慢性低氧对大鼠肺内几种原癌基因表达的影响

本文用原位杂交技术动态观察了慢性低氧大鼠肺内原癌基因ｊｕｎ、ｆｏｓ和ｍｙｂ的表达,结果发现：（１）正常大鼠肺内有一定量的ｊｕｎｍＲＮＡ表达,少见到ｍｙｂ及ｆｏｓ的表达;（２）低氧１周时,ｊｕｎ的表达较正常下降,２周后有所增加。低氧３周后,ｊｕｎ的ｍＲＮＡ表达较正常明显上升;（３）低氧１、２周后,ｍｙｂ的表达明显增加,３周时基本恢复到正常水平;（４）ｆｏｓ原癌基因在低氧１、２周时有一定量的表达,低氧３周时达最大值。提示低氧可刺激大鼠肺内原癌基因ｊｕｎ、ｍｙｂ和ｆｏｓ的表达。     

慢性缺氧对大鼠肺内皮素表达的影响

本文以ＡＢＣ法和原位杂交技术,观察了慢性缺氧时大鼠肺组织内内皮素－１（ＥＴ－１）的表达情况,结果发现：①正常肺血管内皮细胞有少许ＥＴ－１样阳性染色物质呈现。②缺氧ＩＷ后,肺内ＥＴ－１含量增加,主要位于肺血管内皮细胞和支气管粘膜上皮细胞。③缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ１阳性免疫物质进一步增加,于肺泡细胞内也见到阳性染色。④缺氧１Ｗ后肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加,缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达进一步加强。提示缺氧可刺激肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达,慢性缺氧时肺内ＥＴ－１持续分泌增加,这可能是缺氧性肺动脉高压发生的重要因素之一。     

原癌基因sis，fos在缺氧大鼠肺内表达的研究

采用原位杂交技术检测了慢性缺氧大鼠肺组织内原癌基因ｓｉｓ及ｆｏｓ的表达水平,结果发现正常大鼠肺内没有ｓｉｎ及ｆｏｓｍＲＮＡ表达,其表达水平随缺氧时间延长而增加,这种改变一直持续至缺氧第３周,提示ｓｉｓ及ｆｏｓ癌基因可能参与了缺氧肺动脉高压的发病过程。     

反义癌基因c－jun对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

构建可表达原癌基因ｃ－ｊｕｎ正义和反义ＲＮＡ的真核细胞表达载体,将其导入体外培养的大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）后,经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析证实,两种插入方向的ｃｊｕｎ基因均在ＶＳＭＣ中大量表达;￣３Ｈ－ＴｄＲ参入实验表明,ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ的增殖具有显著抑制作用．提示用反义核酸抑制ｃ－ｊｕｎ表达对治疗某些由于ＶＳＭＣ增殖所引起的心血管病可能具有一定意义．     

慢性缺氧大鼠肺血管c-myc及bcl-2基因表达研究

应用免疫组织化学和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法,对慢性缺氧大鼠肺组织（主要是肺血管壁）原癌基因ｃ－ｍｙｃ和抗凋亡基因ｂｃｌ－２表达进行了研究。免疫组织化学观察提示,正常对照组大鼠肺血壁Ｃ－ｍｙｃ和Ｂｃｌ－２蛋白仅为弱阳性或不表达,慢性缺氧１、２周组大鼠肺血管壁这两种抗原表达比对照组显著增强,呈强阳性,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明：慢性缺氧１、２周组大鼠肺组织内ｃ－ｍｙｃ和ｂｃｌ－２的ｍＲＮＡ表达比对照组显著增加,以上结果提示,ｃ－ｍｙｃ及ｂｃｌ－２两种基因调节的细胞增殖与凋亡可能参与了慢性缺氧性肺动脉高压的发病进程。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c－myc基因表达增强

本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子Ａ链、Ｂ链（ＰＤＧＦ－Ａ,ＰＤＧＦ－Ｂ）和ｃ－ｍｙｃ原癌基因ｍＲＮＡ在正常和缺氧时的含量变化。正常肺组织可表达１．７ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ和３．５ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ,还有少量２．２ｋｂｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。在缺氧过程中,ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ迅速增加,至缺氧１４ｄ时,分别为正常的３倍和５倍。而ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ在缺氧７ｄ时增高,而后又略有降低。结果表明：缺氧的肺组织局部生成的ＰＤＧＦ激活了ｃ－ｍｙｃ原癌基因,这对于缺氧性肺动脉高压的形成具有重要作用。     

缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织中血小板源性生长因子和c—my…

本研究分析了大鼠肺组织中血小板源性生长因子Ａ链、Ｂ链和ｃ－ｍｙｃ原癌基因ｍＲＮＡ。正常肺组织可表达１．７ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ和３．５ｋｂ的ＰＤＧＦ－ＢｍＲＮＡ,还有少量２．２ｋｂｃｍＲＮＡ．在缺氧过程中,ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ迅速增加,至缺氧１４ｄ时,分别为正常的３倍和５倍。而ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ在缺氧７ｄ时增高,而后又略有降低。结果表明：缺氧的肺组织局生成的ＰＤＧＦ激活     

