纳米生物条形码技术在分子诊断中的应用

纳米生物条形码技术是一种新型的分子诊断技术,在核酸和蛋白质检测领域已经分别达到和超过现今的检测灵敏度.该技术采用纳米颗粒修饰的核酸或抗体对靶分子进行识别,并利用磁场将其分离,操作简单,不依赖酶反应,具有广泛的应用前景.该技术在病毒DNA、癌症的指标蛋白质等方面的应用已有文献报道,并有望成为一种常规的分子诊断工具.     

一种简便、快速从病毒感染鱼、虾组织中制备PCR模板的方法

以虹彩病毒(iridovirus)感染大黄鱼的脾组织、对虾白斑杆状病毒(whitespotsyndromebaculovirus,WSBV)感染中国对虾的肌肉组织为材料,采用一种简便、快速的方法获得了可满足病毒PCR检测的高质量模板DNA,分别以针对虹彩病毒、WSBV的特异性引物进行PCR扩增,均能有效扩增出预期的条带。与常规DNA病毒模板制备方法相比,具有简便、快速、提取率高、无污染等优点,尤其适用于水产动物病毒PCR检测试剂盒的商品化开发及生产实际应用。     

兔出血症病毒核酸的某些理化性质的研究

本文对我国无锡分离的兔出血症病毒A_2R-3毒株核酸的某些理化性质进行了研究。采用孚尔根染色、二苯胺反应和核酸酶解实验证实病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色、甲醛反应、核酸酶S_1消化和核酸热变性实验表明病毒核酸为单链型。核酸电泳呈单一组分。电境观察显示核酸分子链呈线状,平均长度约为2.15μ。计算分子量约为2.1—2.5×10~6d。核酸碱基组盛为A25.34、T29.37、G23.85、C21.43、(G C)克分子百分比值为45.28。结合以前的报道、我们认为:兔出血症病毒可以归类于细小病毒科。     

诊断人类病毒性疾病的核酸探针

<正>重组DNA技术领域内的最新进展已使人们可能在诊断人类病毒感染中应用核酸探针。可以在分子水平进行整个病毒的核酸顺序测定和病毒的核酸定量及流行病学的研究。核酸杂交法可以应用于致病病原的研究,特别是那些在很久以前获得的而病毒基因组又是唯一存留的证据的病毒感染。此外,原位杂交技术能够在组织切片的特异细     

多重RT-PCR同时检测鉴别三种对虾病毒的研究与应用

根据基因库中对虾桃拉综合征病毒（TSV）、白斑综合征病毒（WSSV）、传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）的基因序列,分别设计了三对特异性引物,通过对多重RT—PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的多重RT—PCR。该技术对同一样品中的TSV RNA、WSSV DNA和IHHNV DNA模板进行扩增,结果均同时得到3条大小与实验设计相符的231bp（TSV）、593bp（WSSV）和356bp（IHHNV）的特异性多重RT—PCR扩增带,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到10pgTSV RNA、100pg WSSV DNA和100pg IHHNV DNA。临床检测试验结果表明,该技术对TSV、WSSV和I—HHNV的检出率明显高于传统的临床症状观察和组织病理学检查,提示该技术适用于这三种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。     

滚环扩增信号放大技术在生物检测中应用的研究进展

滚环扩增(Rolling circle amplification,RCA)是一种快速、灵敏且恒温的单链DNA(Single-stranded DNA,ssDNA)扩增技术,与染色或探针联用可实现检测信号的放大,在生物检测等方面得到广泛的应用。文中对RCA的构建方法进行了简介,综述了近几年其在致病菌、核酸肿瘤标记物、蛋白质、生物小分子和病毒等检测中的研究进展,并对其未来的发展趋势进行了展望。     

核酸的电镜细胞化学实用方法

核酸是生命活动中最重要的基本成份之一。鉴定或定位超微结构上的核酸,在生物学研究中具有重要意义。本文介绍了应用电镜技术在生物超微结构上鉴定或定位核酸的若干研究方法。根据所确定成份的不同,这些方法可分为三类。第一类是对总核酸的鉴定,第二类是对DNA特异地染色鉴定;第三类是对RNA选择性染色鉴定。     

组织保护液在NADH-TR组织化学方法中的应用

还原型辅酶 四唑氮还原酶 (NADH- TR)组织化学方法是区别肌肉 、 型纤维的重要技术 ,该酶的显示对神经肌病的病理诊断和鉴别诊断具有实用意义。传统的酶组织化学方法 ,染色前多采用 1 %甲醛 -钙液及丙酮等固定液在 4℃下对组织进行处理 ,而后冰冻制片。实际应用中发现 ,经这些方法处理的组织 ,染色后酶活性明显降低 ,且容易扩散。我们经大量实验 ,在酶显色前 ,改用自行研制的组织保护液 (Tissue Protection Solution,TPS)对组织进行前期处理 ;同时对孵育液的配方进行改良 ,收到了理想染色效果。现将此法介绍如下 :1 .材料和方法1 .1…     

