用对流电泳提纯兔出血症病毒

兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）在ｐＨ８．６的琼脂糖凝胶上电泳,在负极侧有一血凝峰,免疫电镜观察有大硅ＲＨＤＶ颗粒,证实ＲＨＤＶ病毒粒子带正电荷。利用这一特性可用对流电泳提纯病毒。将抗体与病毒颗粒形成的沉淀带切下,作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,经免疫转印出现６条区带,其中６０ｋＤ的ＶＰ_１为主要结构多肽。用免疫复合物提取核酸,以狄高辛标记制成探针,能与病毒核酸和克隆的ＲＨＤＶｃＤＮＡ２．２ｋｂ片段和４．８ｋｂ片段杂交,探针灵敏度达ｐｇ水平。能用病毒核酸作模板制备探针,证实ＲＨＤＶ的核酸为ＤＮＡ。     

兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析

兔出血症病毒主要结构多肽的氨基酸分析王恒安,杜念兴,徐为燕（南京农业大学,南京２１００９５）关键词兔出血症病毒,结构多肽,氨基酸分析有关兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）结构多肽的报道很多,有认为只有１条,有报道４条的,也有报道多达６条的。但其主要结构多肽为分...     

兔出血症病毒信使RNA的分离纯化及其生物活性的鉴定

用液相免疫沉法从感染兔出血症病毒（Ｒａｂｂｉｔ Ｈａｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＲＨＤＶ）８小时后的兔肝组织的多聚核糖体中,分离出ＲＨＤＶ特异性的多聚核糖体,并由此获得全核酸,经Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ亲和层板,得到３．４Ａ２６０的ＲＨＤＶｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ占全核酸的３．５％。此Ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ经甲醛变性琼脂糖电泳,得到６条单一的带,其大小分别为０     

兔出血症病毒结构多肽分析

粗提病毒经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析后,获得纯化的兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）。提纯病毒经过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ经考马斯亮蓝染色显示Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ和Ｇ７条多肽,凝胶扫描显示Ａ为ＲＨＤＶ主要结构多肽。用多抗和单抗作免疫转印分析,证实Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、和Ｇ为结构多肽,此６条结构多肽间的抗原关系十分密切。     

地衣芽孢杆菌对家兔体液免疫功能的影响研究

本研究采用地衣芽孢杆菌制成微生态制剂,饲喂断奶后的家兔４０天,再用兔病毒性出血病（ＲＨＤ）组织灭活疫苗免疫,检测家兔产生的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抑制价和血清免疫球蛋白的含量。结果,试验组家兔的血清抗体对ＲＨＤ病毒的特异性血凝抗体和血清免疫球蛋白含量均明显高于对照组。表明,地衣芽孢杆菌对家兔的体液免疫功能有促进作用,ＲＨＤ组织灭活疫苗与地衣芽孢杆菌制剂相结合较单独使用疫苗的效果更佳     

一种新病毒——兔出血症病毒的鉴定初报

从我国新发生的一种家兔急性败血性传染病死兔内脏抽提物中,观察到典型的病毒粒子,回归兔可引起典型发病,再从病死兔内脏回收到同样病毒,证明该病系病毒性传染病,暂定名为“兔病毒性出血症”,病原暂定为“兔出血症病毒”。经初步鉴定,认为本病毒可能是一种首次发现的新病毒,属双股RNA病毒。但从病毒大小和核酸节段看,又不同于呼肠病毒科。最终归属正在进一步研究。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠下丘脑内血管升压素基因转录的影响

实验在雄性ＳＤ大鼠中进行,用核酸斑点杂交技术观察下丘脑组织中血管升压素（ＡＶＰ）基因转录水平变化,用异羟基洋地黄毒甙（ＧＩＧ）标记的２６个碱基长寡聚核苷酸作为检测探针。实验中观察到,用渗透压微泵向大鼠侧脑人连续注射微量血管紧张素Ⅰ（０．２ｎｍｏｌ／ｈ）２ｄ后,可引起动物饮水量显著增加,下丘脑组织中ＡＶＰ基因转录水平高,但无统计学显著意义。将实验动物日饮水量限制在与对照动物相同的每日饮水量之后,侧脑     

