甘草内生真菌的分离及鉴定

植物体内普遍存在着内生菌,为了探寻传统药材甘草的质量与其内生菌之间可能存在的关系。对采自新疆的甘草根部进行了内生真菌的分离及鉴定。选用CYM真菌培养基,对其内生真菌进行分离及纯化,选择其中最占优势的两种菌落分别进行了菌落形态观察及菌丝形态(棉兰染色)观察,以及基因组DNA的18S rDNA和ITS rDNA序列鉴定和系统进化分析。本研究结果表明从甘草根部主要分离到两种内生真菌,分别属于Fusarium镰刀菌属和Gibberella赤霉菌属。     

新疆胀果甘草内生菌的分离和鉴定

对采自新疆的健康野生胀果甘草不同组织中的内生菌进行分离,确立了分离的条件为5%NaClO4浸5min,分离纯化得到149株细菌和2种真菌。通过形态学观察和革兰氏染色,细菌中芽孢杆菌为93株,杆状菌56株,使用法国梅里埃细菌自动鉴定仪对其进行鉴定,得到鉴定结果的细菌属于13个属,真菌显微形态鉴定属于Penicillium青霉菌属和Fusarium镰刀菌属。     

超滤分离和鉴定三种香菇多糖

用热水从香菇子实体中浸提出香菇多糖,采用两种超滤陶瓷膜将粗多糖分级成三部分Le1,Le2和Le3。所有的这三种多糖都由两组分所组成,采用凝胶过滤色谱测定了多糖分子量,13CNMR和IR光谱测定显示多糖Le1为含α糖甙键的多糖,多糖Le3为含β糖甙键的多糖。采用气相色谱法测定了三种多糖的单糖组成,结果显示三种多糖都由葡糖糖,阿拉伯糖,木糖,甘露糖和半乳糖组成,Le1,Le2和Le3中阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖的摩尔比分别为0.15∶0.52∶1.00∶1.20∶7.20、0.21∶0.68∶1.00∶1.02∶11.56、0.29∶0.42∶1.00∶0.85∶16.20。三种多糖Le1,Le2和Le3的平均分子量分别为4.02×104、2.16×105和8.93×105。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

薯蔓多糖的分离纯化和性质鉴定

以我国资源量巨大的薯蔓为原料, 采用中试设备, 利用水提醇沉法提取多糖。研究了活性炭脱色工艺, 经初步纯化获得薯蔓多糖(PSPV), 并研究了其理化性质。DEAE-纤维素柱对来自于二个季节的PSPV进行分离、纯化, 分别得到PSPVⅠ和PSPVⅡ、PSPVⅢ三个多糖组分, 高效凝胶过滤色谱法测定三个组分的分子量分别为6.278×104 D, 3.801×104 D和1.418×104 D, 气相色谱结合标样测定单糖组成。研究结果为充分高效利用薯蔓资源提供了理论依据。     

仙草多糖的分离纯化及鉴定

仙草(Mesona Chiliensis Benth)是我国的一种民间草药。用0.5％NaHCO_3抽提,乙醇沉淀得到了仙草多糖的粗品。经过H_2O_2脱色处理,Sephadex G-75柱层析和硫酸—苯酚法收集单一峰部分,得到仙草多糖纯品(简称MCPS),薄层层析、凝胶电泳和醋纤薄膜电泳证明其为均一性多糖。红外光谱扫描表明,它具有典型的多糖吸收峰。HPLC法测得相对分子量为4.3×10~4,经薄层层析确定MCPS的单糖组成为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖,半乳糖醛酸及一种未知单糖。药理实验表明,它具有免疫促进作用与抑瘤效应。     

拱状灵芝多糖的分离与鉴定

由拱状灵芝Ganoderma Fornicolum提取的水溶性多糖,经甲醇分级与DEAE-纤维素柱层析获拱状灵芝葡聚糖,平均分子量为50,000。该葡聚糖经酶试验、高碘酸氧化、红外光谱、Smith降解,乙酰化产物质谱分析,证明为多枝结构。由β(1→6)(1→2)-D-葡萄糖组成。     

