噬菌体肽库中筛选NMDA受体抗原表位

为了获得人N-甲基-D-天冬氨酸受体（NR）主亚基（NR1）M3-M4环B细胞表位,以人NR1分子M3-M4环单克隆抗体MAB363淘筛噬菌体展示随机12肽库,对筛选克隆进行特异性ELISA检测和竞争结合实验分析.从30个克隆中得到一个阳性克隆序列“VHTNPSTWQPIL”（克隆1）,原核表达的NR1 M3-M4环可以与克隆1竞争结合MAB363.固相合成5个表位探针短肽,发现其中只有R(22)LRNPSKD可以与M3-M4环竞争结合抗体,将NPS三个氨基酸残基逐一敲除,缺失N或NP的合成肽和M3-M4环竞争抗体的能力减弱,缺失NPS的合成肽完全没有竞争能力,证明MAB363的表位为NPS,S可能是关键性残基.上述结论为免疫干预防治兴奋毒性脑损害策略的实施提供了一个重要线索和依据.     

利用T4噬菌体展示猪瘟病毒E2抗原

利用重组PCR技术将猪瘟病毒 (CSFV )E2蛋白主要抗原编码区基因 (mE2 )与T4噬菌体SOC基因融合 ,构建了大小为 643bp的SOC/mE2融合基因 ,再将其插入携带T4溶菌酶基因 (e)和(denV)基因的T4重组载体 (PRH) ,构建了重组载体pRsmE2。通过重组载体与缺失突变型T4发生同源重组 ,可将SOC/mE2融合基因整合入T4的基因组中 ,并成功地将大小约 2 1 5aaSOC/mE2融合蛋白展示于T4噬菌体衣壳表面。经Westernblot、胶体金免疫电镜等免疫学检测证实 ,展示于T4表面的mE2融合蛋白具有CSFV免疫学活性。     

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的制备及分析

利用噬菌体抗体库筛选技术获得抗雄性特异性抗原的噬菌体Fab抗体,首次采用雄鼠脾细胞对鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库进行3轮亲和富集和2轮雌鼠脾细胞吸附,对筛选后特异性噬菌体Fab抗体进行ELISA分析,重组率鉴定及基因测序分析。结果显示,5次筛选后的15个菌落中有9个能产生抗雄性特异性抗原特异性噬菌体抗体,噬菌体Fab抗体的基因重组率为60%,E5克隆的重链、轻链可变区序列分别属于VH1和VκⅣ基因家族,这为挑选出高亲和力的抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体奠定了实验基础,将推进雄性特异性抗原及其抗体的研究进程,并为性别控制研究开创新途径。     

噬菌体

噬菌体是一类专门以细菌为寄生对象的生命体,它是特沃特(Twort)于1915年首先发现的,后来由D′Herelle命名。噬菌体的生活周期因种类不同而异,有些噬菌体生活周期较短,约20-30分钟;有些噬菌体生活周期较长,往往几小时甚至更长的时间;另有噬菌体(如丝状噬菌体)可连续地从寄主细胞内释出,并不随寄主细胞的死亡而消失。对于它生活周期主要阶段的发现是通过观察其寄主细胞而实现的。据研究,噬菌体生存的决定因素有两点:其一,赖以偶然吸附在寄主细胞上;其二,噬菌体的相对浓度。当其具备了以上条件而侵染细菌时,首先在细菌表面的特异部位上吸附,后由溶菌酶溶开一个孔洞,随之将噬菌     

猪链球菌的烈性噬菌体和前噬菌体

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病病原,携带有前噬菌体。本文对猪链球菌的烈性噬菌体和前噬菌体的研究现状做了综述,主要包括猪链球菌烈性噬菌体的形态及功能;烈性噬菌体裂解酶的结构及功能;烈性噬菌体末端酶大亚基的活性;前噬菌体的比较基因组学、前噬菌体的裂解酶以及烈性噬菌体和溶原性噬菌体之间的相互转化,并对猪链球菌噬菌体与宿主的相互关系作了展望。     