肿瘤坏死因子α对大鼠成骨样细胞增殖与甲状旁腺素受体表达的影响

大鼠成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８经肿瘤坏死因子α处理后,发现其ｃ－ｍｙｃ,ｃ－ｆｏｓ,ｃ－ｊｕｎ等原癌基因ｍＲＮＡ的表达降低,细胞增殖明显受到抑制;同时,其ＰＴＨ受体的表达以及ＰＴＨ经受体刺激后引起的细胞内ｃＡＭＰ的增加也受到抑制。提示ＴＮＦα可抑制大鼠在骨要细胞ＲＥＯＳ１７／２．８的增殖和分化。     

慢性缺氧大鼠肺内（肺血管壁）细胞增殖,凋亡及c—myc,p53 …

目的和方法：应用免疫组织化学,原位末端标记技术及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法检测慢性缺氧大鼠肺内特别是肺血管壁细胞增殖,凋亡及相关基因ｃ－ｍｙｃ,ｐ５３表达。结果 正常及慢性缺氧大鼠肺内检出一定比率的增殖,凋亡阳性细胞,两类细胞在肺内呈不均匀散在分布,在缺氧大鼠肺内,增殖阳性细胞绝大部分是肺小血管壁细胞,凋亡性染色细胞在肺小血管壁上较对照组少见。缺氧１,２周组大鼠肺内细胞增殖指数显著增高而凋亡指数显     

慢性缺氧大鼠肺内(肺血管壁)细胞增殖、凋亡及c-myc、p53基因表达研究

目的和方法：应用免疫组织化学、原位末端标记技术及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等方法检测慢性缺氧大鼠肺内特别是肺血管壁细胞增殖、凋亡及相关基因ｃｍｙｃ、ｐ５３表达。结果：正常及慢性缺氧大鼠肺内检出一定比率的增殖、凋亡阳性细胞,两类细胞在肺内呈不均匀散在分布。在缺氧大鼠肺内,增殖阳性细胞绝大部分是肺小血管壁细胞,凋亡性染色细胞在肺小血管壁上较对照组少见。缺氧１、２周组大鼠肺内细胞增殖指数显著增高而凋亡指数显著减少,细胞增殖凋亡比值分别约为对照组３与３５倍。ｃｍｙｃ及ｐ５３是细胞增殖、凋亡密切相关的两种癌（抑癌）基因,前者在缺氧大鼠肺内表达显著增加,而后者（野生型）表达显著减少。结论：可能由于ｃｍｙｃ及ｐ５３基因异常表达所致的细胞增殖、凋亡失衡参与了慢性缺氧性肺血管结构改建的调节。     

缺氧对大鼠肺组织肺血管sis原癌基因和PDGF-BB蛋白表达的影响

为了探讨血小板生长因子ＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）在缺氧性肺血管结构重塑中作用,通过建立大鼠缺氧性肺血管重塑动物模型,运用原位杂交技术和免疫组织化学染色技术检测不同缺氧时期大鼠肺组织中原癌基因ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－ＢＢ蛋白表达。结果：（１）随着缺氧时间的延长,肺动脉壁肌层增厚,管腔变窄;（２）正常对照组肺组织及肺血管壁ｃ－ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－ＢＢ蛋白质均极少表达（＋）;（３）缺氧３天后,两者表达均增多（）;（４）缺氧７天后其表达达高峰并持续至１４天（～）;（５）缺氧２１天后,两者表达均降低,但仍高于正常对照组（）。提示：缺氧可以刺激大鼠肺组织ｓｉｓｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－ＢＢ蛋白表达,其在缺氧性肺血管结构重塑形成中可能具有重要作用。     

THE EVOLUTION OF LANDSCAPE GENETICS

The main objective of this special section is not to review the broad field of landscape genetics, but to provide a glimpse of how the developing landscape genetics perspective has the potential to change the way we study evolution. Evolutionary landscape genetics is the study of how migration and population structure affects evolutionary processes. As a field it dates back to Sewall Wright and the origin of theoretical population genetics, but empirical tests of adaptive processes of evolution in natural landscapes have been rare. Now, with recent developments in technology, methodology, and modeling tools, we are poised to trace adaptive genetic variation across space and through time. Not only will we see more empirical tests of classical theory, we can expect to see new phenomena emerging, as we reveal complex interactions among evolutionary processes as they unfold in natural landscapes.     

红曲菌cDNA消减文库的构建

应用抑制性消减杂交技术,构建红曲菌产桔霉素和不产桔霉素差异表达的cDNA消减文库.分别从产桔霉素和不产桔霉素的红曲菌丝体中提取mRNA,依次合成单链和双链cDNA,经酶切成大小为250～750bp的片断,将产桔霉素的cDNA分为两组,分别与两种不同的接头连接,再与不产桔霉素的红曲菌的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR后,将产物与T/A载体连接构建成功cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,文库扩增后得到283个克隆,经PCR法快速测定,均得到250～750bp的插入片断.所构建的红曲菌cDNA消减文库为进一步筛选红曲菌中与产桔霉素性状相关的基因奠定了基础.     

