蓝猪耳离体受精初试

用体内-体外方法分离了蓝猪耳精细胞。用酶解和解剖方法分离了其成熟卵细胞。分离的精、卵细胞用电融合介导尝试了体外诱导融合。在合适的渗透压（6％甘露醇）和合适的氯化钙（0．04％CaCl2·2H2O）溶液中,用交流电场为30～35V10-25s使精、卵细胞排队;用直流电场400～600V45-50μs65脉冲穿孔条件可诱导30％的精、卵细胞融合和70％以上的卵细胞之间的融合。尝试了人工合子的单细胞培养但未获成功。诱导蓝猪耳精、卵细胞融合的条件与玉米和水稻不同。     

蓝猪耳精细胞的分离及两个精细胞群体的收集

蓝猪耳是二细胞型花粉,生殖细胞在花粉管中分裂形成两个精细胞。用体内-体外技术培养出花粉管后,将其置于爆破液中即可释放出花粉管内含物,其中包括两个精细胞和营养细胞。在显微镜下两个精细胞具二型性：体积较大的精细胞与花粉管的营养核相连,体积较小的精细胞只与大精细胞连接。两个精细胞之间的连接比较结实,需用微量酶液将两个精细胞分开。用显微操作仪就可分别挑选出两个精细胞群体,分别有上百个细胞。蓝猪耳精细胞的成功分离为利用蓝猪耳开展离体受精研究打下了良好的基础。这种单一纯化的精细胞群体的获得为用分子生物学方法区分两个精细胞的特异基因和蛋白质创造了条件。     

黄花木本曼陀罗卵细胞分离(简报)

采用分离的精、卵细胞体外融合并诱导人工合子长成植株的离体受精方法可在没有其他组织影响的单细胞水平上探索受精事件的发生过程．为研究高等植物的受精机理、探索配子识别和合子激活等问题提供有效手段。分离的卵细胞不仅可以用来开展离体受精研究．也提供了用分子生物学方法研究被子植物卵细胞发育和合子发育机理的实验基础.     

蓝猪耳卵细胞和合子的分离

蓝猪耳(Torenia fournieri)胚囊部分裸露出胚珠,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞和助细胞的形态结构.用解剖和酶解-解剖两种方法都能分离出生活卵细胞.用前种方法机械分离出的卵细胞数量较少(5%),但避免了酶对配子识别研究的干扰.在后种方法中加入0.1%纤维素酶和0.1%果胶酶既能使分离更加容易操作,又对卵细胞没有致命伤害,能在短时间内分离出较多的卵细胞(18%).用酶解-解剖方法也可分离出授粉14 h后的合子细胞.     

杉木生活雌雄配子的分离

以杉木（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉａｌａｎｃｅｏｌａｔａ（Ｌａｍｂ．）Ｈｏｏｋ．）传粉后的胚珠为材料,分离获得了生活的雌配子和雄配子。当花粉管进入雌配子体组织后,在颈卵器上方形成膨大的精原细胞或成对的精细胞。解剖出的精细胞呈ＦＤＡ正反应,荧光增白剂染色表明精细胞具有细胞壁。雌配子体在酶液作用下可同时释放出多个卵细胞和精细胞。游离出的卵细胞呈ＦＤＡ正反应,近圆形,内含１～２个大液泡。用ＰＥＧ方法诱导卵细胞与卵细胞,卵细胞与精细胞的融合,只获得了相互粘连的两个原生质体。     

蓝猪耳受精生物学研究进展

蓝猪耳(Torenia fournieri L.)胚囊半裸露,在光学显微镜下能清楚观察到卵细胞、助细胞及部分中央细胞的形态结构,有助于原位观察卵细胞在受精前后的变化状态,被认为是研究被子植物体内受精机理的一种模式植物。综述了蓝猪耳的受精机理:花粉管定向进入胚囊的方式与机理、钙在受精过程中的作用、受精前后胚囊细胞骨架的动态变化。简要介绍了离体受精技术在蓝猪耳受精生物学中的发展应用。根据前人对蓝猪耳的研究成果并结合我们的研究,指出蓝猪耳在受精生物学中的应用,特别是借助离体受精技术平台,将具有更大的研究前景。     