利用丝状噬菌体展示技术进行抗原决定族图谱及其基因工程的研究

噬茵体展示是90年代初发展起来的一种新型表达技术。其主要特点是得到表达的蛋白或肽段能够被展示在病毒粒子的表面,从而使得大规模的专一性选择成为可能。目前此技术已被广泛用于生命科学研究的不同领域。比较突出的有抗体工程的研究,随机抗原决定族库的研究．以及随机肽在新药开发中的研究。本文将集中回顾一下噬菌体展示技术在抗原决定族定位研究中的应用,及其在新型诊断试剂和疫苗开发中的潜在前景。     

利用噬菌体肽库筛选与HIV-1p24抗原结合的多肽

通过噬菌体展示技术筛选出与HIV-1p24抗原结合的多肽,为用多肽辅助p24抗原检测提供实验基础.以重组p24抗原为靶蛋白,对噬菌体随机七肽库进行三轮筛选,用EUSA鉴定第三轮筛选到的噬菌体克隆与p24重组抗原的结合能力,再对噬菌体克隆进行测序分析,同时研究了ELISA中噬菌体加入量及多种封闭剂对噬菌体特异性结合能力的...     

应用噬菌体随机9肽库筛选庚型肝炎病毒抗原表位

The purpose of the study was to screen the antigenic epitope with monoclonal antibody against hepatitis G virus envelope protein 2 (HGV E2) from phage-displayed constrained nonapeptide library (PVⅢ9aa-cys). E. coli XLl-blue infected with PVⅢ9aa-cys was spread on 2×YT plates containing ampicillin and tetracycline. Transducting unit(TU) of PVⅢ9aa-cys was about 1.6×10 12 /ml by calculating the number of clones. The DNA sequence of PVⅢ9aa-cys, determined with cycle sequencing, was found randomly arranged in NNN order. Both ends of the nonapeptide(NNN) 9 linked with a cysteine respectively. Through four rounds biopanning of PVⅢ9aa-cys with MAb M-13-IgG, 6 of 14 positive clones were proved sharing the consensus aa sequence VXXSPL while 4 clones shared sequence VXSPL. Sequence VX(X) SPL was of homology with VRSPL of HGV E2 between aa 218-222. Average 0.D. value(A 450 ) of 10 phage clones with the consensus aa sequence were higher than those of the other 4 clones and PVⅢ9aa-cys(P<0.05). These results demonstrate the possibility that sequence VRSPL is an antigenic epitope of HGV E2. This work provides new information for the diagnosis of HGV infection as well as vaccine development of HGV.     

丝状噬菌体与噬菌体展示技术

丝状噬菌体的利用,在分子生物学研究以及基因工程发展中起了重大作用[1]。丝状噬菌体作为载体具有多方面的巨大应用潜力。1985年Smith[2]到最先将外源基因插入丝状噬菌体fl的基因Ⅲ,使目的基因编码的多肽能以融合蛋白的形式展水在噬菌体表面,从而创建了噬菌体展示技术。噬菌     

噬菌体特异性抗体对噬菌体治疗的影响

噬菌体治疗已成为当下防控泛耐药细菌感染的重要选择。噬菌体作为含有蛋白和核酸组分的病毒颗粒,经不同途径进入机体后,均能诱导机体产生特异性中和抗体。本文就噬菌体治疗过程中诱导机体产生的特异性中和抗体、抗体的产生规律、抗体是否影响噬菌体治疗疗效,以及可能克服抗体影响噬菌体治疗的方法等进行论述。噬菌体颗粒诱导特异性中和抗体的产生及血清抗噬菌体活性的水平与噬菌体的给予途径、类型和剂量、结构蛋白以及宿主的免疫状态、感染部位、治疗持续时间等均有关,且不同类型抗体产生时间和强度不同,均能中和噬菌体从而降低其杀菌效果。这提示在使用噬菌体治疗耐药细菌感染时,需要探索克服噬菌体中和抗体干扰的方法,或针对机体不同状态及感染类别制定相应的治疗策略,降低诱导机体产生噬菌体特异性中和抗体的风险,以获得最佳治疗效果。     

