B细胞可直接引起组织纤维化:IgG4相关性疾病的新机制

正IgG4相关疾病(IgG4-related disease,IgG4-RD)是一种自身免疫性疾病,可累及全身各个器官和组织,如胰腺、唾液腺、泪腺、胆管、肾及肺等,表现为受累组织内有大量IgG4~+浆细胞浸润合并炎性纤维化。目前,对IgG4-RD的发病机制研究主要集中在CD4~+细胞毒性T细胞、辅助型T细胞2等T细胞上,而IgG4-RD患者使用B淋巴细胞清除剂利妥昔单抗后症状得到改善,提示B细胞可能参与该病的发生,但迄今尚未有证据表明B细胞是否可以直接引起受累组织纤维化。     

IgG4乔本甲状腺炎中TRAIL、FasL的表达及临床病理意义

目的探究IgG4乔本甲状腺炎(IgG4Hashimoto's thyroiditis,IgG4HT)的临床、病理、血清学特征,分析血清TRAIL和/或FasL浓度与IgG4HT的临床、病理特征的相关性。方法采用免疫组化检测46例HT组织中的IgG~+、IgG4~+浆细胞,化学发光法及酶联免疫吸附测定法分别检测患者术前血清TgAb,TPOAb和TRAIL、FasL的浓度,并进行分析。结果依据IgG4+浆细胞20/HPF、IgG4~+/IgG~+浆细胞30%的诊断标准,HT组中11例(23.9%)为IgG4 HT。IgG4 HT较非IgG4HT具有更显著的甲状腺纤维化(P=0.006),更易发生亚临床甲状腺功能减退(P=0.02),血清TPOAb水平较低(P0.001),FasL浓度较高(P0.001);血清FasL浓度与IgG4HT甲状腺纤维化程度呈正相关(r=0.620,P=0.042),与甲状腺功能状态呈负相关(r=-0.841,P=0.001)。结论 IgG4HT为更具破坏性的乔本甲状腺炎亚型,FasL可能在甲状腺功能减退进程中发挥作用。     

凋亡相关蛋白Bcl2、Bax在IgG4相关性乔本甲状腺炎中的表达及其临床病理意义

目的探讨IgG4相关性乔本甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis,HT)的临床病理特征,并进一步分析凋亡相关蛋白Bcl2、Bax的表达与其临床、病理特征的相关性。方法用免疫组化检测46例HT和15例滤泡性腺瘤瘤旁甲状腺组织中IgG4+浆细胞、IgG+浆细胞及Bcl2、Bax蛋白的表达,依据IgG4+浆细胞20/HPF及IgG4+/IgG+30%的标准,将HT分为IgG4组和非IgG4组,分析两组间临床病理特征及Bcl2、Bax蛋白分布、表达的差异。结果 46例HT患者中11例为IgG4-HT(占23.9%)。与非IgG4组比较,IgG4组患者更容易出现亚临床甲状腺功能减退(P=0.02)、甲状腺纤维化程度更显著(P=0.006);IgG4-HT甲状腺滤泡上皮中Bax蛋白的表达显著高于非IgG4-HT组(P=0.001),且与甲状腺纤维化的程度呈正相关(r=0.622,P=0.04)。结论 IgG4-HT代表了更具破坏性的一种乔本甲状腺炎亚型,更容易出现甲状腺功能减退;凋亡促进蛋白Bax可能在IgG4-HT的病理进程中发挥了作用。     

辛酸沉淀结合阴离子交换层析纯化马IgG的研究

目的以辛酸沉淀结合离子交换层析纯化破伤风抗毒素马免疫血浆,获得高质量的马IgG,为抗毒素F(ab')2的制备奠定基础。方法通过对辛酸沉淀马血浆过程中的pH、辛酸浓度以及血浆稀释倍数的实验设计(DoE),研究不同条件对IgG纯度、效价、比活性、浊度以及过滤速度的影响,确定各工艺参数的可操作区间,并结合Capto DEAE阴离子交换层析以流穿模式进一步纯化IgG。结果马血浆经一步辛酸沉淀获得的IgG纯度(SDSPAGE)大于92%、分子排阻色谱(SEC)纯度大于95%,比活性较血浆提高2.14±0.29倍;辛酸沉淀后的IgG样品经阴离子交换层析,可有效去除聚合体以及小分子杂质,将纯度提高至95%(SDS-PAGE)和98%(SEC)。结论马血浆经辛酸沉淀和阴离子交换层析可获得高纯度、高比活的IgG。     

Clinical strategies for differentiating IgG4-related cholecystitis from gallbladder carcinoma to avoid unnecessary surgical resection

