结晶紫染色法显示弹力纤维的应用

病理诊断常用 Comori醛复红 ,Weigert来复红 ,Verhochff法 Unna地衣红对弹力纤维[1] 进行特殊染色来观察显示皮肤、肺、血管组织中弹力纤维的增生、变性、散乱、断裂 ,其染色结果可呈紫色、兰黑色、褐色 ,但复染苏木素定位胞核和 VG显示胶原纤维染色后 ,对比不鲜明 ,经尝试用结晶紫改良 Weigert染色法后 ,弹力纤维呈绿色 ,胶原纤维红色 ,肌肉组织及背景黄色 ,对比鲜明 ,色彩艳丽、清晰 ,收到了理想效果。材料和方法1 .材料1 .1　标本来源 :本室活检和尸检正常或病变的心肌、皮肤、肺组织 ,经福尔马林固定 ,常规石蜡切片 5 μm。1 .2　染…     

心室肌的大体与显微的层次解剖研究

目的:通过对心室肌的大体解剖与组织学切片显示心室肌纤维的层次走向,比较心肌传统概念与心肌带理论的差异.方法:(1)应用大体解剖、组织切片HE染色、虚拟切片扫描方法显示心室肌的纤维走向及层次构造.(2)将防腐固定后的成人正常心脏顺心肌纤维方向分层解剖心肌,使之展开成带,验证心肌带理论.结果:将防腐固定的成人正常心脏经改良的解剖方法解剖,可解剖出一条完整的心肌带,分为2个环,4个段.心肌带呈螺旋走向.用大体解剖与组织切片HE染色、虚拟切片扫描显示右心室肌起始于纤维三角为一条单层肌肉带,左心室肌分为三层肌纤维起始于纤维三角与纤维环,肌纤维从纤维三角与纤维环持续由外向内转变呈现为一种交错结构,纵行的浅层心肌纤维在心尖以90°的角返回心底方向,构成深层心室肌形成肉柱,部分心肌纤维斜、横行构成中层心室肌.三者在心尖呈现出一种螺旋形结构.应用虚拟切片扫描技术能完整、清楚地显示心室肌某一切面的结构走向.结论:心肌传统理论与心肌带理论并未完全冲突,心肌带理论的降段、左室断、升段与传统理论的浅、中、深三层相对应.     

中国大鲵幼体的性别分子鉴定与性腺形态

为探明中国大鲵(Andrias davidianus)雌雄幼体的性腺发育特征,确定适合的性别分子鉴定方法,对15尾5月龄和17尾17月龄养殖个体进行形态测量、解剖观察、性腺组织切片及PCR扩增雌性特异DNA片段。结果发现,引物adf225和adf340的扩增效果好,判定5月龄个体8雌7雄;17月龄个体8雌9雄,与依据性腺形态结构区分的结果一致。体视显微镜下5月龄幼体中肾腹侧有两条半透明细条状的原始生殖嵴;组织切片显示生殖细胞形态分化不明显。17月龄卵巢波浪状弯曲,有颗粒感,精巢呈光滑的白条状,形态分化明显;组织切片显示,卵巢分化出体积较大的卵母细胞,同时保留原始卵泡,精巢分化出生精小叶和精原细胞、支持细胞。外形测量显示,5月龄与17月龄性二型不明显,不能根据外形判断性别。本研究确定了大鲵幼体性别分子鉴定的最佳引物,可用于养殖过程中雌雄选配,以节约资源。     

角膜上皮细胞代谢的研究进展

角膜上皮层位于角膜表面,外邻泪膜,内与角膜前弹力层相连。角膜上皮细胞代谢所需营养及氧分主要通过泪膜、房水和角膜缘毛细血管运送。正常的角膜上皮细胞代谢是维持角膜上皮细胞正常增殖与分化状态的关键。角膜上皮细胞代谢异常可导致上皮损伤或变性,是多种角膜疾病的病理基础。本文就近年来关于角膜上皮细胞代谢相关的组织结构、营养来源、细胞增殖分化以及相关疾病的研究进展进行综述。     