噬菌体肽库技术及其在HCV抗原表位研究中的应用

噬菌体随机肽库技术是研究抗原表位及其配体受体相互作用位点的强有力的工具。本文对噬菌体肽库技术的原理及其在抗原表位研究尤其在HCV抗原表位研究中的应用作一综述。     

噬菌体治疗中细菌对噬菌体的抗性

抗生素治疗尽管有几十年有效治疗的历史,但随着越来越多耐/抗药性细菌的出现,细菌对抗生素的抗药性已成为一个大问题。噬菌体治疗是使用噬菌体作为抗菌剂来感染细菌株系,它一直是人们倡导的一个很有前途的常规抗生素治疗的替代方案。然而,由于细菌与噬菌体的协同进化中,细菌可以通过多种机制获得对噬菌体的抗性。因此,人们对噬菌体治疗抱有期望的同时,也关注噬菌体治疗长时间的使用之后,是否会与抗生素使用之后结果相类似,导致抗性细菌病原菌感染的治疗困难。综述了细菌-噬菌体协同进化中细菌病原菌对有感染能力的噬菌体是否会产生抗性,及其在噬菌体治疗中影响的争论,并展望了噬菌体治疗的潜在前景。     

噬菌体的防治

自无产阶级文化大革命以来,我国群众性的应用微生物的科学实验活动巳普遍展开。目前,微生物巳被广泛地应用于农业、工业和医药卫生等方面。但在微生物生产和推广工作中,往往由于污染了噬菌体而给工作带来严重损失。     

λ噬菌体PL启动子控制的乙型肝炎病毒核心抗原基因在大肠杆菌中的表达

从DMM206,pPLa2311构威杂交质粒pMM-HBC83,使乙型肝炎病毒核心抗原基因在PL启动于控制下,在大肠杆菌中能高效表达,对数生长期细菌合成核心抗原的能力较静止期高,诱导前更换新鲜培养基能提高产置。     

从噬菌体表面展示肽库中筛选衣原体单克隆抗体识别的抗原表位

利用抗体捕获法,经三轮淘洗,从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与衣原体单克隆抗体C17特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为：（L／I）PGGS（P／W）,竞争抑制实验表明含特异序列的克隆能与天然抗原竞争。据此,我们认为此序列为衣原体的B细胞抗原表位。     

噬菌体展示定位和噬菌体展示工程

噬菌体展示是指将外源基因克隆到丝状噬菌体ｆｄ染色体ＤＮＡ上,然后以融合白 形式展示了于噬菌体衣壳蛋白表面的技术。本文将概述丝状噬菌体展示技术的最新进展,特别是表位定位的原理及其应用,可包括以下三部分：１．比较几种不同噬菌体展示策略的技术原理;２．展示表位的重组噬菌体在诊断试剂上的开发价值;３．展示表位的重组噬菌体在疫备研究上的应用前景。     

丝状噬菌体

丝状噬菌体的分子生物学研究和应用是近年来发展较为突出的一个领域,它们具有丝杆状的形态,在分类中归属于丝杆噬菌体科(Inoviridae),内有两属,即丝状噬菌体属(Inovirus)和杆状噬菌体属(Plectrovirus)。这里所谈的丝状噬菌体隶属于丝状噬菌体属,包括感染大肠杆菌和其它肠道细菌、假单胞菌、弧菌和黄单胞菌的噬菌体。至今,研究较清楚     

前噬菌体

随着微生物基因组测序工作的广泛展开,前噬菌体在宿主菌基因组中普遍存在的事实已逐渐为人们所接受.相关研究工作的深入揭示前噬菌体并不只是细菌体内一个简单的寄生体,相反是细菌生理活动相当活跃的参与者,在宿主菌生命活动中发挥着重要的作用.对前噬菌体的深入了解将丰富人们对多种生命现象的认识.本文即是关于前噬菌体的分类、分布、鉴定、进化及其与宿主菌相互作用等知识点的一个简单综述.