Immunoglobulin G4(IgG4)-related cholecystitis(IgG4-C) is often difficult to distinguish from gallbladder carcinoma(GBC).This study aimed to determine a practical strategy for differentiating between IgG4-C and GBC to avoid unnecessary surgical resection. The expression of IgG4 in the gallbladder was detected by immunohistochemistry. The clinicopathological and radiological characteristics of IgG4-C patients and GBC patients were analyzed retrospectively. Immunohistochemistry revealed that IgG4 was upregulated in the plasma cells of IgG4-C tissues. The median serum total bilirubin levels were significantly higher in the patients with IgG4-C than in those with GBC(45.8 μmol L~(-1) vs. 29.9 μmol L~(-1)). The serum γ-GGT levels were higher in IgG4-C patients than in GBC patients, whereas the serum levels of CA125 were significantly higher in GBC patients than in IgG4-C patients. The imaging scans were helpful for differentiating IgG4-C from GBC based on the presence of a layered pattern and Rokitansky-Aschoff sinuses in the gallbladder wall. There were no statistically significant differences in age,presence of abdominal pain, level of emaciation between the two groups. Our study demonstrated that the combination of imaging with serum total bilirubin, γ-GGTand CA125 levels can offer added preoperative diagnostic value and reduce the rate of IgG4-C misdiagnosis.     

应用异型双功能交联剂制备酶-抗体结合物

酶标免疫测定法(ELISA)中最关键的化合物是酶-抗体结合物,将酶和抗体交联起来需用交联剂。本文作者使用了N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(简称SPDP)将辣根过氧化物酶(HRP)和兔抗小鼠IgG(兔IgG)交联起来。我们试验了SPDP/HRP,SPDP/IgG和HRP/IgG的不同比例,以期获得活性高的酶-抗体结合物。此外还研究了从结合物中去除自由HRP和自由IgG的方法。用SDS-PAGE及硝酸纤维膜电泳转移法证明本法制备的结合物不含HRP及IgG的自身聚合物。用ELISA法鉴定结合物制品时,一般稀释度可达到1:10,000以上,有的可达到1:20,000(当结合物浓度A_(280nm)=1.0,底物显色A_(492nm)=1.0时)。     

匹多莫德联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿IL-4，IFN-γ，免疫球蛋白及T细胞亚群的影响

目的:探讨匹多莫德联合布地奈德雾化吸入对支气管哮喘患儿白细胞介素(IL)-4、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白及T细胞亚群的影响。方法:选取2015年6月至2016年6月我院收治的支气管哮喘患儿92例作为研究对象,随机分为观察组和对照组,对照组吸入布地奈德混悬液治疗,观察组在对照组的基础上联用匹多莫德口服液,检测并比较两组患儿治疗前后血清IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、IgM以及CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)的变化。结果:治疗前,观察组与对照组的IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、Ig M及CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)均无统计学差异(P0.05);与治疗前相比,观察组治疗后IL-4水平显著降低,IFN-γ、IgA、IgG、IgM水平、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平均显著升高,差异均有统计学(P0.05);而对照组治疗后的IFN-γ、IgA、IgG、IgM、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平与治疗前比较差异均无统计学意义(P0.05),仅IL-4水平显著降低(P0.05)。治疗后,观察组的IL-4、IFN-γ、IgA、IgG、IgM、CD~(3+)、CD~(4+)、CD~(8+)、CD~(4+)/CD~(8+)水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:与单独使用布地奈德相比,匹多莫德联合布地奈德可更加显著提高支气管哮喘患儿的调节免疫功能。     

W135群脑膜炎球菌结合物小鼠免疫血清IgG抗体亚类和亲合力的检测

目的通过检测W135群脑膜炎球菌结合物(简称W135群结合物)小鼠免疫血清中IgG抗体亚类及IgG抗体亲合力,判断W135群结合物的免疫应答特征。方法 (1)免疫血清的制备:将NIH雌性小鼠随机分为3组(A组、B组、对照组),每组30只。A组采用含2.5μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、2、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;B组采用含2.5μg多糖的PSW135CNBr-TT分别于0、4、8周腹股沟皮下注射小鼠;对照组采用含2.5μg多糖的PSW135分别于0、2、4周腹股沟皮下注射小鼠。分别于每次免疫7 d后,经小鼠眼眶静脉采血,分离血清备用;(2)IgG抗体亚类和亲合力的检测:采用间接ELISA分析各组免疫血清中IgG抗体及IgG抗体亚类含量;采用单一浓度的硫氰酸钾溶液作为洗脱液,用间接ELISA测定免疫血清中IgG相对亲合力。结果 A组和B组获得的小鼠免疫血清,IgG抗体均以IgG1为主(占总IgG抗体的80%以上),IgG抗体及其亚类抗体含量均呈典型的剂次加强效应;对照组各针次免疫血清中的IgG3抗体含量所占比例最高,未见免疫剂次加强效应。A组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6%、25.4%、17.6%和47.6%,B组IgG抗体的相对亲合力分别是46.6%、23.6%和48.3%,对照组IgG抗体的相对亲合力分别是92.4%、81.9%和81.0%。结论 W135群结合物小鼠免疫血清呈现典型的胸腺依赖性(thymus dependent,TD)抗原的免疫应答特征。     