2种核酸染色方法的比较

目的:比较前染和后染等2种核酸染色方法对凝胶中DNA的染色效果,及其对染料染色灵敏度的影响,并验证新型核酸染色剂SYBRGreenⅠ能否代替传统染料溴化乙锭(EB)用于常规电泳中DNA的染色。方法:分别用SYBRGreenⅠ与EB采用2种不同的方法对凝胶中的DNA进行染色。结果:前染和后染的染色效果无显著差别,2种染料都能显示出10ng以下的DNA条带。结论:前染和后染方法的染色效果相当,染料SYBRGreenⅠ和EB均可用于这2种染色方法;新型染料SYBRGreenⅠ可代替强致癌性染料EB,用于常规凝胶中DNA的染色。     

一株貂肠炎病毒某些特性的研究

采用猫肾传代细胞FK增殖华东地区分离的貂传染性肠炎病毒(mink infectious enteritis virus,MEV-S_1)能产生明显的细胞病变。浓缩的病毒液经Sepharose-4B柱层析提纯处理后置电镜下观察,可见典型的病毒粒子。经蛋白酶K、SDS裂解病毒,用苯酚-氯仿法抽提病毒核酸,二苯胺试验和酶消化试验表明该病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色试验表明该DNA为单链。甲酰胺法进行核酸分子展层,病毒核酸呈线状,长度为1.5～2.0/μm。     

对虾白斑病毒感染的电子显微镜观察及DNA杂交证据

中国大陆养殖的中国对虾从1993年开始至今连年爆发病 毒性流行病,俗称“白斑病”(WSBV),死亡率近100%,造成巨大经济损失。为进一步明确虾病暴发原因,利用电子显微镜技术,对1993年至1998年收集的发病中国对虾组织进行观察,发现病原体为直径(125±76)nm、长约(345±16)nm大小的带包膜的非包涵体型杆状病毒。 经氯化铯密度梯度超速离心技术获得了纯化的病毒核衣壳,大小为(80±13)nm×(380±24)nm。形态学特征与台湾地区发现的白斑杆状病毒(WSBV)相似。利用地高辛标记的WSBV DNA探针对病虾标本及纯化病毒DNA进行斑点杂交检测,均呈阳性反应,而与正常对虾组织无杂交反应。从形态学及分子生物学角度证明WSBV感染是造成中国大陆养殖对虾连年暴发流行病的重要原因。     

聚合酶链反应在兽医诊断病毒学中的应用

用直接或间接的诊断方法检测病毒感染。 所谓直接方法,即是检测样品中的病毒粒子或它们的某些成分,如:病毒核酸或病毒蛋白。最普通的常规直接诊断法是一种叫做‘黄金标准’的方法,包括:分离病毒并进行电镜观察、用抗原-ELISA检测病毒抗原、补体结合检测和免疫荧光测定、以及免疫过氧化物酶或过氧化物酶-免疫过氧化物酶染色法。     

大鳄龟感染蛙病毒的PCR检测及组织病理分析

2013年3月成都市某海洋馆送检2只发病大鳄龟(Macrochelys temminckii),临床特征表现为:精神状态萎靡,爬行无力,对外界刺激反应迟钝;颈部和四肢局部红肿,腹甲溃烂,严重部位甚至穿孔,最后死亡。为明确患病大鳄龟的病因,进行了细菌学、组织病理学和PCR检查。细菌学检查阴性;病理组织学观察发现,大鳄龟多组织、器官均发生严重病变,尤其是肾、肝、肺和心的损伤最为严重,表现为明显的变性、坏死和炎症细胞浸润,并在一些病变组织细胞浆内见嗜酸性或嗜碱性包涵体。针对蛙病毒(Ranavirus)病毒的特异性PCR检测扩增出蛙病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因500 bp目的片段,测序后的DNA序列与Gen Bank中已知核酸序列进行Blast比对,发现其与Gen Bank中的蛙病毒主要衣壳蛋白基因同源性达95%~99%。根据组织病理特点及PCR检测结果推测大鳄龟的死亡是感染蛙病毒所致。     

间接核酸杂交方法的建立

建立了一种新的核酸杂交手段一间接核酸杂交方法,其突出的优点是用一种共同的核酸标记物就可检查不同的基因组或不同的基因。我们重组乙型肝炎病毒或EB病毒的核酸片段于噬菌体M_(13)mp8载体,以此重组的单链DNA为第一夹心层,用~(32)P标记的双链噬菌体DNA作为共同探针,检查乙型肝炎病毒和EB病毒的核酸,获得满意的结果。应用该法进行细胞内的原位杂交,检查细胞内存在的EB病毒基因效果亦佳。     

鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析

为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析.结果表明所获病毒核酸为大小1 995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在GenBank中克隆株MuDCV(AY228555)的同源性高达97.4%,可见所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列.     

