PTSD样情感行为异常大鼠杏仁核Caspase 9的改变

目的观察创伤后应激障碍(PTSD)样行为异常大鼠杏仁核神经元Caspase 9表达变化,有望揭示PTSD的部分发病机制。方法采用国际认定的SPS方法刺激建立大鼠PTSD模型,取成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为SPS模型的1d、4d、7d组及正常对照组,采用免疫荧光法、免疫印迹和逆转录-聚合酶链式反应检测大鼠杏仁核Caspase 9的表达变化。结果SPS刺激后大鼠杏仁核神经元细胞内Caspase 9于1d开始逐渐升高,7d时表达最多;Caspase 9 mRNA的变化与之相一致。结论海马Caspase 9的表达变化,可能是PTSD大鼠情感行为异常的重要病理生理基础之一。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法:选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例(子痫前期组),以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹(western-blot)法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果:子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论:子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

葡萄糖调节蛋白78在子痫前期中的表达及其意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）mRNA及蛋白在胎盘组织的表达水平及其与子痫前期的发病关系。方法：选择2010年1月-2010年12月在南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院产科住院的子痫前期患者35例（子痫前期组）,以同期正常孕妇35例为对照组。采用RT-PCR技术、蛋白印迹（western-blot）法和免疫组化检测两组孕妇胎盘组织中GRP78的mRNA与蛋白表达水平差异。结果：子痫前期组患者胎盘组织中GRP78mRNA与蛋白表达水平均显著高于相应孕周正常妊娠组。结论：子痫前期能够诱导GRP78表达,CHOP/GADD153表达的增高与子痫前期的发病有关。     

葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的差异表达

为探讨葡萄糖调节蛋白GRP78和GRP94在小鼠脑发育过程中的生物学意义,利用蛋白质免疫印迹、免疫荧光及RNA印迹技术,检测了发育不同时期小鼠脑组织中GRP78、GRP94的表达及分布情况.结果显示:小鼠脑发育过程中GRP78、GRP94的表达在时间和空间上呈现出显著差异,在脑发育的早中期GRP78表达水平高于GRP94,随发育的进程GRP78不断下降而GRP94逐渐升高,至胚胎发育晚期GRP94表达水平高于GRP78.在E16.5的不同脑区,GRP78的表达呈现出从端脑到后脑逐渐递减的“浓度梯度”分布,而GRP94在不同脑区中表达相同.小鼠出生后,二者作为应激蛋白在脑组织中的表达没有明显的差异性.免疫荧光结果显示,GRP78和GRP94在大脑组织中的分布基本相同,神经细胞和神经胶质细胞的细胞质均有分布.这些观察得到的结果提示,GRP78和GRP94与神经细胞分化和脑的形态建成有关,它们分别在脑发育的不同时期起作用.     

PTSD样行为异常大鼠杏仁核Ca^2＋/CaM的改变

目的观察创伤后应激障碍（PTSD）样行为异常大鼠杏仁核细胞内Ca^2＋信号及Ca M（钙调蛋白）表达变化,有望揭示PTSD的部分发病机制。方法成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为连续单一刺激（single prolonged stress,SPS）模型的12h、1d、4d、7d、14d组及正常对照组,采用荧光探针标记法、免疫组化、Western blott等方法,检测PTSD样行为异常大鼠杏仁核神经元游离Ca^2＋含量和钙调蛋白（Ca M）的表达变化。结果SPS刺激后大鼠杏仁核神经元游离Ca^2＋浓度（nmol/L）于12h内升高,24h增至顶峰,4d开始下降,14d恢复正常。CaM的表达于SPS刺激后4d表达最多,之后渐趋下降。结论杏仁核Ca^2＋信号调控与Ca M表达变化,可能与PTSD样大鼠恐惧增强的发病机制相关。     

PTSD样大鼠蓝斑核盐皮质激素受体表达变化的研究

目的探讨PTSD样大鼠蓝斑（locus ceruleus,LC）神经元盐皮质激素受体（mineralocorticoid receptors,MR）表达的变化。方法使用连续单一应激（SPS）方法建立PTSD大鼠模型,随机分为SPS处理后24h、4d、7d、14d和28d组,非SPS刺激大鼠作为对照,应用免疫组化、免疫印迹方法分别进行各组蓝斑神经元MR表达变化的观察及检测,进行图像分析和统计学处理。结果蓝斑神经元MR的表达呈现24h急剧下调,4d、7d,14d和28d恢复性上调。结论PTSD样大鼠蓝斑神经元MR的表达变化可能直接参与了PTSD持续性精神行为障碍的发生发展过程。     