水痘-带状疱疹病毒对系统性红斑狼疮患者体液免疫功能的影响

目的:观察水痘患者、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者和系统性红斑狼疮合并水痘患者体液免疫指标的变化,探讨水痘-带状疱疹病毒对系统性红斑狼疮患者体液免疫功能的影响。方法:选择在我院诊断治疗的水痘患者、系统性红斑狼疮患者和系统性红斑狼疮合并水痘患者共66例,同时设21例正常对照组;利用血液细胞分析仪检测各组血液中白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)以及血红蛋白含量(HGB);采用免疫比浊法检测各组血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)和免疫球蛋白M(IgM)以及补体C3、C4的水平。结果:与正常对照组比较,水痘组、SLE组以及SLE合并水痘组WBC、PLT和HGB含量下降,其中SLE组和SLE合并水痘组WBC、PLT降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水痘组血清中IgG、IgA和IgM含量下降,SLE组和SLE合并水痘组血清中IgG、IgA和IgM含量上升,其中水痘组血清中IgA含量减少有统计学意义(P<0.05),SLE组和SLE合并水痘组血清中IgG、IgA含量增加有统计学意义(P<0.05或P<0.01);水痘组血清中补体C3、C4含量增加,SLE组和SLE合并水痘组血清中补体C3、C4含量减少,其中SLE合并水痘组减少且差异有统计学意义(P<0.05)。与SLE组比较,SLE合并水痘组WBC明显增加(P<0.05),血清中IgG、IgA和补体C3、C4降低且差异有统计学意义(P<0.05)。结论:水痘-带状疱疹病毒可引起系统性红斑狼疮患者免疫系统相关指标的改变并对其产生影响。     

贲门癌及食管癌外周血免疫调节因子TGF-β1和IL-10及相关抗原自身抗体的变化及临床意义

目的检测免疫调节因子及相关抗原自身抗体在食管癌和贲门癌患者外周血的变化,分析其临床意义。方法选择本院2015年1月-2016年11月食管癌和贲门癌89例,作为病例组,临床TNM分期:T1级18例,T2级21例,T3级患者27例,T4级23例。选取同期体检健康人群110例,作为正常组。检测血清免疫调节分子TGF-β1、IL-10浓度和anti-CD25IgG、anti-FOXP3IgG抗体水平。结果病例组患者治疗前血清TGF-β1、IL-10浓度和anti-CD25IgG、anti-FOXP3IgG分别为(375.36±28.16)pg/mL、(32.51±3.73)pg/mL和(2.43±0.26)mg/L、(2.51±0.29)μg/L,均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);T3+T4患者治疗前TGF-β1、IL-10浓度和anti-CD25IgG、anti-FOXP3IgG分别为(461.64±31.29)pg/mL、(38.60±4.21)pg/mL和(2.70±0.21)mg/L、(2.69±0.30)μg/L,均高于T1+T2患者,差异有统计学意义(P0.05),患者治疗后TGF-β1、IL-10浓度和anti-CD25IgG、antiFOXP3IgG分别为(180.94±23.15)pg/mL、(22.76±4.29)pg/mL和(1.38±0.23)mg/L、(1.77±0.25)μg/L,均低于治疗前,差异有统计学意义(P0.05)。结论食管癌和贲门癌患者外周血中TGF-β1、IL-10浓度和anti-CD25IgG、anti-FOXP3IgG显著升高,并随着分期的增加而升高,患者经治疗后降低,在食管癌和贲门癌的发生、发展及结局中具有重要意义。     

Smad3基因剔除小鼠特异性免疫功能的研究

目的　研究Smad3基因剔除小鼠的体液免疫和细胞免疫。方法　采用流式细胞仪对其细胞免疫和体液免疫进行检测 ;并且应用ELISA方法对IgG抗体的吸光度进行测定。结果　纯合型 (- - )小鼠CD8 、CD4 CD8 、IgG雌雄之间差异有显著性 ;CD4 、CD8 、CD3 、CD19 、IgG的值低于野生型 ;结论　CD4 CD8 的比值同野生型比较属于异常 (与人的范围比较 )。因此 ,为在人类免疫疾病研究方面选用该动物提供一定的参考价值     