对虾病毒病病毒和细菌合并感染的病理特点和诊断价值

应用电镜超薄切片及光学石蜡切片和环氧树脂薄片技术,观察健康对照组、疾病始发组和濒临死亡组的草虾、中国对虾、日本对虾和长毛对虾的肝胰腺和中肠,结果在３组４种对虾中均检测到病毒,只在濒临死亡组的４种对虾中发现病毒与细菌的合并感染。合并感染的病毒有ＭＢＶ、球形病毒和淋巴样细胞核型杆状病毒。细菌以弧菌为主,其病理变化表现为器官和组织的保护层受损、溶解样坏死和凝固样坏死。仅以病毒和细菌合并感染作为养殖对虾病毒病早期诊断的指标是不够的,仅可作为辅助性诊断指标。但合并感染对评估对虾病毒病的预后以指导捕捞,却有一定意义。     

对虾白斑综合征杆状病毒同源性比较的研究

比较我国沿海不同海域对虾白斑综合征杆状病毒三个分离株即唐海分离株（渤海湾）,宁波分离株（东海）,深圳分离株（南海）的同源性。三个WSSV分离株基因组的限制性内切酶(Sac I,Hind III,Pst I)酶切多态（RFLP）以及病毒结构蛋白图谱完全一致,证实造成我国从南至北对虾爆发性流行病的对虾白斑杆状病毒为同一种病毒。利用高保真Taq酶,分别以报道的日本对虾杆状病毒（RV-PJ＝PRDV）,斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV＝PmNOBIII）基因组核酸片段特异性引物进行PCR扩增,结果均能从中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）基因组中扩增得到相应大小的PCR产物,扩增产物序列分析表明中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）与斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV＝PmNOBIII）,日本对虾杆状病毒（RV－PJ＝PRDV）同源率分别为100％与97％,其结果为证实亚洲及太平洋地区对虾白斑综合征杆状病毒为同一种病毒或同一种病毒的不同株系提供了证据。     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

一株人乳头瘤病毒阳性的新的食管癌细胞系的建立及鉴定

为了探讨人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)与上消化道肿瘤食管癌关系,从食管癌高发区安阳市取到一例76岁的中国女性食管鳞癌患者肿瘤组织。通过直接SCID小鼠致瘤实验,可长成移植瘤。取出组织做组织培养并多次纯化传代筛选后,成均一单层细胞。分别进行免疫荧光,细胞生长曲线,软琼脂鉴定,染色体分析,细胞致瘤实验及瘤体切片HE染色等确定是上皮细胞来源的癌细胞。利用细胞STR分型结果显示,基因座均未出现三等位基因现象,无人类细胞交叉污染。对细胞DNA分析发现存在HPV18型的DNA。利用蛋白检测实验发现有HPV病毒癌蛋白表达。结果表明,所建细胞株为有HPV核酸存在并能表达病毒癌蛋白的新的食管鳞癌细胞株。为我们进行食管癌的发生发展的病因学研究提供了新的细胞学材料。     

对虾白斑综合征杆状病毒同源性比较的研究

比较我国沿海不同海域对虾白斑综合征杆状病毒三个分离株：即唐海分离株（渤海湾）、宁波分离株（东海）,深圳分离株（南海）的同源性。三个WSSV分离株基因组的限制笥内切酶（Sac Ⅰ,HindⅢ,PstⅠ）酶切多态（RFLP）以及病毒结构蛋白图谱完全一致,证实造成我国从南对北对虾爆发性流行病的对虾白斑杆状病毒为同一种病毒。利用高保真Taq酶,分别以报道的日本对虾杆状病毒（RV－PJ－PRDV）,斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV－PmNOBⅢ）基因组核酸片段特异性引物进行PCR扩增,结果均能从中国一杆状病毒（WSSV）基因组中扩增得到相应大小的PCR产物,扩增产物序列分析表明中国对虾白斑杆状病毒（WSSV）与斑节对虾白斑综合征杆状病毒（WSBV－PmNOBⅢ）,日本对虾相状RV-PJ=PRDV)同源率分别为100％与97％,其结果为证实亚洲及太平洋地区对虾白斑综合征杆状病毒为同一种病毒或同一种病毒的不同株系提供了依据。