创伤后应激障碍大鼠前额内侧皮质MR表达的变化

目的观察创伤后应激障碍(PTSD)样大鼠前额内侧皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)神经元核受体-盐皮质激素受体(Mineralocorticoid receptors,MR)表达的变化。方法采用国际认定的单一连续应激(single prolonged stress,SPS)方法建立PTSD大鼠模型,取成年健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为PTSD模型1d、7d、14d、28d和正常对照组。采用免疫组化、免疫印迹和RT-PCR方法分别进行各组mPFC神经元MR表达变化的观察及检测,进行图像分析和统计学处理。结果 PTSD大鼠mPFC神经元MR的表达在SPS-1d时高于对照组,随后下降,SPS-14d最低,SPS-28d恢复性上调,但仍然低于对照组(P<0.05)。结论 PTSD模型大鼠经SPS处理后,mPFC中出现MR表达的变化,该变化可能参与PTSD的下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic pituitary adren axis,HPA)轴的变化机制。     

分子伴侣GRP94在创伤后应激障碍大鼠前额内侧皮质表达变化及其意义

目的检测创伤后应激障碍（Post-traumatic stressdisorder,PTSD）连续单一刺激（single prolonged stress,SPS）模型大鼠前额内侧皮质（medial prefrontal cortex,mPFC）分子伴侣葡萄糖调节蛋白94（Glucose-regulated protein,GRP94）的表达变化,探讨PTSD发病机制过程中存在未折叠蛋白反应（unfolded protein reaction,UPR）的激活及GRP94在UPR中的作用机制及意义。方法健康,雄性,成年Wistar大鼠60只,建立国际认定的PTSD-SPS模型,随机分为正常对照组和模型组,模型组大鼠分别于1d、4d、7d取材。应用免疫组化、蛋白印迹和RT-PCR方法检测PTSD大鼠mPFC神经元GRP94表达变化。结果免疫组化、蛋白印迹和RT-PCR方法均显示,给予SPS刺激后大鼠GRP94的蛋白表达及GRP94mRNA表达均高于正常组（P〈O．05）,7d达到顶峰。结论分子伴侣GRP94表达发生变化,提示SPS刺激后大鼠mPFC神经元出现未折叠蛋白反应的激活,PTSD的发生过程中GRP94参与了未折叠蛋白反应,对揭示PTSD致脑损伤的发病机制具有重要意义。     

SPS建立PTSD样大鼠旷场行为的改变及十味温胆汤的调节作用

目的:观察单次延长应激(single-prolonged stress,SPS)建立PTSD模型对实验大鼠模后7天后的旷场行为的变化以及中药复方十味温胆汤对其的调节作用.方法:采用旷场实验,观察不同处理组大鼠的行为改变情况.结果:模型组大鼠在直立次数、穿格次数、运动总距离、中央格停留时间方面均明显低于正常大鼠(P＜0.05),西药阿普唑组大鼠,经统计在直立次数、穿格次数、中央停留时间方面与模型组有明显差异(P＜0.05),而十味温胆汤组大鼠各项指标均明显高于模型组,其中穿格次数、中央格停留时间与模型组具有非常显著的差异(P＜0.01),且与正常组及西药组接近(P＞0.05).结论:本课题成功复制了PTSD样大鼠模型,所选取的中药复方十味温胆汤能显著改善PTSD样大鼠的情绪行为变化,其效用与西药阿普唑仑类似.     

应激性高血压大鼠脑干及下丘脑-垂体-肾上腺轴中肾上腺髓质素及其受体mRNA表达的改变

采用逆转录-聚合酶链式反应检测了慢性足底电击结合噪声应激致高血压大鼠下丘脑、延髓、中脑、垂体和肾上腺等组织中编码肾上腺髓质素的肾上腺髓质素前肽原(preproadrenomedullin,ppADM)基因以及ADM的特异性受体组件降钙素受体样受体(calcitonin-receptor-like receptor,CRLR)和受体活性调节蛋白2和3(receptor-activty-modifying proteins,RAMP2和RAMP3)表达的变化.我们观察到:与对照组相比,以3-磷酸甘油醛脱氢酶作为内参照,15 d足底电击结合噪声应激引起下丘脑、垂体和肾上腺中ppADM mRNA表达上调,而在延髓和中脑表达明显下调(P＜0.01或P＜0.05);CRLR基因表达量正常时在下丘脑相对较高,应激15 d后CRLR表达在延髓、中脑和下丘脑下调(P＜0.01或P＜0.05),而在垂体和肾上腺的表达无明显变化;应激后RAMP2基因在延髓和下丘脑表达上调,而在肾上腺表达显著下调(P＜0.01),其他部位无明显变化;RAMP3基因在对照组大鼠的中脑和下丘脑表达较高,在应激性高血压大鼠的下丘脑和垂体表达上调(P＜0.01或P＜0.05),而在中脑和肾上腺表达下调(P＜0.05),在延髓中的表达变化无统计学差异.上述结果提示:慢性足底电击结合噪声应激引起明显的中枢和下丘脑-垂体-肾上腺轴ADM及其受体组件CRLR/RAMP2或CRLR/RAMP3基因的表达变化.但慢性应激后中枢源性ADM及其受体的表达变化对应激和血压的调节以及在应激致高血压中的确切作用及机制尚待进一步研究.     