用IgG指示试纸同时检测多种马铃薯病毒病

用硝基纤维素膜(NCM)为载体制备的抗体IgG指示试纸,可同时检测马铃薯X病毒(PVX)、马铃薯Y病毒(PVY)、马铃薯S病毒(PVS)和马铃薯卷叶病毒(PLRV)的感染。以pH10.0的1％甘氨酸溶液为PVX、PVY和PVS的研磨缓冲液,比已报道的缓冲液效果好。在提取病毒抗原时加入4％纤维素酶,可提高病毒得率及所制备的抗血清灵敏度。     

Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控

目的:探究Ghrelin对大鼠摄食的影响及orexins信号通路的调控作用。方法:采用免疫组织化学染色的方法观察Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触联系以及下丘脑外侧区(LHA)内c-fos的表达。侧脑室注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG混合液、抗-黑色素浓集激素(MCH)IgG、NPY-1受体拮抗剂后测量大鼠摄食量,观察其对ghrelin诱导摄食的影响。结果:Ghrelin免疫阳性神经元轴突末梢与orexin神经元的突触相接触。侧脑室注射ghrelin可诱导orexin神经元内c-fos表达,但是没有引起MCH神经元内c-fos的表达。预先注射抗-NPY IgG抗体,ghrelin仍然可诱导orexin神经元内c-fos表达。侧脑室预先注射抗-orexin-A IgG和抗-orexin-B IgG抗体可减弱ghrelin促摄食作用,但是预先注射抗-MCH IgG抗体对ghrelin诱导的摄食作用没有明显影响。注射NPY受体拮抗剂可进一步加强抗-orexin-A IgG抗体和抗-orexin-B IgG抗体对ghrelin诱导摄食的抑制效应。结论:ghrelin可能与orexin系统相互作用共同参与摄食和能量平衡的调控。     

乳杆菌对牛乳β-乳球蛋白致敏小鼠淋巴细胞分泌Th1/Th2型细胞因子和抗体的体外影响

为了分析乳杆菌对致敏小鼠脾淋巴细胞分泌Th1/Th2细胞因子及抗体的体外影响,用牛乳β-乳球蛋白腹腔注射BALB/c小鼠建立过敏症模型,造模成功后,分离致敏小鼠的脾淋巴细胞并与4种活/死乳杆菌(107 CFU/mL)体外共同孵育,ELISA法检测细胞上清液中细胞因子(IL-12、IFN-γ和IL-4)和抗体(总IgE、β-Lg特异性IgE和总IgG)含量。4种活/死乳杆菌均可体外调节致敏小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子和抗体的水平,特别是热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌可提高淋巴细胞IL-12和IFN-γ的分泌,抑制IL-4的分泌,使其IFN-γ/IL-4比值(代表Th1/Th2细胞平衡)高于活菌,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。同时,这两株热致死菌还可显著下调细胞上清液中总IgE、特异性IgE和总IgG抗体的浓度(P<0.05)。试验结果表明乳杆菌可提高牛乳β-乳球蛋白致敏小鼠脾淋巴细胞的IFN-γ/IL-4比值,进而纠正Th2占优势的Th1/Th2失衡,下调抗体分泌量,且具有菌株特异性。     

金黄色葡萄球菌抗原的IgG4特异性亚类反应揭示宿主与病原菌之间的相互作用

正IgG4应答被认为是源于长期或反复接触特定抗原的结果。因此,对能够抵抗金黄色葡萄球菌的特异性IgG4抗体应答的研究,可能使人们对宿主与病原体的相互作用以及微生物毒力因子有一个全新的思考。利用流式细胞术分析技术,我们对来源于健康的持续鼻腔带菌者,健康的持续非携带者以及三个不同国家多种葡萄球菌感染患者的血清进行检测,结果检测到针对40种不同金黄色葡萄球菌毒力因子的全部IgG(IgGt)、IgG1和IgG4抗体应答。     

