猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株基因组序列测定和分析

应用RT-PCR方法分段扩增出PRRSV上海分离株S1毒株的4条基因大片段,扩增后的产物分别克隆于pCR-XL-TOPO载体鉴定后测序,同时应用RACE方法对S1毒株的3'和5'基因末端进行了成功的扩增并克隆于pMD-18T载体进行测序,按顺序将这些序列进行拼接得到PRRSV S1株全基因组cDNA序列.测序结果表明PRRSV S1株基因组全长15441 bp,包含9个开放式阅读框,5'UTR含有189nt,3'端UTR含有181nt,其中包含30nt Poly (A).基因组序列分析结果显示该病毒与ATCC VR-2332和BJ-4分离株的核苷酸同源性分别99.5%和99.6%.与另一国内分离株CH-1a的核苷酸同源性为90.8%.     

卫星搭载鸡冠花种子SP2代的生长、发育与性状变异研究

对卫星搭载处理的鸡冠花SP2代种子萌发、植株生长、开花以及主要性状在群体中的变异进行了观察.与对照比较,SP2种子发芽势提高,发芽率有所下降,萌发延迟.群体茎粗与对照相比显著增加;选择系在株幅、茎粗间出现了较大差异.在SP2株系间开花时间和花期出现了明显分离,株系群体中有花期明显提前和延迟的单株出现.20个株系中有16个株系的单株种子量比对照显著减少.在SP2株系中株高、株幅呈非正态分布,茎粗和花期呈偏正态分布.在处理的株系群体中有植株显著高大、多分枝、叶色、叶型、冠型、冠色及花期等显著性状变异出现,产生性状变异的单株频率为0.07％-1.26％,表明空间诱变所产生的变异性状开始在SP2代出现.     

烟草黄绿叶突变体的遗传分析与基因定位

以G117为父本、RG13为母本,杂交获得F1群体。系谱法常规选择过程中,在F3株系内发现黄绿自然隐性突变株。该突变体的叶色在旺长期前呈现正常绿色,进入旺长期后,叶色逐渐发黄,叶脉呈乳白色,与正常烟株差别明显。遗传分析表明该突变体性状受1对隐性基因控制。从来源于一个连续自交单株的分离群体中分别选取10份隐性纯合烟株和10份显性烟株,利用430K烟草高密度SNP芯片进行基因型分析,快速确定了与目标性状相关联的标记。进而利用该分离群体验证相关分子标记,将该基因定位在烟草第5号染色体M7和M18之间,并与M7标记共分离。相关研究为进一步克隆该基因奠定了基础,同时也为烟草其他重要性状的定位提供了一种有效、快速的方法。     

中华绒螯蟹MSTN基因SNPs多态性及与生长性状的关联分析

为研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肌肉生长抑制素基因(myostatin, MSTN)的多态性及其与生长性状的相关性, 对中华绒螯蟹3个群体(育种群体、大赛群体、野生群体)共321个个体MSTN基因的多态性进行筛选, 发现该基因的第1外显子存在3个多态性SNP位点(S1: C714T; S2:G729A; S3:G753T), 均为处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)的中、高度多态性位点。利用一般线性模型分析3个位点及其基因型组合与生长性状的相关性, 发现S1位点对中华绒螯蟹的体重和壳长等生长性状有显著影响(P≤0.05), 而其余2个位点与生长性状无显著关联性。结果表明S1位点的TT基因型对中华绒螯蟹的生长最为有利, 可作为分子标记辅助育种的候选标记。     

极度濒危树种羊角槭花部形态特征及开花动态

以天目山自然保护区人工栽培的濒危树种羊角槭（Acer yangjuechi Fang et P.L.Chiu）为研究对象,于花期观察了花部形态特征、单株与群体水平开花动态,分析开花与结实的关系,结果表明：1.羊角槭花杂性、顶生花序着生有雄花和两性花,两性花多位于花轴顶端,雄花位于侧生轴顶端或下部,花序雄花与两性花数量比为三角槭的2.6倍,羊角槭枝条两性花偏少;2.观察到两种形态雄花,Ⅰ型雄花子房微型、柱头极度短缩呈黑点状、花盘较平,Ⅱ型雄花子房退化成一团白色绒毛,2裂柱头隐现,花盘较厚、辐射状凹裂;两性花子房成扁球状突出,柱头显著伸出,花丝长度短于雄花;3.单株两性花早于雄花开放,两性花集中于3日以内开放,呈集中开放模式,而对应此时同株上只有极个别雄花（7%以下）处于散粉阶段;4.群体两性花开放时期略早于雄花,二者间存在相对的间隔期。由此对羊角槭开花与种胚发育影响因素进行了探讨。     

中国1995～2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析

应用RT-PCR方法扩增到了我国1995～2004年20株IBV现地分离株的膜蛋白(Membrane,M)基因片段.序列测定表明,20株IBV分离株M基因开放阅读框由672～681bp组成,编码由223～226个氨基酸残基组成的多肽.与我国分离株LX4相比,M基因推导氨基酸序列的变异主要发生在2～17位、221～223位,其中4～6位存在氨基酸的插入和缺失,导致IBV毒株间M蛋白糖基化位点的差异.与GenBank中34株IBV参考毒株M蛋白基因推导氨基酸序列进行比较和分析,系统进化关系显示54株IBV毒株分属于5个进化群.我国IBV分离株M基因在进化关系上较为独立,主要分布在第Ⅱ群和第Ⅳ群,其中第Ⅱ群分离株和中国台湾毒株进化关系密切.此外,参考IBV国内分离株S1基因及N基因系统发育进化树的研究结果,并与M基因进行比较,表明我国IBV也存在着基因重组现象,尤其是疫苗毒和流行毒之间的重组.     

哈密瓜内生菌分离实验应用于中职生物学教学的尝试

哈密瓜内生菌分离和纯化周期短,通常为15～20 d左右,即可分离出菌种,因此适合作为教学实验内容。为了解哈密瓜的内生菌生物多样性,采用菌悬液涂布法,从冷藏健康哈密瓜的深层、浅层和皮层分离内生菌,并进行分离和统计,经纯化后得到8株内生菌,其中来自哈密瓜皮层的菌株4株,占总菌株数的50%;浅层的有2株,占总菌株数的25%;深层的有2株,占总菌株数的25%。将哈密瓜内生菌的分离与纯化作为中职学校生物技术实验的内容,不仅增进了学生的感性认识,还提高了学生的实操能力,同时激发了学生的学习兴趣和热情。     

籼粳交组合培矮64S/日本晴F2、F3及F6代主要农艺性状分析

采用方差分析和相关分析等方法对籼粳交组合培矮64S／日本晴F2、F3及F6代分蘖数、有效分蘖数和株高等7个主要农艺性状进行了研究。结果表明,7个农艺性状在双亲之间均存在显著或极显著差异,亲本在不同年份和不同地点表现出较大差异,株高表现变异系数较大,分别为14．4％和22．8％。各性状在3个世代中除了F2分蘖率、F3齐穗期和F6株高,其余各性状均呈连续变异,分布频率大致接近正态分布,同时存在双向超亲分离现象。各性状不同世代相关系数有一定的变化,但不改变其方向。这些结果可以为水稻数量性状基因座分析提供有价值的信息,也可为水稻遗传改良提供理论依据：本文还对选用测序水稻品种为亲本构建群体进行农艺性状研究的意义进行了讨论。     

T-DNA插入产生的水稻迟抽穗突变体的遗传分析

在筛选和鉴定水稻T-DNA插入纯合体的过程中,观察到一个迟抽穗的突变体.对该突变体进行遗传分析的结果表明,分离群体后代中出现正常抽穗、迟抽穗和特迟抽穗3种类型,分离比率为1:2:1,符合一对基因的不完全显性遗传;对突变体及其后代分离群体做Basta抗性检测及PCR分子检测,证实该突变体是由T-DNA插入所引起的,突变性状与T-DNA共分离.该材料可用于插入座位的基因克隆.     

小麦重组近交系群体株高和千粒重的抗旱遗传特性

以小麦重组近交系(RIL)群体(陇鉴19×Q9086)120个株系及其亲本为材料,研究雨养(DS)和灌溉(WW)条件下不同发育时期株高动态发育和千粒重的遗传特点及其相互关系,并且评价群体性状的遗传变异.结果表明:在2种水分条件下,小麦RIL群体表型变异广泛且存在超亲分离,对水分环境敏感,拔节期株高具有较高的旱胁迫系数(DSC=0.851).不同发育时期株高与千粒重呈显著正相关,与其他时期相比,拔节期株高与千粒重有较高的相关系数(R2DS=0.32,R2ww=0.28).拔节期株高和开花期株高对千粒重有显著的正向直接作用,但间接总效应为负向作用;抽穗期株高和成熟期株高的作用与此相反.各性状遗传力普遍较低,为0.27 ～0.60;在雨养和灌溉条件下,控制千粒重的基因对数分别为10和13,控制株高的基因对数分别为3～7和4～ 14.表型DSC聚类将小麦RIL群体分为5类,群体内表型和对水分敏感程度变异丰富,该群体适合进行抗旱性状数量遗传研究.     