秀丽隐杆线虫经福尔马林处理后上调表达基因的分析

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一种重要的模式生物,目前已经被广泛应用到生物对各种驱虫剂抗性机制的研究中。福尔马林被普遍用于鱼类寄生虫病的防治中,但是由于长期的应用,许多寄生虫对它产生了一定的抗药性。研究以秀丽隐杆线虫为研究对象,分析了它在福尔马林刺激下基因表达的改变情况。结果显示,经福尔马林处理后差异表达的有676个克隆,通过斑点杂交技术进一步筛选,对其中差异显著的161个克隆进行了测序分析。测序结果经BLAST分析发现:(1)细胞凋亡相关基因的表达发生上调,这些基因编码包括线粒体呼吸链相关蛋白、含TPR序列的蛋白SGT-1、热休克蛋白、氧化应激相关蛋白、胞吞过程相关蛋白、DNA复制和修复相关蛋白以及其他一些重要的凋亡相关蛋白;(2)编码重要的转录调节因子和信号转导相关蛋白如转录激活因子FosB/c-Fos、G蛋白、细胞周期蛋白B、钙结合蛋白、核小体装配蛋白NAP-1等的基因的表达发生上调;(3)能量代谢和蛋白质、脂肪、氨基酸代谢途径中的有些基因的表达也发生上调;(4)除了以上已知功能的基因外,还有一些未命名蛋白质基因。这说明福尔马林对秀丽隐杆线虫的影响除了诱导细胞凋亡之外,还影响其他细胞代谢活动的改变。实验为进一步研究生物体对福尔马林的抗性机制奠定了一定的基础。       

中国尖音库蚊复合组杂交的研究

本文对分布在我国的尖音库蚊复合组的尖音库蚊,致倦库蚊和淡色库蚊进行杂交研究,结果表明致倦库蚊与尖音库蚊及淡色库蚊以及两者尖交可以产生能育的Ｆ１代,它们之间没有传统意义上的生殖隔离,致倦库蚊应为尖音库蚊是的一个亚种,而不是如国外有些学者认为的独立种,另外,杂种Ｆ２代成活率很低,这有可能是尖音库蚊（广义）种下分化在遗传学上的反映。     

巴西固氮螺菌中吸氢酶基因同源性的分子检测

通过TTC(2 ,3,5 氯化三苯基氮唑 )实验筛选出 12株能产生吸氢酶蛋白 (Hup+ )的巴西固氮螺菌 (Azospir rilumbrasilense)菌株。用Qiagen柱分离提纯含豌豆根瘤菌的hup基因片段的质粒 pHVT10 9和pHVT115 ,并用地高辛标记法标记pHVT115 ,与 12株Hup+ 巴西固氮螺菌的总DNA进行斑点杂交 ,结果显示pHVT115所含的吸氢酶基因 (hup基因 )片段与巴西固氮螺菌的大部分菌株的hup基因同源性不强。这一结果表明hup基因在固氮生物中存在着遗传多样性 ,异源hup基因探针不一定都适宜于探测hup基因。     

酶的基因剂量效应及其对鱼类远缘杂交的影响

亲缘关系较远的杂种二倍体,酶的表达出现父本基因受抑制,双亲基因表达迟缓和母本基因提前表达三种类型的紊乱。由于双亲等位基因不亲和,各等位基因只调控产生1／2的基因产物,从而致使胚胎出现“双单倍体综合症”而在孵化期全部死亡。远缘杂交三倍体由于母本基因剂量加倍,一方面抑制了父本基因的表达,消除了不协调基因活动的干扰,另一方面母本基因产物趋于正常,代谢得以正常进行,杂种后代能成活并正常生长。     

Actinobacteria的分离与鉴别

Actinobacteria classis nov.一般包括具有超过50％G＋C的DNA碱基组成的微生物。实验中在分土培养基中,添加了Nalidixic acid及Aztreonam和Benlate,从4份土壤样品中,共分离得到64株细菌。革兰氏阳性细菌共计56株,占所分离菌株的87.5%。任意挑选其中的革兰氏阳性细菌,选用以高G＋C含量革兰氏阳性细胞为靶点的PHGC探针及PNHGC对照探针,并联合使用我们自行设计的适用于Actonobacteria的PA－1和PA－2探针进行初筛菌株的鉴别。综合4种探针的FISH的结果,我们可以判定在31株分离株中,有22株Acti-nobacteria,6株低G＋C含量革兰氏阳性细菌,其它3株则不易判定。DNA G＋C含量的测定结果表明,所建立的FISH方法可作为鉴别Actinobacteria的一种手段,它具有完整、准确和直观的优点。