声带组织切片方法的比较

目的:探讨犬声带冠状位切片与水平位切片各自的特点,为声带实验提供合适的切片方法。方法:家犬4只,2只取材后行冠状位石蜡切片,2只取材后行水平位石蜡切片。通过HE染色观察声带固有层的一般组织结构,Masson三色染色观察固有层中胶原的排列情况。结果:HE染色示冠状位、水平位切片均可见声带表面被覆复层鳞状上皮,固有层内有大量排列紧密的纤维组织,纤维组织中夹杂少量腺体,固有层下方为肌层。冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的情况,若观察整个声带的情况需声带连续切片;水平位切片可在一张切片中观察到前联合、声带膜部及声带突部位的固有层情况,解剖标志明显,利于定位。Masson三色染色示冠状位、水平位切片均可见固有层浅层有较细的胶原纤维束,中层有较粗的纤维束与较细的纤维束交织排列,深层纤维束排列更紧密。结论:冠状位切片可观察声带某一点冠状面固有层的整体情况,水平位切片可在一张切片中观察到前联合、膜部及声带突部位的固有层情况。     

新鲜组织肥大细胞快速染色方法的探讨与应用

目的探讨如何在组织内更好地显示肥大细胞。方法取大鼠后肢皮肤组织,经恒冷箱切片机切片,然后将组织切片直接入1%甲苯胺蓝染液进行染色。结果在新鲜组织切片内可见到较多充满蓝紫色颗粒的肥大细胞和它们分泌的蓝紫色颗粒。结论新鲜组织直接进行甲苯胺蓝染色可显示较多的肥大细胞。     

小儿心内膜纤维弹力组织增生症临床病理观察

目的:进一步认识小儿心内膜纤维弹力组织增生症的临床病理学特征。方法:收集我院3例尸检及1例心内膜心肌活检病例,结合临床病史、心电图、心脏超声心动检查及病理学常规及特殊染色。结果:心脏形态学改变,表现为心脏增大,质量增加,以左心室增大为主,右心室也可增大;心内膜呈弥漫或不规则增厚。光镜下,心内膜弹力纤维及胶原纤维明显增生,平行排列呈十余层,弹力纤维染色阳性。结论:本病预后差,病理诊断应与心内膜心肌纤维化病进行鉴别,必要时做心内膜活检确诊。     

心肌闰盘横纹切片制作改良法

心肌闰盘(intercalated disk)为心肌组织内同步兴奋的特化结构.心肌细胞末端互相连接成网,闰盘分布在细胞间连接处,在HE染色标本中呈深红色,需仔细辨认才行.而心肌闰盘及横纹是心肌结构中必须要观察的一部份,常规方法显示其结构,如Retterr氏法、Hemalinin氏法以及碘酸钠-苏木精心肌闰盘整块染色法,但步骤繁琐,染色不够稳定,常消耗大量的药品和人力.经我们改进整块组织染色切片,比其单片染色的更加清晰可辨,且易于批量制作教学切片.简介如下.     

乳腺穿刺组织冰冻快速制片及注意事项

乳腺肿瘤是女性最常见的疾病之一,其早期诊断和早期治疗对预后至关重要。目前,对于乳腺肿块,临床常采用细针穿刺获得组织,送病理科进行快速冰冻切片确诊。冰冻切片质量的好坏直接决定诊断的准确率,但由于乳腺穿刺标本组织小,脂肪、纤维成分较多,给制片和诊断带来一定的困难,常出现切片不全、组织切完、脱片、染色不均匀、冰晶等现象,为解决上述问题,近年来,我们经过500多例乳腺穿刺标本的实践摸索,获得了一些经验,现介绍如下：     

人鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白的共聚焦激光扫描显微镜观察

为探讨高分化和低分化鼻咽癌细胞纤维肌动蛋白（F-actin)的空间结构,采用共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合异硫酸氢荧光素－鬼笔环肽（FITC－phalloidin)标记F-actin、碘化吡啶（PI）标记核酸的荧光探针双重标记技术,对鼻咽癌细胞F－actin进行光学切片、三维重组及形态学观察。实验结果可见高分化鼻咽癌细胞F－actin呈芒刺状分布于细胞表面,而在细胞突起末端细胞间连接处呈束状,放射状密集分布;代分化鼻咽癌细胞F－actin明显少于高分化鼻咽癌细胞,仅沿细胞膜表面呈弯曲细小绒毛状分布。结果表明F－actin在细胞内的空间分布与鼻咽癌的分化类型有关,肿瘤或恶性转化细胞的F－actin在形态和结构方面有异常改变;共聚焦激光扫描显微镜光学切片结合荧光双重标记技术是研究细菌骨架结构的理想方法。     

miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节与心血管疾病

miRNA(miRNAs)是一类长约18～24个核苷酸的高度保守性的小分子非编码RNA,主要通过与特异性靶基因mRNA 3’-UTR区结合来调控基因的表达。miRNAs与细胞增殖、分化、凋亡、胚胎发育、组织器官等形成以及多种疾病的发生发展密切相关。新近研究显示,miRNAs对血管心血管平滑肌细胞功能及心血管疾病的发生发展起着重要的调节作用。本文就miRNAs对血管平滑肌细胞功能的调节及心血管疾病的病理生理学意义作一概述。     

间充质干细胞的生物学特性及心血管修复潜能的研究进展

间充质干细胞存在于成体组织中,来源于骨髓、脂肪组织等,在体外易分离和培养,是具有塑料粘附性的一群非均质细胞。它们具有分化的潜能,在适当的条件下可分化为心肌和血管。临床前期研究显示,在心脏损伤模型中移植间充质干细胞有利于心肌修复和心血管形成。其作用机制与间充质干细胞再生和旁分泌能力密切相关。在临床应用中,间充质干细胞具有免疫抑制作用,也可用于异体移植。总之,虽然间充质干细胞的研究尚有许多问题亟待解决,但是它在心脏疾病的细胞治疗和组织工程中已显示出广阔的前景。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

巨峰葡萄花芽分化的研究

以巨峰葡萄(Vitis vinifera L.×V.Labrusca L.cv.Kyoho)为材料,用摘叶、去穗法判定花芽的生理分化期,并用GMA半薄切片法观察花芽分化进程。结果表明:从新梢顶端到第9个展开叶之间的芽处于生理分化期,花芽生理分化期分为成花诱导期和花芽孕育期。葡萄的花序分化阶段可分为未分化期、花序原基分化期和花序第二穗轴分化期3个时期。第1年只进行花序分化,次年进行花器官分化。原分生组织衍生的组织中淀粉粒分布较多,蛋白质则在分裂旺盛的原基组织中含量高。     

自组装多肽纳米纤维支架诱导骨髓间充质干细胞定向分化

组织工程是现代修复重建医学领域的新思路,生物支架和种子细胞是组织工程两大关键要素。自组装多肽纳米纤维支架(SAPNS)是两亲性多肽(PAs)分子在一定条件下自组装成的一类具有三维网状结构的新型生物支架,其结构、生物功能、机械力学等特性类似天然细胞外基质(ECM),其内部经功能化修饰的抗原表位以高浓度呈递在纳米纤维表面并高效选择性地调控种子细胞生物学行为。种子细胞是组织成功再生的必需条件,骨髓间充质干细胞(BMSCs)因其良好的自我更新和多向分化潜能成为了组织工程最佳候选细胞。体外实验表明经特异功能化修饰的SAPNS在有/无辅助因子条件下可促进BMSCs黏附、增殖、迁移和定向分化,动物模型体内实验发现SAPNS结合BMSCs构建的组织工程移植物可修复缺损部位的组织结构和功能,故其在修复重建医学中有良好的应用前景。对SAPNS、自组装、BMSCs、SAPNS诱导BMSCs定向分化等方面进行了综述。     