新疆吐鲁番荒漠土壤绿藻的多样性分析

应用RAPD技术对吐鲁番地区火焰山及艾丁湖区域分离的15株土壤绿藻(chlorophyta)品系的遗传多样性及其亲缘关系进行探讨。结果表明:从20个随机引物中,筛选出多态性和重复性较好且谱带清晰的引物8个,这8个引物扩增出的DNA片段大多在300～2 000 bp之间,所形成的多态性位点数差距较大,显示该区域土壤绿藻具有较丰富的遗传多样性;15株土壤绿藻扩增共得到74条谱带,71条多态性带,其多态性比率为95.95%;聚类分析显示15株土壤绿藻明显地聚为2大类,与其来源相对应,即隶属于同一亚组或相近亚组的不同种基本归为一类,其种间关系与传统的形态学分类结果相吻合。     

甜菜夜蛾抗高效氯氟氰菊酯近等基因系的RAPD标记

用随机引物扩增的方法对近等基因系抗高效氯氟氰菊酯种群和敏感种群甜菜夜蛾进行比较分析,从160条引物中筛选,引物S42(GGACCCAACC)和OPH13(GACGCCACAC)在抗性种群中扩增分别得到了1条特异扩增带,带型清晰、重复性较好,所以S42和OPH13产生的两条特异扩增带是分别与甜菜夜蛾对高效氯氟氰菊酯抗性相关的RAPD分子标记。     

与棱果沙棘性别相关的RAPD标记

应用RAPD技术筛选与棱果沙棘性别相关的分子标记,对棱果沙棘雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析（BSA）,在194条随机引物中有50条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这50条引物分别对棱果沙棘雌雄个体（雌雄个体各选取5个）进行RAPD分析,其中引物S10扩增得到1个约为1030 bp的与雌性相关的RAPD标记。该标记的获得进一步表明棱果沙棘雌雄株间存在基因水平的差异,为棱果沙棘的性别研究提供分子依据。进一步利用该雌性特异位点设计出更加稳定的SCAR标记,可望用于棱果沙棘的早期性别的准确鉴别。     

银杏性别相关分子标记

利用RAPD技术寻找银杏(Ginkgo biloba L.)中与性别相关的分子标记。筛选了1200个10bp的随机引物,产生了8372个RAPD条带。只有S1478产生一条大小为682bp、雄性特异的分子标记,该分子标记被命名为S1478—682,出现在所有雄性植株中,而所有雌性植株都不具有该分子标记。通过在北京和沈阳种植的银杏植株的RAPD推广验证,说明该分子标记可以用来检测银杏植株的性别。     

利用RAPD技术鉴定海南荔枝品种光明

应用RAPD标记对6份无性系材料进行检验,20个引物对6份材料均扩增出完全相同的125条带,不具多态性,证明6份材料遗传基础高度相似。利用30个引物对光明和其他42份材料的基因组进行多态性分析,多态性位点为212个,占总数的80、83％,显示多态性较高。光明和其他荔枝品种间的相似系数均较高,与大丁香的相似系数（0．884）最高。在相似系数0．78水平上,可将供试材料分成4大类,这些类型与成熟期有一定相关,光明属于第3类。光明不具特征谱带,但可用少数引物组合将其和很多品种区别开,如利用AP09、AM16和AK17即可将光明从其他荔枝材料中鉴别出来。     

Qualitative and quantitative characterization of RAPD variation among snap bean (Phaseolus vulgaris) genotypes

