棒状杆菌中质粒DNA的快速检测方法

在棒状杆菌质粒DNA快速检测中,比较了三种方法:强碱法、快裂法和我们设计的酶法。用强碱法抽提的质粒带很淡,快裂法其次,且不能区别两个分子量相近的质粒;而用酶法则显带清晰,且能很好地区分两个大小相近的质粒,分辨率高,认为在棒状杆菌质粒快速检测中是一种很好的方法。     

北京棒状杆菌AS 1.299噬菌体的研究

本文报道了用分子超滤膜法浓缩噬菌体溶液的效果以及用电镜对北京棒状杆菌AS 1.299噬菌体的观察。结果表明,这种浓缩方法简便易行,浓缩效果好。浓缩液适于电镜观察。根据我们比较,这是一种侵染北京棒状杆菌AS1.299的新噬菌体,命名为A_(519)。     

用高压液相色谱法测定链霉菌细胞DNA G-C克分子百分比

在测定细胞DNA G-C克分子百分比的诸多方法中,以Ko等建立的高压液相色谱法较为先进,灵敏度更高,速度快,重复性好,计算方便。我们在研究链霉菌G-C克分子百分比测定方法时,对方法作了一些改良,现将结果     

嗜热脂肪芽孢杆菌与北京棒状杆菌细胞融合初探

对两种不同属间的细菌,嘈热脂肪芽孢杆菌与北京棒状杆菌原生质体的形成,再生及融合进行了研究。初步确定了适应此两种出发菌株的破壁、再生及融合的最佳条件。在此条件下,其破壁率均可达98%以上;LT1菌与LT2菌的再生率分别可达52%与51%;融合率可达2.55×10(?)。试验结果表明,此两种不同属间的细菌细胞融合是完全可能的。10(?)以上的融合率应用于工业遗传育种是完全可行的。     

棒状杆菌灭活原生质体种间融合

原生质体融合技术越来越广泛地应用于遗传学基础理论和工业育种研究,且融合的方法不断改进。近来报道用灭活的亲株原生质体融合也能达到遗传重组:用链霉素灭活枯草芽孢杆菌原生质体、热灭活巨大芽孢杆菌原生     

产谷氨酸北京棒状杆菌噬菌体的分离和鉴定

从国内一些工厂分离到40株噬菌体,经血清学分型,区分为三种血清型,按其代表株A2、A3和A133的编号分别定名。对四林噬菌体进行了寄主范围,热失活、pH稳定性、一级生长曲线试验和电镜观察,发现它们之间存在明显的差异。属于同一血清型的两株噬菌体在一些特征上也存在明显的差异。     

北京棒状杆菌噬菌体脱氧核糖核酸的分离及其性质的研究

利用酚法除强白提取北京樟状杆菌的三株不同挑大梁清型的噬蓖体A2、A3 和 A133的核酸,对核酸的硷基组份进行了分析,含有四种通常的硷基,根据脱氧核糖核酸的解链温度,计算噬菌体脱氧核糖核酸的G+c克分子百分数分别依次为61．2、65．6和67．5％,所有噬菌体脱氧核糖核酸均联结有葡萄糖基。利用a-纤维素酶制备获得北京棒状杆菌的原生质体,所提取的三种噬菌体脱氧核糖核酸对此可以转染成功。     

北京棒状杆菌RNA聚合酶的提纯及其性质的研究

本文报道了北京棒状杆菌RNA聚合酶的分离和提纯方法。经DEAE纤维素层析提纯后的酶的比活比硫酸铵分段后提高53倍;低浓度利福平和放线菌素D对酶显示强烈的抑制作用;酶对外加DNA模板呈现明显的依赖性;酶的反应最适温度为37℃,最适pH为7.9,反应30分钟时酶活力达到最高值,当0．I 5M氯化钾存在时表现最高酶活性。此外,本文还报道了模板、二价金属离子浓度和抑制剂浓度对酶活力的影响。     