甘草内生细菌的分离及拮抗菌株鉴定

从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株,经初步鉴定芽孢杆菌属(Bacillus sp.)为优势种群,约占30%;从不同生长年份甘草的根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度从5.0×104cfu/g~2.9×107cfu/g鲜重不等。采用平板对峙方法筛选出6株对植物病原菌有明显体外拮抗活性的菌株,通过菌落、菌体形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析,同时结合Biolog细菌自动鉴定系统验证,鉴定这6株拮抗菌分属萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Paenibacillus ehimensis。     

甘草内生细菌的分离及拮抗菌株鉴定

从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株,经初步鉴定芽孢杆菌属（Bacillus sp.）为优势种群,约占30%;从不同生长年份甘草的根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度从5.0×10⁴ cfu/g～2.9×10⁷ cfu/g鲜重不等。采用平板对峙方法筛选出6株对植物病原菌有明显体外拮抗活性的菌株,通过菌落、菌体形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析,同时结合Biolog细菌自动鉴定系统验证,鉴定这6株拮抗菌分属萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Paenibacillus ehimensis。     

产胞外多糖植物内生菌的分离和鉴定

利用平板涂布法从胡萝卜、芦荟、土豆、地瓜和紫薯样品中分离得到24株细菌,利用苯酚硫酸法测定菌株胞外多糖的产量,最终得到3株高产胞外多糖的细菌菌株25-Z-1、25-Z-3和12-L-6。经16S rDNA序列测定及系统发育分析,从紫薯样品中分离得到的25-Z-1与Bacillus pumilus strain ST277处于同一分支,相似性达到100%;25-Z-3与Bacillus cereus strain Se05处于同一分支,相似性达到99%;从芦荟中分离得到的12-L-6与Bacillus sp.GZT处于同一分支,相似性为99%。在LB液体培养基中,发酵温度30℃,摇床转数170 r/min条件下,发酵7 d后胞外多糖产量可分别达30.3 mg/L、29.1 mg/L及28.2 mg/L。     

酵母蛋白多糖的分离纯化及鉴定

以热带假丝酵母和八孢裂殖酵母为材料,通过化学抽提法得到多糖粗取物,经DEAE纤维素阴离子交换柱分离纯化得到组分Ma和Mb,经Sephadex G200柱层析鉴定,它们为均一成分,分子量分别为438kD和667kD;蛋白分析表明Ma和Mb为蛋白多糖;经薄层层析和高压液相分析,Ma主要含甘露糖,Mb则由甘露糖和半乳糖组成,其摩尔比为1.3∶1;氨基酸组成分析表明Ma和Mb含有4种极性氨基酸和12种非极性氨基酸;经邻苯三酚自氧化法检测Ma与Mb均能抑制邻苯三酚自氧化,具有体外抗氧化能力。动物实验表明Ma和Mb具有抑制小白鼠肝癌H22实体瘤的作用。     

水溶性甘草多糖的分离纯化、结构及生物活性研究进展

甘草是广泛使用的中药材之一.甘草中含有多种活性物质,甘草多糖作为主要的活性大分子,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗补体以及免疫调节等生物活性.本文对近年来水溶性甘草多糖的分离纯化、结构解析以及生物活性研究的最新进展进行综述.     

山西甘草中两种新化学物质的分离鉴定

从山西甘草中分离出八种化合物（1－Ⅷ）^[6]。本文报道两种新化合物（Ⅶ）;3β－羟基－11－氧化－齐墩果－12－烯－30－羧基－3－O－β－D－葡萄吡喃糖醛酸正丁酯（1－2）－β－D－葡萄吡喃糖醛酸乙酯甙,被命名为乌拉尔甘草皂甙甲乙基正丁酯（Ethyl-n-butyl-Uralsaponin A esters)。化合物（Ⅷ）：3β－羟基－11－氧化－齐墩果－12－烯－30－羧基－3－O－β－D－葡萄吡喃糖醛酸正丁酯（1－2）－β－D－葡萄吡喃糖醛酸甲酯甙,被命名为乌拉尔甘草皂甙甲甲基正丁酯（Methyl-n-butyl Uralsponin A esters)。     