蓝猪耳的组织培养和植株再生

1　植物名称　蓝猪耳 (Ｔｏｒｅｎｉａｆｏｕｒｎｉｅｒｉ)。2　材料类别　叶片。3　培养条件　 ( 1 )ＭＳ培养基 ;( 2 )ＭＳ +ＮＡＡ 0 .1ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) + 6 ＢＡ 1 ;( 3)ＭＳ +ＩＡＡ 0 .1 +6 ＢＡ 1 ,( 4 )ＭＳ + 2 ,4 Ｄ 0 .1 + 6 ＢＡ 1 ;( 5 )ＭＳ +2 ,4 Ｄ 0 .0 1 + 6 ＢＡ 1 ;( 6)ＭＳ +ＩＡＡ 1。培养基均加 0 .7%琼脂、3%蔗糖 ,ｐＨ 5 .8。培养温度为 2 2～2 5℃ ,每天照光 1 2ｈ ,光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　芽的诱导　切取蓝猪耳幼苗叶片 ,用蒸馏水冲洗干净后 ,在 70 %酒精中浸洗 30ｓ,然…     

高等植物离体受精研究进展

高等植物的卵细胞深藏在子房内的胚珠体细胞组织中,形成了对高等植物受精过程研究的技术障碍。以前采用超微结构观察研究受精过程已取得了一定的结果,但用固定切片技术研究受精机理需将卵细胞杀死,并且不能进行定点追踪观察。将高等植物的精、卵细胞分离出来在体外诱导其融合的离体受精技术可在很大程度上克服这些技术障碍,对雌、雄配子的识别和融合,合子开始胚胎发生等一系列的受精和胚胎发生机理进行研究。分离的雌、雄配子及合子使应用分子生物学方法研究这些细胞的结构和功能成为可能。将合子的二倍性和胚胎发生特性与外源DNA转入技术结合起来可使转基因植物研究的后期工作简单化。另外,异种植物离体精、卵细胞融合和杂种合子的培养也是进行远缘杂交的一条有潜力的途径。     

葱卵细胞的分离

将大葱(Allium fistulosum)胚珠置于酶液中30分钟可将其外珠被去掉。可清楚地看到由内珠被包裹的胚珠中胚囊的轮廓。将胚珠转移至不含酶的相同溶液中, 用解剖针从胚珠中部切割, 然后挤压胚珠的珠孔部位, 卵器细胞从胚珠的切口处逸出。再用显微操作仪将卵细胞和2个助细胞分开, 达到葱卵细胞分离的目的。酶对分离卵细胞具有重要的作用, 经0.2%果胶酶Y23、0.8%果胶酶、0.8%纤维素酶和0.5%半纤维素酶的处理, 可在2小时内从30 个胚珠中分离出18个卵细胞。随着胚囊的发育, 2个助细胞的体积出现明显差异。生活的葱卵细胞的成功分离, 为建立葱离体受精体系创造了条件。     

胡萝卜精、卵细胞、助细胞和中央细胞的分离

用两个解剖针挤压胡萝卜花粉使其破裂释放出精细胞。用酶解-解剖方法分离胡萝卜胚囊中的卵细胞、助细胞和中央细胞。胡萝卜胚珠先在酶液中酶解40~50min,然后将其转移到不含酶的分离液中用解剖针解剖胚珠。将胚珠的合点端切破,轻轻挤压胚珠的珠孔,卵细胞、助细胞和中央细胞即可逸出。在最佳条件下,20min可从20个胚珠中分离出5个卵细胞。对分离胚囊细胞的渗透压和酶液成分进行了筛选。分离出的卵细胞用显微操作仪收集。胡萝卜精、卵细胞的成功分离为在双子叶植物中进行离体受精探索创造了条件。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism