灰树花孔菌固体发酵基质抗氧化活性成分研究

选用燕麦、大豆、玉米、麸皮、大米、荞麦6种培养基质对灰树花孔菌进行固体发酵及抗氧化活性研究。结果表明：灰树花孔菌最佳抗氧化发酵基质为燕麦大豆培养基（燕麦16.25%,大豆83.75%）,最佳发酵时间为8d。灰树花孔菌燕麦大豆发酵基质抗氧化活性成分种类丰富,含量高。其中总黄酮物质40.86μg/g,总三萜5.94mg/g,多酚8.51mg/g,还原糖13.10mg/g,花色苷70.23μg/g,维生素C 24.57mg/g,维生素E 0.33mg/g,谷光甘肽（GSH）0.84g/g,SOD酶活性299.74U/g。     

红缘拟层孔菌固体发酵产物体内抗肿瘤和抗氧化作用研究

研究了红缘拟层孔菌固体发酵产物对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤和抗氧化作用,以抑瘤率、脾和胸腺指数、白细胞介素-2、干扰素-r、血管内皮细胞生长因子、超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物等指标来考察红缘拟层孔菌固体发酵产物对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制和体内抗氧化作用。结果表明,固体发酵产物高剂量和中剂量组的抑瘤率分别为66.66%和64.70%,与阴性组比较,有显著的抗肿瘤作用（P<0.01）,HE染色切片也能观察到固体发酵产物高、中和低各组肿瘤细胞大量坏死,并且高剂量和低剂量组血清中白细胞介素-2和干扰素-r含量显著增加,血管内皮生长因子含量降低,与抑制肿瘤效果具有一定相关性;此外,红缘拟层孔菌固体发酵产物各组可以降低丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物含量;综上所述,红缘拟层孔菌固体发酵产物具有显著的抗肿瘤和抗氧化作用。     

鲍姆桑黄孔菌化合物对HepG2细胞葡萄糖消耗的影响及其作用机制的研究

利用胰岛素抵抗HepG2细胞模型筛选具有降血糖活性的鲍姆桑黄孔菌菌丝体化合物,并对其作用机理进行了初步探讨。研究结果表明从鲍姆桑黄孔菌大米发酵菌丝体中分离出的原儿茶醛、柚皮素和黄芩素3种化合物对HepG2细胞葡萄糖消耗量具有明显的促进作用;实时定量PCR分析表明,原儿茶醛对SOCS-3因子mRNA表达抑制效果最好,而黄苓素对TNF-α因子mRNA表达抑制效果最佳。原儿茶醛和黄芩素为鲍姆桑黄孔菌中有降血糖活性的化合物。     

斑褐孔菌石油醚提取物体外抗肿瘤活性研究

探讨斑褐孔菌石油醚提取物(PEFP)体外抗肿瘤活性及其机制。采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)考察PEFP对人肝癌细胞SMMC-7721、人胃癌细胞SGC-7901、人喉癌上皮细胞Hep-2增殖的影响。倒置相差显微镜、透射电镜观察PEFP作用SMMC-7721后的细胞形态及超微结构的变化;流式细胞术检测PEFP作用SMMC-7721后细胞周期的改变情况。实验结果显示PEFP对上述三种人恶性肿瘤细胞均表现出明显的抑制效果,且呈剂量效应关系,其半数抑制浓度(IC50)分别为52.72、69.18、58.88μg/mL。取1/2 IC50浓度的PEFP作用于SMMC-7721 48 h后,细胞形态结构及细胞周期发生改变,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。PEFP可能通过阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期来抑制肿瘤细胞的增殖,具有较明显体外抗肿瘤活性。     

广叶绣球菌超微粉抗肿瘤作用研究

广叶绣球菌(荷仙菇-H)是近年来新培养的一种食药用真菌,属担子菌门、多孔菌目、绣球菌科、绣球菌属。本文对其超微粉的抗肿瘤作用及机制进行了研究。建立了H22荷瘤小鼠肿瘤移植模型,设置空白对照组、模型组、环磷酰胺阳性组、广叶绣球菌超微粉高、中、低3个剂量组(1 000,500和100mg/kg),连续给予相应药物10d,计算H22荷瘤小鼠的抑瘤率、体质量、胸腺指数、脾脏指数以及肝脏指数,对各组小鼠的瘤块进行组织病理学研究,并对血清中的SOD和IFN-γ含量进行了测定。结果发现广叶绣球菌超微粉3个给药组的抑瘤率均大于40%,高剂量组抑瘤率最高为54%;可增加小鼠体质量;提高胸腺指数、脾脏指数和肝脏指数;给药组SOD值均高于模型组,说明广叶绣球菌超微粉可以起到抗氧化的作用;给药组IFN-γ值均高于模型组,给药组VEGF值均低于模型组,说明广叶绣球菌超微粉能够提高机体免疫能力。因此,广叶绣球菌超微粉的抗肿瘤作用明显,可能是通过改善机体免疫功能和抗氧化能力,抑制了肿瘤细胞,达到抗肿瘤的功效。     

香菇C91—3菌发酵液小鼠体内外抗肿瘤作用的研究

香姑C91-3菌是我们多年筛选出的一株经生物发酵后,其发酵液具有明显的抗肿瘤、抗细菌作用的真菌。研究结果表明：该发酵液具有明显体外抗肿瘤作用的活性物质,对MH134、X5563、Ca761/L、YAC-1、H22、K562抑瘤率为76.7～100%,在体内抗肿瘤实验中,采用H22、S180腹水瘤的研究中,小鼠存活率分别为40%、45%。本文还对香菇C91-3菌发酵液抗肿瘤的机理进行了探讨。     

香菇C_（91－3）菌发酵液小鼠体内外抗肿瘤作用的研究

香菇Ｃ_（９１－３）菌是我们多年筛选出的一株经生物发酵后,其发酵液具有明显的抗肿瘤、抗细菌作用的真菌。研究结果表明：该发酵液具有明显体外抗肿瘤作用的活性物质。对ＭＨ_（１３４）、Ｘ５５５３、Ｃａ７６１／Ｌ、ＹＡＣ－１、Ｈ_（２２）、Ｋ５６２抑瘤率为７６．７～１００％。在体内抗肿瘤实验中,采用Ｈ_（２２）、Ｓ１８０腹水瘤的研究中,小鼠存活率分别为４０％、４５％。本文还对香菇Ｃ_（９１－３）菌发酵液抗肿瘤的机理进行了探讨。     

松生拟层孔菌乙醇提取物抗肿瘤作用及其机制的实验研究

目的:探讨松生拟层孔菌抗肿瘤作用及其机制.方法:采用乙醇提取与硅胶柱层析分离,并对其乙醇粗提物、石油醚相、乙酸乙酯相提取物分别进行了体内(小鼠移植性肿瘤),外(采用Alamar Blue法)抗肿瘤活性研究.结果:松生拟层孔菌的乙醇粗提物,石油醚相,乙醇乙酯相在100ug/ml时,体外对NCI-H460细胞株具有增殖抑制作用,100mg/kg时对在体的H22瘤细胞具有显著的抗肿瘤活性,并能诱导H22瘤细胞凋亡,显著提高荷瘤鼠血清中IL-2、TNF-a的水平.结论:松生拟层孔菌乙醇提取物具有抗肿瘤作用,并能增强机体的免疫功能.     

离子束注入技术筛选灰树花多糖产生菌的研究

本文用20×1013ion/cm2～100×1013ion/cm2剂量的N+离子注入灰树花菌,设5个处理,0处理为对照,观测菌丝长势、菌丝长速、纤维素酶活、菌丝生长量、多糖含量探讨离子注入的效应与影响。结果表明,适宜剂量的离子注入促进生长、增加纤维素酶活和产物积累,灰色关联分析得到离子注入的最适剂量为40×1013ion/cm2～60×1013ion/cm2;并用纸层析和GC法对离子注入处理和对照菌的产物进行比较鉴定,结果显示多糖性质与结构一致。     

黑柄炭角菌(乌灵菌)粉改善睡眠作用以及对小鼠大脑神经递质及其受体的影响

本研究探讨了黑柄炭角菌菌核乌灵菌粉的改善睡眠作用以及对小鼠大脑神经递质及其受体的影响。144例小鼠随机分为低、中、高3个剂量(0.25、0.5和1.0 g/kg bw)的乌灵菌粉实验组和1个空白对照组,进行了30 d的灌胃干预,从小鼠睡眠行为和其大脑组织中神经递质及其受体两个方面进行分析。结果显示,乌灵菌粉无直接催眠作用,对小鼠正常生长和体重增长无显著影响。相比于对照组,乌灵菌粉3个剂量实验组巴比妥钠诱导的入睡潜伏期均显著缩短(P<0.05),戊巴比妥钠阈下剂量下入睡动物数均有增加,戊巴比妥钠诱导的睡眠时间仅有中、高两个剂量组显著增加(P<0.05),低剂量组睡眠时间增加不显著(P>0.05)。低、中、高3个剂量组小鼠大脑组织中γ-氨基丁酸A型受体(GABA_AR)表达量均显著上升(P<0.05),γ-氨基丁酸B型受体(GABA_BR)表达量却显著下降(P<0.05),5-羟色胺(5-HT)和γ-氨基丁酸含量均显著上升(P<0.01)。综上所述,乌灵菌粉具有明显的改善睡眠功效,其作用机制可能是通过提高脑中5-HT和GABA含量,促进小鼠大脑组织中GABA_AR受体表达来实现。     