棒状杆菌启动功能片段的克隆和顺序测定

利用大肠杆菌(Escherichia Coli）的白动子探针质粒pGA46-4,从谷氨酸棒状杆菌(Corynebacrerium glutainicum）染色体DNA中筛选启动功能片段,并测定了重组质粒pGA46-4上的一个约0.4kb的启动功能片段的核营酸顺序。利用pGA46-4和棒状杆菌质粒pXZ10145的EcoRI大片段组建了在大肠杆菌和力士棒杆菌(Corvnebacierium herculis）中都能复制的穿梭质粒pXZ10。     

北京棒状杆菌AS1.299谷氨酰胺合成酶活力调节的研究

北京棒状杆菌(Corynebacterium pekinense AS1.299)谷氨酰胺合成酶的转移酶活性依赖于Mn~(++),酶的生物合成酶活性依赖于Mg~(++),其他二价金属离子只能部分代替Mn~(++)和Mg~(++)的作用。Mn~(++)对ATP或ADP的克分子比对酶活力起调节作用。ATP、CTP,丙氨酸和甘氨酸对谷氨酰胺合成酶有较强的抑制作用;丝氨酸、谷氨酸和6-磷酸葡萄糖胺对酶活力的抑制作用分别是24,15和21％。效应物混合物对酶的作用被证明是累积性的抑制作用。     

用热变性温度法测定五个细菌新种DNA的GC含量

利用林万明等建立的实验方法测定了五个细菌新种DNA的GC含量,同时对未见报道GC含量的两种细菌进行了测定,现将结果报告如下。     

用热变性温度法测定细菌DNA中GC含量

用热变性温度法测定细菌DNA中GC含量,是一种重复性高,仪器较易解决,操作较简便的方法。本文介绍此方法中所用仪器的改装,测定操作过程和应注意事项。     

北京棒状杆菌AS1.299噬菌体形态及生物学特性的研究

从味精厂的发酵废液中,分离出四株噬菌体,通过血清学研究,可以区分为四种血清型,同时还进行了寄主范围、一级生长曲线、pH稳定性及热失活测定。对噬菌体的形态作了电镜观察,发现它们之间不但在形态上不同,而且各自的生物学特性也有明显区别。     

北京棒状杆菌AS1.299谷氨酰胺合成酶的提纯和性质

用热变性、硫酸铵分段沉淀和DEAE纤维素柱层析部分纯化了北京棒状杆菌AS1.299(Corynebacterium pekinense)谷氨酰胺合成酶,并用垂直平板电泳对酶进一步精制。酶对谷氨酰胺的Km值为16.4mM,对羟胺的Km值为43.5mM;酶的沉降系数为21S,SDS凝胶电泳测得酶的亚基分子量为56,000。化学修饰表明,该酶活力与硫氢基、色氨酸、精氨酸残基无关;酪氨酸修饰剂的作用引起酶活力下降,初步证明,组氨酸残基是该酶活力的必需基因。     

棒状杆菌原生质体的制备方法

AS1.1001等棒杆菌采用常规方法去壁比较困难。观察了青霉素对AS1.1001形成原生质球的影响。结果,0.3微克/毫升苯唑青霉素钠处理高渗溶液中的对数期细胞2小时,即已能形成原生质球。应用青霉素加溶菌酶技术,可明显提高营养缺陷型突变株拈出率。还试验了以这一技术,制备了疑为AS1.1001菌的质粒DNA。     

己酸菌DNA中G—C含量的测定

利用核酸的增色性,采用备有加热装置的紫外分光光度计,测定了己酸菌DNA的热变性温度(Tm),得出己酸菌G-C克分子百分数含量为30.9.测定结果表明G-C含量与传统分类允许的范围一致.     

氮和碳对北京棒状杆菌谷酰胺合成酶的调节作用

不同氮源对北京棒状杆菌谷酰胺合成酶(GS)形成的影响显著不同。高浓度的NH+4对GS的合成有阻遏作用,而谷氨酸或低浓度的NH+4对GS的合成有解阻遏作用。葡萄糖能促进GS的合成,但阻遏谷氨酸脱氢酶(GDH)的合成。