞凋亡和抑制细胞增殖有关.     

靶向增殖细胞核抗原shRNA的构建及其对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

为了探讨抑制增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,将前期筛选出的最佳siRNA序列转化为能表达其小发夹结构RNA(smallhairpinRNAs,shRNA)的DNA序列,并与pSilencer2.0-U6质粒定向连接,构建靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,经DNA测序证实与设计完全一致.随后采用WST法及克隆形成抑制观察细胞增殖抑制情况、划痕实验来观察细胞迁移能力,流式细胞术、Hoechest33258染色、细胞线粒体膜电位改变检测细胞凋亡.在转染HepG2细胞48h后,pShPCNA组细胞PCNAmRNA表达明显下调,并出现明显的增殖抑制作用,明显抑制细胞克隆的形成和细胞的迁移力,且呈剂量-效应关系.流式细胞术检测发现:pShPCNA组细胞明显阻滞于G0/G1期,并出现明显的亚二倍体凋亡峰,出现明显的早期凋亡细胞群.荧光显微镜检测表明,细胞线粒体膜电位降低,并且细胞出现核固缩、凋亡小体等凋亡形态学变化.上述结果表明,成功构建了靶向PCNA基因的siRNA真核表达载体pShPCNA,pShPCNA转染HepG2细胞48h后,能够显著抑制细胞的生长增...     

LMO3过表达对胶质细胞增殖的作用

构建重组质粒pcDNA4/HisA-LMO3,转染C8-D1A胶质细胞,对照组为pcDNA4/HisA空载体质粒转染组和未转染组,MTT观察各组细胞的体外生长情况,流式细胞术(FCM)测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞百分比,Western-blot检测LMO3转染后凋亡相关蛋白的表达变化,从而观察LMO3基因对C8-D1A胶质细胞体外生长的影响.RT-PCR、Western印迹显示pcDNA4/HisA-LMO3转染组LMO3mRNA及LMO3蛋白表达水平明显高于对照组;与对照组细胞相比,转染组细胞的增殖能力明显高于空载体对照组及C8细胞(P0.01),S期细胞增加,G0/G1期细胞减少,C8细胞转染LMO3后可以促进C8细胞从G0/G1期进入S期,从而促进细胞的增殖.     

FATE/BJ-HCC-2基因表达促进细胞增殖及肿瘤形成

FATE/BJ-HCC-2是本实验室鉴定的一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,定位于Xq28染色体.为探讨FATE/BJ-HCC-2 对细胞生物学行为的影响及裸鼠体内肿瘤形成能力的改变,分别采用脂质体转染真核表达载体及逆转录病毒感染两种方式,获得了FATE/BJ-HCC-2 表达的Bel-7402单克隆细胞株及NIH-3T3细胞克隆,并通过RT-PCR和Western 印迹在基因和蛋白水平鉴定了FATE/BJ-HCC-2 表达情况.通过3H-TdR参入法,检测细胞的增殖能力;通过稀释铺板克隆形成率测定和soft agar克隆形成实验,检测细胞的克隆形成能力;通过裸鼠体内细胞注射成瘤,检测细胞成瘤性和肿瘤生长速度.结果表明,FATE/BJ-HCC-2基因表达能明显提高细胞体外增殖、克隆形成能力和成瘤性.提示其对肿瘤的发生发展起到促进作用.     

C57BL/6小鼠Lewis皮下移植瘤肺转移灶的病理及超微结构观察

目的 构建C57BL/6小鼠Lewis皮下移植瘤肺转移模型,观察肺转移灶病理以及超微结构变化。方法 C57BL/6小鼠右前肢腋窝皮下接种Lewis细胞,定期测量肿瘤体积,绘制生存曲线,对存活期35 d以上的小鼠进行解剖学观察,HE染色检测肺组织病理变化,透射电镜观察肺组织的超微结构。结果 接种14 d小鼠右前肢腋窝皮下成瘤率为100%,22 d小鼠开始出现死亡,平均生存周期(33.00±6.98)d;解剖学可见肺表面出现典型转移灶,外观呈圆形半透明状,周围有出血;HE染色显示肺转移灶染色深,外观近似圆形,与周围组织界限明显,肿瘤细胞排列紧密,内部可见丰富的毛细血管;透射电镜下可见肺转移灶内肿瘤细胞具有显著的异型性,出现巨核、双核和奇异型核,胞质内含有大量的糖原颗粒和线粒体数量,肿瘤细胞间可见细胞连接。结论 延长存活时间可使皮下移植瘤小鼠形成典型的肺转移灶,肺转移灶内病理学和超微结构变化符合恶行肿瘤的病变特点。