Preparation of a chemically sulfated polysaccharide derived from Grifola frondosa and its potential biological activities

This report describes the preparation, characterization and potential biological activities of a chemically sulfated polysaccharide (S-GAP-P), which was derived from water-insoluble polysaccharide of Grifola frondosa mycelia. S-GAP-P was determined to be a glucan sulfate with the average molecular weight of 28 kDa and the sulfur content of 16.4%. The antitumor and immunomodulating activities of the sulfated derivative were estimated in vitro and in vivo. S-GAP-P inhibited the proliferation of SGC-7901 cells and induced apoptosis, in a dose-dependent manner. And the results from in vivo experiments demonstrated that S-GAP-P significantly inhibited the tumor growth and enhanced the peritoneal macrophages phagocytosis in S180-bearing mice. It is noteworthy that S-GAP-P could accelerate the antitumor activity of CTX and improve the immunocompetence damaged by CTX, suggesting the combination might increase cytotoxic efficacy and decrease toxicity of some chemotherapeutic agents in cancer treatment.     

灰树花多糖对体外胃粘膜创伤的修复作用

本文采用MTS[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium]法检测灰树花多糖(GFP)对人胃正常粘膜上皮细胞(human gastric epithelial cell,GES-1)细胞增殖影响;使用毛细管对单层融合的GES-1细胞进行划痕,模拟胃粘膜创伤,观察并计算GFP作用后GES-1细胞创伤区域迁移及修复损伤的面积;ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)方法测定培养基上清液中表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF),转移生长因子(transforming growth factor-β₁,TGF-β₁)和三叶因子2(trefoil factors 2,TFF2)的含量变化;荧光定量PCR(RT-PCR)检测其mRNA的变化.实验结果表明:GFP通过上调EGF,TFF2,下调TGF-β₁ 表达而促进GES-1细胞增殖,促进其向创伤区域迁移,可以完全覆盖创伤区域达到修复胃粘膜作用.     

不同营养基质与条件对灰树花生长的影响

探讨了不同营养基质与条件对灰树花[Grifola frondosa(Fr.)S.F.Gray]生长的影响。试验结果表明：菌丝生长的最适pH为5-6;最适氮源为蛋白胨、牛肉膏和谷氨酰胺,葡萄糖和蛋白胨最适浓度分别为100和1g/L;菌丝在黑暗环境下生长良好;使用马铃薯蛋白胨培养基进行振荡培养,菌丝球生长较好;母种采用马铃薯麦麸培养基,栽培种选用棉子壳麦麸石培养料,可缩短制种周期,获得质量较高的菌种;菌丝含有较多的钙、铁和锌等元素。     

灰树花多糖的分子修饰及其活性研究进展

灰树花是一种高蛋白低脂肪的食品,具有免疫调节、抗氧化和抗肿瘤等生物活性。其中,多糖是灰树花的主要活性成分之一。对多糖进行分子修饰是提高它原有的生物活性或增加新活性的重要途径之一。综述了灰树花多糖的分子修饰方法,以及修饰后灰树花多糖的生物活性及其构效关系的研究进展,以期为灰树花多糖的深入研究和开发利用提供参考。     

灰树花提取物清除氧自由基的研究

采用化学发光法比较了灰树花各提取物对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除效果。研究结果表明,灰树花子实体和菌丝体的提取物对羟基自由基均有很好的清除作用,灰树花菌丝体水提物(GFME)、灰树花子实体水提物(GFE)、灰树花子实体水提多糖(GFP)、灰树花子实体碱提多糖(GFAP)清除羟基自由基的IC50均小于1.0 mg/mL,其他提取物清除羟基自由基的IC50也均小于3.0 mg/mL。而对超氧阴离子自由基仅GFME、GFMP、GFE有清除作用,其他的提取物清除作用很弱。     

灰树花多糖对果蝇繁殖力及抗氧化作用的影响

实验采用超声辅助水提法提取灰树花多糖,以黑腹果蝇为实验对象,探究含0.2%,0.8%和1.6%浓度的灰树花多糖的培养基对果蝇繁殖力、体内脂褐素(LF)和过氧化氢酶(CAT)活性的影响。与对照组相比,各浓度组的灰树花多糖均能明显增强果蝇繁殖力,且对果蝇后代的雌雄比例产生一定影响;同时使果蝇体内LF含量明显下降,CAT活性显著升高。各浓度组间差异显著,尤以1.6%效果最佳。结果表明,灰树花多糖具有促进果蝇繁殖力和抗氧化的良好功效。     