表达兔出血症病毒VP60蛋白的重组兔粘液瘤病毒的构建与初步评价

兔出血症病毒 (Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV) 及兔粘液瘤病毒 (Myxoma virus,MYXV) 分别引起兔出血症 (兔瘟) 和兔粘液瘤病,是两种严重危害家兔养殖业以及导致原产地欧洲野兔-穴兔 (Oryctolagus cuniculus) 种群近濒危的重要病原。VP60为构成RHDV衣壳的主要抗原蛋白。为研制能同时免疫预防该两种疫病的重组二联疫苗,本研究分别以MYXV和其复制非必需基因——胸腺激酶 (Thymidine kinase,TK) 基因为重组载体和同源重组靶基因,构建穿梭载体p7.5-VP60-GFP。将p7.5-VP60-GFP载体转染被MYXV感染的兔肾细胞株RK13,经同源重组后,在荧光显微镜下筛选出表达GFP的重组病毒,并将其命名为rMV-VP60-GFP。通过PCR和Western blotting进行重组病毒vp60基因特异性插入和表达验证结果显示,vp60和gfp基因成功插入MYXV基因组中并且可成功表达,表明成功构建了表达RHDV衣壳蛋白基因vp60的重组MYXV。动物攻毒保护试验表明,制备的重组病毒能保护家兔抵抗MYXV的致死性攻击,这为后续疫苗的研发奠定了基础。     

禽流感H5N1型病毒对沙鼠致病性的初步研究

[目的]观察禽流感H5N1型病毒对沙鼠的致病性;[方法]在生物安全三级实验室,将禽流感H5N1型病毒通过滴鼻接种乙醚麻醉后沙鼠,观察14天,记录沙鼠的体温体重、临床症状、病理变化、病毒分离及抗体变化;[结果]沙鼠感染后发病主要表现在第2天至第6天,攻毒组沙鼠出现反应迟钝、皱毛、弓背、食欲下降、呼吸急促、打堆等症状,攻毒组沙鼠的体温降低和体重减轻,死亡率为44%,在第8天检出抗体,主要病理变化表现为肺出现严重淤血、水肿、出血,镜下可见肺间质充血,血管周围炎性细胞浸润,肝和胸腺淤血,肾出血,肾小管变形。     

内皮舒张因子与氧自由基在脑血管痉挛发病中的作用

实验性兔蛛网膜下腔出血后,基底动脉壁丙二醛（ＭＤＡ）含量及超氧化物峻化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性发生改变,基底动脉出现痉挛,应用ＳＯＤ后上述变化减轻。离体采用生物检定法发现,基底动脉受自由基损伤后,去甲肾上腺素（ＮＥ）诱导的血管收缩效应增强,而ＡＣｈ诱导的血管舒张效应减弱。用ＳＯＤ防止了ＡＣｈ诱导的血管舒张效应的减弱。结果表明,氧自由基参与了脑血管痉挛的发生,而脑血管受自由基损伤后,其内皮舒张因子释放减少是脑血管痉挛发病的重要因素。     

眼镜蛇伤模型造模探讨及多项指标的动态观察

目的 探讨眼镜蛇伤模型的造模方法并观察模型多项指标的动态变化。方法 用中华眼镜蛇毒于家兔左小腿作皮下注射制作眼镜蛇伤模型,并分别于注蛇毒前1天,注蛇毒后6h,24h和7天从家兔耳缘静脉采血作血液和生化等多项指标的检查。结果 与生理盐水组相比,眼镜蛇毒组的家兔在注毒后数小时至24h可出现炎症反应和急性弥漫性血管内凝血(DIC),心功能及水盐代谢亦受到一些影响。结论 利用家兔可制作出眼镜蛇伤模型。     

一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白——Annexin32对血凝及血栓形成的影响

通过探讨一种新的钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin32对家兔凝血时间和兔、大鼠血栓形成的影响, 对其主要药效学进行了研究, 并与普通肝素进行了比较. 兔、大鼠静脉给药, 检测用药后不同时间家兔白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)、体外血栓形成和大鼠体内血栓形成的变化. 结果显示, 按1 mg/kg静脉注射Annexin32后, KPTT明显延长(P < 0.01), 但小于肝素延长幅度, 体外血栓形成仪测定显示血栓长度、重量均明显减少(P < 0.01), 大鼠体内血栓重量明显降低(P < 0.01), 提示Annexin32具有抗血栓形成的功能, 并有对凝血系统影响小的特征.     

