内源性硫化氢对慢性应激结肠高动力的影响

本文旨在探讨内源性硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)与慢性应激大鼠结肠高动力的关系。大鼠随机分为慢性避水应激(water avoidance stress,WAS)组和假避水应激(sham water avoidance stress,SWAS)组,记录大鼠每日1 h应激期间大便粒数,连续10 d;分别制作结肠平滑肌条,使用生物机能实验系统记录两组肌条自发性收缩活性以及SWAS组H2S合成酶抑制剂预处理后收缩活性;测定结肠内源性H2S的产生浓度;采用免疫组化和Western blot等方法观察结肠内源性H2S合成酶分布及表达。结果显示,WAS组大鼠应激期间大便粒数、结肠肌条收缩的曲线下面积(area under the curve,AUC)均高于SWAS组(P0.05);WAS组结肠内源性H2S产生量明显低于SWAS组(P0.001);H2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)在纵行肌条和环形肌条细胞浆、肌间神经元细胞核中强表达,胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS)主要表达于肌间神经元胞浆;与SWAS组相比,WAS组大鼠结肠(去除粘膜及粘膜下层后)CBS和CSE的表达下调(P0.001);H2S合成酶抑制剂明显增加SWAS组肌条收缩的AUC(P0.001)。以上结果表明,内源性H2S合成酶表达下调、H2S合成减少是慢性应激结肠高动力的原因之一。     

瞬时感受器电位A1通道参与冷刺激引起的离体大鼠结肠平滑肌收缩(英文)

瞬时感受器电位A1(transient receptor potential A1,TRPA1)通道是一种可以被伤害性冷刺激激活的TRP家族离子通道。本研究的目的是探讨TRPA1通道是否参与冷刺激引起的大鼠结肠平滑肌收缩及其可能的机制。分离雄性Wistar大鼠升结肠和降结肠的平滑肌,制备成肌条,灌流不同温度Krebs液给予冷刺激,然后17°C冷刺激条件下用不同药物灌流,用张力换能器记录张力变化。逆转录PCR(RT-PCR)检测上述平滑肌中TRPA1、TRPM8和TRPV1的mRNA表达。结果显示,在大鼠升结肠和降结肠的平滑肌层有TRPA1的表达,但无TRPM8和TRPV1的表达。肌张力研究显示,不同温度(32、25、17、12°C)的冷刺激可以引起大鼠升结肠和降结肠纵行平滑肌的收缩,并且收缩张力随着温度降低而增强,17°C冷刺激可引起最大收缩(P0.01)。TRPA1的阻断剂钌红(30μmol/L)可以抑制冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.05)。TRPA1激动剂异硫氰酸烯丙酯(AITC,300μmol/L)和桂皮醛(CA,1mmol/L)预处理肌条后,可降低或几乎取消冷刺激引起的升结肠(P0.01,P0.05)和降结肠(均P0.001)平滑肌的收缩。去除细胞外Ca2+(EGTA,1mmol/L)、PLC阻断剂U73122(10μmol/L)、IP3受体阻断剂2-APB(30μmol/L)均可抑制17°C冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩(P0.001,P0.05,P0.001)。阿托品(1μmol/L)则对17oC冷刺激引起的升、降结肠平滑肌的收缩均无影响。L-型钙通道阻断剂硝苯地平(1μmol/L)和神经毒素河豚毒素(2μmol/L)可抑制降结肠平滑肌的收缩(P0.01,P0.05),而对升结肠没有作用。综上所述,TRPA1通道参与冷刺激引起的大鼠升结肠和降结肠平滑肌的收缩,其胞内信号转导机制可能涉及PLC/IP3/Ca2+途径的激活。另外,L-型钙通道和非M受体介导的神经机制部分参与冷刺激引起的降结肠平滑肌收缩,这可能是降结肠收缩张力大于升结肠的原因。     