不同黏膜佐剂对猪丁型冠状病毒诱导小鼠免疫应答的影响

【目的】旨在为猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)灭活疫苗黏膜免疫筛选理想佐剂,降低疫苗副作用。利用小鼠模型评价不同佐剂制备的PDCoV灭活疫苗对体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答的影响。【方法】将甘露聚糖肽(PA)、CpGODN2395、单磷酰脂质A(MPLA)佐剂分别与IMS 1313、GEL02佐剂联合制备PDCoV灭活疫苗,经鼻腔免疫BALB/c小鼠;将ISA201佐剂制备的PDCoV灭活疫苗经皮下免疫BALB/c小鼠,将PDCoV灭活抗原经鼻腔免疫BALB/c小鼠作为对照,间隔14 d加强免疫一次。用ELISA方法检测小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的IgG、IgG1、IgG2a、IL-4、IFN-γ及粪便和BALF中sIgA表达水平;用MTT方法检测疫苗免疫后对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;观察并记录小鼠免疫后的临床表现,HE染色方法观察免疫小鼠主要器官组织的病理学变化,评价疫苗的安全性。【结果】ISA201组小鼠BALF和血清中的抗体(IgG、IgG1)及IL-4表达水平相对较高,但IgG2a、IFN-γ和粪便中sIgA表达水平...     

不同佐剂对含S+PreS1融合抗原的乙型肝炎病毒颗粒疫苗免疫原性的影响

本研究在前期工作基础上,用CHO细胞表达的含PreS1+S融合抗原的新型基因工程HBV颗粒疫苗(HBSS1)与Al(OH)3、CpG及CpG+Al(OH)3等佐剂配伍,在Balb/C小鼠模型上研究不同佐剂对HBV颗粒疫苗肌肉注射后免疫应答的影响,主要包括抗体滴度、抗体亚型分类及特异性细胞免疫(γ-IFNELISpot检测)。结果表明:CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗可快速诱导(单针免疫)高水平的抗PreS1及S抗体,IgG2a/IgG1比率1,同时可诱导较高抗原特异的细胞免疫应答;Al(OH)3+CpG双佐剂组一次免疫后可诱导产生最高的抗S抗体滴度(1:105),其产生的抗体亚类包括IgG1、IgG2a与IgG2b;在S抗原N端(13~49aa)存在优势CTL表位。结论:CpG佐剂结合HBSS1颗粒疫苗应是发展新型治疗性乙肝疫苗的较佳选项。     

新生儿ABO 溶血病相关危险因素的临床分析

目的:分析新生儿ABO溶血病的临床相关危险因素,提高对新生儿ABO溶血病的防治水平。方法:选择ABO血型不合的孕妇433例,根据以上产妇产前IgG抗A(B)效价、产妇妊娠次数和产妇年龄分别分组,分析各组产妇间发生新生儿溶血病(HDN)的差异及临床相关性。结果:产妇产前IgG抗A(B)效价、产妇妊娠次数和产妇年龄均与HDN发生率呈正相关性(P<0.05);IgG抗A(B)效价>256时,HDN发生率将显著提高(P<0.01);产妇妊娠次数和年龄增加后,HDN发生率将显著增加(P<0.01)。结论:夫妻血型不合的产妇进行产前保健时,应进行IgG抗A(B)效价检查,当IgG抗A(B)效价>64或IgG抗A(B)效价进行性增加时,应及早做好HDN的干预措施;通过减少意外妊娠及高龄产妇数量,可减少HDN的发生。     

免疫球蛋白G(IgG)分子结构的扫描隧道显微镜观察

把溶于双蒸水的兔IgG铺展在高定向石墨(HOPG)底载上,直接用扫描隧道显微镜(Scanning Tunneling Microscopy,简称STM)在大气环境中观察,得到了IgG分子的表面结构图像。从图像上可清晰地分辨出IgG分子的Fab及Fc片段,片段连接处的"铰链区"以及Fab和F_e片段的某些精细结构(IgG分子功能辖区)。本工作表明STM在研究生物大分子天然结构方面有巨大潜力。     

马IgM、IgG单克隆抗体的研制与鉴定

以马IgM、luG作为免疫抗原,以此免疫BALB/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2.0)融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选,结果获得了4株分泌抗马IgM和2株分泌抗IgG的单克隆抗体的杂交瘤细胞,特异性试验证明,4株IgM单抗有很好的特异性,仅与马的IgM特异反应,而不与IgG反应;这4株单抗分别命名为IgM4H、IgM6B、IgM8A和IgM12F.经鉴定,IgM4H、IgM6B、IgM12F株为IgG1亚类,IgM8A株为IgG2a亚类,杂交瘤细胞的平均染色体数目为99条.杂交瘤细胞培养上清液及小鼠腹水McAb的ELISA都具有较高的效价,该杂交瘤细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体.2株IgG的单克隆抗体有很好的特异性,只与IgG反应,而不与IgM发生交叉反应.