Ten snap bean (Phaseolus vulgaris) genotypes were screened for polymorphism with 400 RAPD (random amplified polymorphic DNA) primers. Polymorphic RAPDs were scored and classified into three categories based on ethidium bromide staining intensity. An average of 5.19 RAPD bands were scored per primer for the 364 primers that gave scorable amplification products. An average of 2.15 polymorphic RAPDs were detected per primer. The results show that primer screening may reduce the number of RAPD reactions required for the analysis of genetic relationships among snap-bean genotypes by over 60%. Based on the analysis of the distribution of RAPD amplification, the same number of polymorphic RAPDs were amplified from different genotypes for all RAPD band intensity levels. A comparison of RAPD band amplification frequency among genotypes for the three categories of bands classified by amplification strength revealed a measurable difference in the frequencies of RAPDs classified as faint (weakly amplifying) compared to RAPD bands classified as bold (strongly amplifying) indicating a possible scoring error due to the underscoring of faint bands. Correlation analysis showed that RAPD bands amplified by the same primer are not more closely correlated then RAPD bands amplified by different primers but are more highly correlated then expected by chance. Pairwise comparisons of RAPD bands indicate that the distribution of RAPD amplification among genotypes will be a useful criterion for establishing RAPD band identity. For the average pairwise comparison of genotypes, 50% of primers tested and 15.8% of all scored RAPDs detected polymorphism. Based on RAPD data Nei's average gene diversity at a locus was 0.158 based on all scorable RAPD bands and 0.388 if only polymorphic RAPD loci were considered. RAPD-derived 1 relationships among genotypes are reported for the ten genotypes included in this study. The data presented here demonstrate that many informative, polymorphic RAPDs can be found among snap bean cultivars. These RAPDs may be useful for the unique identification of bean varieties, the organization of bean germplasm, and applications of molecular markers to bean breeding.     

油菜单显性核雄性不育基因的分子标记

以陕西省杂交油菜研究中心选育的单显性核不育油菜分离群体为材料,利用集群分离法（BSA）对该油菜单显性核不育基因进行了RAPD分析。在随机选取的300个10碱基随机引物中,引物S243（5′CTATGCCGAC3′）在可育集团与不育集团间扩增出特异而可重复的1．5kb的多态性片段OPU-031500,而在细胞质雄性不育和其它核不育类型油菜中均未扩增出上述特异性片段,从而确证此RAPD标记OPU-031500。片段是与甘蓝型油菜单显性核不育基因连锁的。将该多态性片段克隆并测序,发现其序列与拟南芥的一段DNA序列高度同源。根据同源序列及测序结果设计两对特异引物（P1／P2和P3／P4）,引物P3／P4在可育系中可扩增到约1．5kb的单一特异片断,而在不育系中无带,从而将RAPD标记转化为稳定可靠的SCAR标记。     

甘蓝型油菜Pol CMS育性恢复基因的PCR标记

采用恢、保回交群体和集团混合分析法,筛选了１０４０个１０－ｍｅｒ随机引物,找到了与甘蓝型油菜波里马细胞质雄性不育系（Ｐｏｌ ＣＭＳ）育性恢复基因（Ｒｆｐ）连锁的两个ＲＡＰＤ标记Ｓ１０１９７２０和Ｓ１０３６８１０。它们位于Ｒｆｐ的一侧,与该基因的遗传图距分别为５．８ｃＭ和１２．３ｃＭ。随后,克隆并测序这２个多态性片段,根据其２端序列设计了２对２０～２４－ｍｅｒ的特异引物,它们在１３８株的回交群体中Ｐ     

青岛市19个樱花品种的RAPD分析

采用改良的CTAB法提取19个樱花品种的基因组DNA.利用RAPD技术对19个樱花品种进行亲缘关系鉴定和品种分类研究.从60条10 bp随机引物中筛选出32条扩增效果较好的引物进行扩增,共扩增出533条带,其中多态性带为406条,多态率达76.17%.根据扩增结果进行UPGMA聚类分析,聚类结果将19个品种分为2大类群,第1类群主要为杂交樱系;第2类群为日本晚樱系,根据樱花的重瓣性、枝姿和花色又可分为不同的亚类群、类和亚类.结果表明应用RAPD技术对樱花分子水平的分类结果与传统分类学的结果基本一致,进一步证明种源、重瓣性、枝姿和花色都可作为樱花品种分类的重要指标.     

谭清苏铁性别连锁的RAPD和SCAR分子标记

利用RAPD(Random amplified polymorphicDNA)分子标记技术,寻找谭清苏铁(Cycas tanqingii)中与性别相关的分子标记,筛选了160个10bp的随机引物,产生了2500多个RAPD条带。只有引物S0465(CCCCGGTAAC)产生了一条大约500bp的雌性特异RAPD标记,该分子标记出现在所有的供试雌性植株中,而所有的供试雄性植株都不具有该标记。对该特异片段进行了克隆和序列测定,并根据序列分析结果将RAPD标记转化为重复性和特异性更好的特异特征序列扩增区域(SCAR)分子标记,并命名为STQC-S465-483。分子标记的建立可用于谭清苏铁幼苗性别的早期鉴定,为谭清苏铁就地保护和迁地保护提供技术支持。