检测大麦抗BYDV的蚜虫获毒的酶联免疫吸附法

检测大麦抗ＢＹＤＶ的蚜虫获毒的酶联免疫吸附法刘常宏（陕西省植物保护研究所,陕西杨陵７１２１００）Ｓ．Ｈａｂｅｒ（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＣａｎａｄａ,ＷｉｎｎｉｐｅｇＲｅｓｅａｒｃｈＳｔａｔｉｏｎ,Ｃａｎａｄａ）关键词酶联免疫吸附法,大麦,大麦黄矮病毒...     

重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂预防治疗恒河猴感染SARS-CoV病毒的作用效果试验

[目的]评价重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂对预防治疗SARS-CoV病毒感染恒河猴的作用。[方法]10只恒河猴随机分为2组,每组5只。分别为试验组(重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂)和对照组(空白干扰素)。分别在攻毒前19h和1h,攻毒后7h、23h、31h、47h、55h、71h、95h和119h不同时间经鼻吸入受试物,0.4ml/只。按计划定时取咽拭子做real-timePCR检测和病毒分离;取静脉血做病毒分离检测、中和抗体、IgG、血常规、血生化和血凝指标。[结果]1.SARS感染对照组:全部动物咽拭子标本经real-timePCR均检出SARS-CoV病毒,持续时间从攻毒后2天至8天。攻毒后2天3只、5天1只、7天2只,其咽拭子标本中病毒分离阳性,进一步证实病毒在体内的复制。攻毒后,诱导产生高滴度的抗体和中和抗体,证实病毒感染。大体解剖全部动物肺脏为灰白色,有大面积出血,其中2只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理称典型SARS肺炎性病变。2.干扰素试验组:和对照组相同时间取的咽拭子等标本中,real-timePCR检测和病毒分离均未检出病毒。攻毒后病毒导致机体产生的中和抗体和IgG抗体的反应很弱。血常规、血生化和血凝指标结果表明干扰素试验组动物攻毒后各项指标较试验前比较没有显著性改变;大体解剖动物肺脏为灰粉色,4只动物肺脏有少量出血,其中1只动物肺脏与胸壁有粘连,组织病理未见典型SARS肺炎性病变。因而认为,重组人干扰素α2b鼻腔喷雾剂可以有效阻断SARS-CoV病毒对恒河猴的感染;;为预防人类感染SARS提供参考。     

基于RNA-Seq筛选APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡肠道免疫相关基因

本研究以禽致病性大肠杆菌(APEC)及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡小肠为模型,以分析其免疫相关基因的表达变化为目的,采用转录组测序(RNA-Seq)技术对感染APEC及其PhoP/Q缺失株的雏鸡小肠样本RNA进行测序,分析免疫相关基因的表达变化,结果为野生株攻毒组与对照组相比、野生株攻毒组与缺失株攻毒组相比、缺失株攻毒组与对照组相比,分别筛选出131、105、172个差异表达基因(fold change≥2, FDR≤0.05),GO功能分类结果显示分别有87、99、159个基因得到注释,这些基因主要富集到氧化还原过程、脂蛋白转运、血管内皮细胞迁移、免疫反应、凋亡过程负调控、肝素结合、铁离子结合、CCR趋化因子受体结合等功能,得出APEC及其PhoP/Q缺失株感染雏鸡后引起机体肠道免疫相关基因变化的结论,根据GO功能注释筛选出PTPRC、LCP1、YFV等免疫相关基因,为深入研究雏鸡肠道免疫提供依据。     

猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株在原代牛睾丸细胞中拉殖特性的研究

以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株（ＣＳＦＶ Ｃ株）为实验材料,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的ＣＤ株猪瘟病毒,并对病毒滴度的测定方法进行了改进,发展完善了荧光斑技术（Ｆ－ＰＦＵ）。使用改进的病毒滴度测定方法,对接毒后培养上清中病毒滴度的变化趋势进行了检测,在原代牛睾丸细胞中,接毒后５ｄ,几乎所有的细胞者可被病毒感染;释放到培养液中有活性的病毒     

马麝出血症病毒VP60主要抗原表位区的串联表达及对家兔的免疫保护效力分析

马麝病毒性出血症(Moschus chrysogaster viral hemorrhagic disease,McVHD)为马麝的一种急性、高度致死性传染病,其病原马麝出血症病毒(Moschus chrysogaster hemorrhagic disease virus,McHDV)与兔出血症病毒高度同源。为了筛选McHDV保护性抗原,为McVHD疫苗研究奠定基础,文中通过对McHDV主要结构蛋白VP60抗原表位的分析,设计引物,应用RT-PCR技术扩增获得三段VP60主要抗原表位区核酸序列,并采用重叠延伸PCR将3段产物连接后克隆至原核表达载体pET-28a(+),成功构建原核表达质粒pET-truncated-VP60后转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),并经IPTG诱导表达。纯化表达产物免疫3–4月龄非RHD免疫兔,血凝抑制试验测定抗血清效价。首次免疫后21 d,通过攻毒保护试验分析重组蛋白的免疫保护效力。结果表明,McHDV VP60主要抗原表位蛋白在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子质量约为45 kDa,且以包涵体形式存在;重组蛋白纯化后配制疫...     

SARS-CoV对幼年和成年布氏田鼠的感染研究

采用鼻腔喷雾法(CCID50=105.7)研究了SARS冠状病毒(SARS-CoV)对成年和幼年布氏田鼠的感染效果.成年动物攻毒后出现死亡,表现为口鼻有出血,肠道出血;肺组织呈出血性间质性肺炎改变,肝、脾、肾、胰腺组织均呈淤血性改变;存活动物肺组织呈间质性肺炎,局灶出血及肺气肿改变,其他脏器未见明显病变.幼年动物攻毒后未见死亡但行动较为迟缓,主要脏器未见明显异常;早期肺组织有局限性肺炎改变,且病毒分离为阳性;同居对照组的一只动物有肺组织局灶性肺炎.结果表明,SARS-CoV可以很强地感染布氏田鼠;成年布氏田鼠比幼年动物对SARS-CoV更敏感;布氏田鼠有望成为一种比较理想的小型SARS动物模型。     

马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析

以马传染性贫血病毒（ＥＬＡＶ）驴白细胞弱毒疫苗株（ＤＬＡ）病毒基因组ＲＮＡ为材料,用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增出ＥＩＡＶ ｇａｇ基因,以平端针其克隆到质粒载体ｐＵＣ１９中,由于疫苗不是克隆株,因此通过５次单独克隆与测序,推导出ＥＩＡＶ－ＤＬＡ ｇａｇ基因的优势序列。ｇａｇ基因全长１４５８个碱基,编码一４８６个氨基酸残基的前体蛋白。与美国ＥＩＡＶ Ｗｙｏｍｉｎｇ１３６９株比较,核苷酸同源性为８０％,氨基酸     

γ-氨基丁酸、谷氨酸等对蝙蝠中脑下丘薄片神经元诱发电活动的影响

采用脑薄片细胞外记录法,研究了γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）及其拮抗剂荷包牡丹碱（Ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ）、激动剂氨苯氨丁酸（Ｂａｃｌｏｆｅｎ）和谷氨酸（Ｇｌｕ）及其拮抗剂－２ＡＰＶ、挑动剂ＮＭＤＡ中脑下丘薄片上进行。双股绞合绝缘镍络丝刺激电极,置于下丘外侧核（ＩＣｘ）给予电刺激。五管玻璃微电极微电泳药物和记录细胞诱发场电位（Ｆｉｅｌｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）。在下丘中央核（ＩＣｃ）共记录了１０２例诱发的