基于UPLC-QTOF-MS代谢组学研究灰树花发酵的代谢差异

为了解天麻苦荞复配液的添加对灰树花深层发酵过程中代谢产物的差异性,采用超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱（UPLC-QTOF-MS）技术结合多变量统计分析方法,对发酵7d的灰树花菌丝体细胞代谢物进行分析。主成分（PCA）模型显示添加天麻苦荞复配液的菌丝体细胞与对照组菌丝体细胞相比代谢产物差异明显（P<0.05）,通过正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）,以VIP（varible importance in the projection）>1和P<0.05为条件进行筛选和鉴定得到44种差异代谢物,包括糖类6种、氨基酸类13种、维生素类5种、核苷酸类7种、有机酸类10种、脂肪酸类3种。其中,与对照组相比鼠李糖、D-半乳糖、D-甘露醇、果糖-6-磷酸等7种物质含量显著下调,D-木糖醇、异亮氨酸、赖氨酸、泛酸、二十二碳六烯酸、D-葡萄糖醛酸、琥珀酸等37种物质含量显著上调。通过对差异代谢物进行通路分析,得到具有显著影响的代谢通路14条,推测了灰树花胞外多糖合成通路。由此推断天麻苦荞复配液的添加对灰树花胞外多糖的增效作用和提升营养品质的原因,为今后深层次研究外源添加物对灰树花发酵过程的影响提供理论依据。     

灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF) (1、10、20、50、100和200 μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72 h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF 20、50和100 μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。     

Effects of iNOS inhibitor on IFN-gamma production and apoptosis of splenocytes in genetically different strains of mice infected with Toxoplasma gondii

To evaluate the role of nitric oxide (NO) in IFN-gamma production and apoptosis of splenocytes in genetically different strains of mice with toxoplasmosis, BALB/c (a toxoplasmosis resistant strain) and C57BL/6 (a toxoplasmosis susceptible strain) mice were infected with Toxoplasma gondii cysts orally and subsequently injected intraperitoneally with aminoguanidine, an iNOS inhibitor (AG; 35 mg/kg per mouse daily for 14 days). When BALB/c or C57BL/6 mice were infected with T. gondii without AG treatment, number of brain cysts, NO and IFN-gamma production by splenocytes, and percentages of apoptotic splenocytes were increased compared to uninfected control mice without AG treatment. AG treatment increased the number of brain cysts, and reduced NO and IFN-gamma production in T. gondii-infected C57BL/6 mice. In contrast, in T. gondii-infected BABL/c mice, the number of brain cysts, and NO and IFN-gamma production of splenocytes was not altered by treatment with AG. However, the percentages of apoptotic splenocytes in T. gondii-infected BALB/c or C57BL/6 mice were not affected by AG treatment. These results suggest that NO modulates IFN-gamma production in T. gondii-infected C57BL/6 mice, and that NO is involved in mediating a protective response in toxoplasmosis susceptible, but not resistant, mice strain during acute infection.     

Modification of cellular immune responses in experimental autoimmune hepatitis in mice by maitake (Grifola frondosa)

Immune response to liver-specific lipoprotein (LSP) is involved in the pathogenesis of chronic active hepatitis. Experimental hepatitis could thus be prepared in C57BL/6 mice by injection of liver-specific protein in a syngeneic liver homogenate with Freund's complete adjuvant. In hepatitic mice treated with maitake (Grifola frondosa) fruit bodies, the values of glutamic oxaloacetic transaminase (GOT) and glutamic pyruvic transaminase (GPT) values increased temporarily by 2.24–2.79 times and decreased rapidly thereafter. However, in the mice given normal feed, both values increased constantly. Thus, we examined T cell activities both in the exacerbation and remission stages of hepatitis. We suggest that the activation of CD8⁺ cells is more potentiated than that of CD4⁺ cells by administration of maitake or the D-Fraction-glucan (β-1,6 glucan having β-1,3 branches), which can enhance immuno-competent cells at the exacerbation stage. However, at the remission stage, marked potentiation of CD8⁺ cell activity was not observed. These results suggest that depressed suppressor T cell activity is revived by the X-Fraction-glucan (β-1,6 glucan having α-1,4 branched glucan), while the cytotoxic T cell activity, which is activated by the D-Fraction, is restricted, thereby creating a smooth shift from the exacerbation stage to the remission stage.