Decreased protein and mRNA expression of ER stress proteins GRP78 and GRP94 in HepG2 cells over-expressing CYP2E1

CYP2E1 causes oxidative stress mediated cell death; the latter is one mechanism for endoplasmic reticulum (ER) stress in the cell. Unfolded proteins accumulate during ER stress and ER resident proteins GRP78 and GRP94 protect cells against ER dysfunction. We examined the possible role of GRP78 and GRP94 as protective factors against CYP2E1-mediated toxicity in HepG2 cells expressing CYP2E1 (E47 cells). E47 cells expressed high levels of CYP2E1 protein and catalytic activity which is associated with increased ROS generation, lipid peroxidation and the elevated presence of ubiquinated and aggregated proteins as compared to control HepG2 C34 cells which do not express CYP2E1. The mRNA and protein expression of GRP78 and GRP94 were decreased in E47 cells compared to the C34 cells, which may explain the accumulation of ubiquinated and aggregated proteins. Expression of these GRP proteins was induced with the ER stress agent thapsigargin in E47 cells, and E47 cells were more resistant to the toxicity caused by thapsigargin and calcimycin, possibly due to this upregulation and also because of the high expression of GSH and antioxidant enzymes in E47 cells. Antioxidants such as trolox and N-acetylcysteine increased GRP78 and GRP94 levels in the E47 cells, suggesting that CYP2E1- derived oxidant stress was responsible for down regulation of these GRPs in the E47 cells. Thapsigargin mediated toxicity was decreased in cells treated with the antioxidant trolox indicating a role for oxidative stress in this toxicity. These results suggest that CYP2E1 mediated oxidative stress downregulates the expression of GRP proteins in HepG2 cells and oxidative stress is an important mechanism in causing ER dysfunction in these cells.     

拉西地平对高温高湿应激大鼠血管平滑肌细胞GRP78 和CHOP 表达的影响

目的:探讨钙离子拮抗剂拉西地平对高温高湿应激大鼠血管平滑肌细胞内内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein of 78kD,GRP78)和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)表达的影响。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、高温高湿组、拉西地平组,每组20只。按实验时间(2w、4w、6w、8w)的不同,各组又分为4个亚组,每个亚组5只大鼠。用颈动脉插管法测定各组大鼠的平均动脉压(MAP);用免疫组织化学法检测GRP78和CHOP的表达水平。结果:①高温高湿各组的MAP随着实验时间的延长呈逐渐递增的趋势,高温高湿4w、6w、8w亚组的MAP均显著高于相应的对照组和拉西地平组(P<0.05)。②随着实验时间的延长,高温高湿组GRP78表达量不断增加,6w达到最大值,8w表达减弱。高温高湿4w、6w、8w亚组GRP78表达量均高于相应对照组和拉西地平组,有显著性差异(P<0.05)。③高温高湿组2w、4w、6w、8w亚组CHOP表达量组间比较有显著性差异(P<0.05),8w亚组表达达到最高值;高温高湿组6w、8w亚组与相应对照组和拉西地平组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:高温高湿应激可引起血管平滑肌细胞内质网应激反应,导致GRP78表达及CHOP表达的不对称增加,提示高温高湿应激可引起血管平滑肌细胞的损害;拉西地平可以减轻内质网应激,逆转高温高湿应激所致的血管平滑肌细胞的损伤作用,对血管平滑肌细胞有保护作用。     

拉西地平对高温高湿应激大鼠血管平滑肌细胞GRP78和CHOP表达的影响

目的：探讨钙离子拮抗剂拉西地平对高温高湿应激大鼠血管平滑肌细胞内内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulated protein of 78kD,GRP78）和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP）表达的影响。方法：将60只雄性SD大鼠随机分为对照组、高温高湿组、拉西地平组,每组20只。按实验时间（2w、4w、6w、8w）的不同,各组又分为4个亚组,每个亚组5只大鼠。用颈动脉插管法测定各组大鼠的平均动脉压（MAP）;用免疫组织化学法检测GRP78和CHOP的表达水平。结果：①高温高湿各组的MAP随着实验时间的延长呈逐渐递增的趋势,高温高湿4w、6w、8w亚组的MAP均显著高于相应的对照组和拉西地平组（P〈0.05）。②随着实验时间的延长,高温高湿组GRP78表达量不断增加,6w达到最大值,8w表达减弱。高温高湿4w、6w、8w亚组GRP78表达量均高于相应对照组和拉西地平组,有显著性差异（P〈0.05）。③高温高湿组2w、4w、6w、8w亚组CHOP表达量组间比较有显著性差异（P〈0.05）,8w亚组表达达到最高值;高温高湿组6w、8w亚组与相应对照组和拉西地平组比较有显著性差异（P〈0.05）。结论：高温高湿应激可引起血管平滑肌细胞内质网应激反应,导致GRP78表达及CHOP表达的不对称增加,提示高温高湿应激可引起血管平滑肌细胞的损害;拉西地平可以减轻内质网应激,逆转高温高湿应激所致的血管平滑肌细胞的损伤作用,对血管平滑肌细胞有保护作用。