南方大口鲇消化道细菌群落结构与其胃肠分化的关系

以肉食性南方大口鲇(Silurus soldatovi meridonalis Chen)为对象, 研究采用PCR-DGGE指纹技术对其仔稚鱼胃肠道分化过程及细菌群落结构进行了对比分析, 进而探讨了细菌群落与胃肠道分化的关系。消化道外部形态和胃肠切片显示13日龄样品起, 胃肠在结构上出现较大的分化。DGGE分析结果显示胃肠道细菌群落的分化始于18日龄:从18日龄样品起, 肠内细菌群落明显开始分化, 但在随后的1833日龄期间细菌群落结构相对稳定, 而胃内细菌群落则一直处于动态变化中。这说明, 南方大口鲇仔稚鱼的个体发育过程中, 随着胃肠在组织结构上的分化, 其消化道细菌群落结构也出现了明显分化, 并且胃和肠内细菌群落结构的分化在时间上存在差异。该研究结果将为深入研究胃和肠内细菌群落的功能差异提供基础资料。       

肥大细胞的研究进展

肥大细胞作为主要的免疫细胞之一,不仅参与机体过敏、炎症,组织损伤修复、免疫等反应,还与很多生理病理过程有关.它的分化、成熟、激活和介质的释放都受到严格的调控.对肥大细胞的深入研究既可以使我们更加透彻地了解过敏、炎症和免疫性疾病的机理,也可以为此类疾病的预防和治疗提供有价值的参考和借鉴.     

两种绣眼鸟脑组织结构观察

以石蜡包埋,HE染色和连续切片,在光镜下观察绣眼鸟脑组织结构,显示红胁绣眼鸟和暗绿绣眼鸟的视叶和小脑结构较发达,在冠状面上显示大脑表层神经元多而密集,但与其深层脑组织无明显分界。视叶神经元呈层状排列,并与大脑有脑室相隔,有束状纤维与间脑相连。     

PtK2细胞的核骨架—核纤层—中间纤维体系

本文用选择性系列抽提的方法结合整装细胞电技术和ＤＧＤ包埋－去包埋超薄切片技术,在电镜下清晰地显示了ＰｔＫ细胞的核骨架－核纤层－中间纤维绵精细结构。处于分裂中期的细胞经抽提后看到,染色体残３余与中间纤维仍然保持一定的联系。用免疫荧光技术对提提后的ＰｔＫ２细胞进行分析结果表明：其中间纤维能同时与ＡＥ１和ＡＥ３反应;能一ＬａｍｉｎＢ反应的单抗可以特异地定位于其核周,而ＬａｍｉｎＡ（Ｃ）的单抗除了与其核纤     

microRNA原位杂交技术影响因素的探讨

目的探讨miRNA原位杂交技术的多种影响因素,以完善miRNA原位杂交分析方法。方法选择不同组织来源、保存时间、切片厚度的常规病理组织切片进行U。探针的原位杂交分析;选择不同浓度的蛋白酶K对组织切片与MDA-MB-23l爬片细胞进行U。探针的原位杂交分析;实时定量RT-PCR方法和爬片细胞原位杂交对BT549、T47D细胞株进行miR_375的表达分析。结果不同组织来源、保存时间、切片厚度的石蜡标本均能显示细胞核内的u。表达;组织切片原位杂交实验中,乳腺组织切片20μg／ml的蛋白酶K作用组较其他组的原位杂交效果好;肝脏组织切片200μg／ml的蛋白酶K作用组的显色最好;爬片细胞原位杂交实验中,2μg／ml的蛋白酶K作用组的显色更深;U6与miR-375的原位杂交最适浓度分别为lng／ml和l00ng／ml;实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交结果均显示,BT-549的miR-375表达明显低于T47D。结论miRNA原位杂交操作能在常规固定并长期保存的石蜡组织标本上操作;蛋白酶K与探针的浓度应当依据病理标本类型等多因素预实验摸索;细胞水平的实时定量RT-PCR和爬片细胞原位杂交分析结果的比对为确定miRNA探针的特异性提供了帮助。