霍山石斛多糖的分离鉴定及药理活性研究进展

霍山石斛是我国传统医药中的一种名贵中药材,拥有中华九大仙草之首的美誉,明确收录于《本草纲目拾遗》,其干燥茎和鲜品均可入药,具有悠久的药用历史和良好的药用价值。近年来,国内外学者对霍山石斛多糖的结构分析和药理活性等方面进行了大量深入研究,为霍山石斛资源的开发利用提供了理论依据,通过相关文献查阅,本文主要就霍山石斛多糖的分离鉴定及药理活性相关研究进展进行概述,为霍山石斛多糖的进一步研究奠定基础。     

香菇菌丝体多糖的分离鉴定与免疫功能研究

从香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝体提取得到的粗多糖,经ＤＥ５２柱层析,得到均一的多糖成分,命名为ＬＥ。其平均分子量为５．０８×１０５,ＬＥ经红外（ＩＲ）和紫外（ＵＶ）光谱分析,为多糖蛋白质复合体,其中糖含量为９４．２％,蛋白质含量为５．８％。完全酸水解表明糖组成为单一的葡萄糖,蛋白质组成主要为Ａｌａ等１６种天然氨基酸。ＬＥ经完全甲基化、酸水解、乙酰化、薄层层析（ＴＬＣ）和［１Ｈ］核磁共振（［１Ｈ］ＮＭＲ）分析,确定其多糖部分的基本结构为１→３连接的葡聚糖,含有部分１→６侧链。此外,用反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ）和生物测定法分别研究了健康人外周血单核细胞中白细胞介素２（ＩＬ２）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）的基因表达和活性,结果发现ＩＬ２和ＴＮＦα的基因表达和活性均高于空白对照组,这表明ＬＥ可诱导某些免疫反应。     

龙须菜免疫活性多糖的分离纯化及结构鉴定

利用小鼠淋巴细胞增殖模型,筛选龙须菜中具有免疫活性的多糖,并对其结构进行鉴定。活性筛选与分离纯化相结合,经室温提取,DEAE-Sepharose F.F.离子柱和凝胶Sephacryl S500层析,分离纯化得到具有刺激小鼠脾淋巴细胞增殖活性的龙须菜多糖GCpF2-3B。免疫实验表明,GCpF2-3B在较低浓度10μg/mL就表现出刺激作用(增殖率135%),当浓度为50μg/mL时增殖率达到最高(195%)。高效渗透色谱HPSEC层析纯度鉴定和紫外扫描表明GCpF2-3B为均一多糖,分子量约为1.03×105Da。红外光谱扫描显示,GCpF2-3B为典型的含硫酸基团多糖,具有糖类特征峰和总硫酸基吸收峰;13C NMR谱显示GCpF2-3B主要由交替相连的(1→3)-β-D-半乳糖和(1→4)-α-L-3,6-内醚半乳糖重复二糖组成。     

一株海藻多糖降解菌的分离与鉴定

【目的】从腐烂的褐藻中筛选一株海藻多糖降解菌,编号L206,分析其对不同多糖的降解能力。【方法】通过形态观察、生化单因子试验及16S r RNA基因鉴定细菌,DNS法测定海藻多糖降解酶活性等。【结果】海洋细菌L206,革兰氏阴性短杆菌,生长对数期为3-21 h,适宜生长的Na Cl质量浓度为0-3%(质量体积比);通过16S r RNA基因鉴定为白色噬琼胶菌(Agarivorans albus);L206被海带粉诱导至72 h时,综合复合酶活力达到最大,其中淀粉酶活力最高(28.17 U/m L),木聚糖酶次之(23.83 U/m L)。【结论】白色噬琼胶菌L206是一株多能型多糖降解菌,对褐藻多糖有特殊的降解能力,具有潜在开发价值。     

甘草多糖免疫调节作用的研究

目的：研究甘草多糖对小鼠免疫系统功能的影响。方法：以体内给药方式,对实验动物进行碳粒廓清实验、淋巴细胞增殖实验、血清溶血素水平测定实验,研究甘草多糖对非特异性和特异性免疫系统的影响。结果：实验表明,与空白对照组进行比较,低、中、高剂量多糖给药组小鼠的免疫能力均有显著性提高（P〈0.05）,并呈现一定剂量依赖关系,且达到阳性对照药物组水平。结论：甘草多糖对正常小鼠的免疫能力有促进作用。