弓状核内胱硫醚β-合成酶通过PKC的上调和GluN2B磷酸化参与慢性胰腺炎大鼠腹部痛觉过敏（英文）

有报道显示初级感觉神经元中的硫化氢(H2S)参与内脏痛敏的形成,但其在中枢神经系统中的作用却鲜为人知。该研究旨在探讨下丘脑弓状核(arcuate nucleus,ARC)内H2S和其内源性合成酶是否参与慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)腹部痛觉过敏及其潜在机制。成年雄性Sprague-Dawley大鼠胰管内注射三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)诱导产生CP模型,运用von Frey filament(VFF)评测大鼠腹部对机械刺激的反应频率,运用Western blot检测ARC内蛋白表达水平。TNBS注射4周后ARC内胱硫醚-β-合成酶(cystathionineβ-synthetase,CBS)表达显著上调,而胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达没有明显改变;CP显著提高了NMDA受体Glu N2B亚单位的磷酸化水平,而总Glu N2B不变;CP也显著上调了蛋白激酶Cγ(PKCγ)在ARC的表达。ARC内微量注射CBS的抑制剂O-(羧甲基)羟胺半盐酸盐(AOAA)能显著降低CP大鼠的腹部疼痛,也翻转了CP大鼠ARC中p-Glu N2B和PKCγ的上调;ARC内微量注射Glu N2B抑制剂或PKC特异性抑制剂白屈菜赤碱能显著减轻CP大鼠的腹部痛觉过敏,PKC特异性抑制剂能减少p-Glu N2B表达。总之,以上数据表明,CP引起了ARC内CBS的上调,并可能通过PKCγ介导了Glu N2B的活化,参与CP痛觉过敏。本研究在一定程度上揭示了CP痛觉过敏产生的中枢机制,并有助于发现CP疼痛治疗的新靶标。     

去势大鼠阴茎海绵体内CSE/H2S与HO-2/CO的交叉调控作用

摘要：目的 观察去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CSE）/硫化氢（Hydrogen sulphide,H2S）与血红素加氧酶2（heme oxygenase,HO-2）/一氧化碳（carbon monoxide,CO）的交叉调控作用,初步探讨勃起功能障碍的发病机制。方法 雄性SD大鼠制备去势大鼠模型,分别施加锌原卟啉（ZnPP,HO阻断剂）和炔丙基甘氨酸（PAG,CSE阻断剂）干预,检测基础条件下和阿扑吗啡（Apomorphine,APO）刺激后的海绵体内压（Intracavernous pressure,ICP）和勃起率;通过Western-blot、敏感硫电极和分光光度计分别检测大鼠勃起不同时期ZnPP（HO阻断剂)对CSE/H2S系统的影响,PAG（CSE阻断剂）对HO-2/CO系统的影响。结果 基础条件和APO刺激后去势组、去势PAG组和ZnPP组与假手术组比较,ICP和勃起率下降（P<0.01）,且去势PAG组和ZnPP组较去势组ICP明显下降（P<0.01）;阿朴吗啡刺激勃起前和勃起中,去势组和去势Znpp（HO阻断剂）组较假手术组CSE蛋白表达和H2S含量下降（P<0.05）,且勃起中去势Znpp组较去势组CSE蛋白表达和H2S含量明显降低（P<0.05）;勃起后去势组和去势Znpp（HO阻断剂）组较假手术组H2S含量下降（P<0.01）。勃起前和勃起中去势组和去势PAG（CSE阻断剂）组较假手术组HO-2蛋白表达和CO含量下降（P<0.05）,且勃起中去势PAG组较去势组HO-2蛋白表达和CO含量明显降低（P<0.05）;勃起后去势组和去势PAG（CSE阻断剂）组较假手术组CO含量下降（P<0.01）。勃起前、勃起中和勃起后,CSE和HO-2蛋白表达分别呈正相关（r=0.732,0.850和0.727）,H2S和CO水平分别呈正相关（r=0.765,0.912和0.929）。结论 CSE/H2S与HO-2/CO交叉调控作用与去势大鼠勃起功能障碍有关。     

胱硫醚β合酶天然产物抑制剂的高通量筛选

[目的]构建人源胱硫醚β合酶CBS△516-525体外高通量筛选模型,在基础酶活水平,筛选天然产物库,发现新型、高效且特异的CBS天然产物抑制剂。[方法]在192串联双孔板内,构建纯酶CBS△516-525的高通量筛选模型,以200!mol/L初筛5 206个天然产物,经50!mol/L和5!mol/L复测验证后,选择抑制效果好的新型抑制剂进行剂量依赖性测试并检测其对同源酶胱硫醚γ裂解酶(CSE)的抑制效果。[结果]原核表达纯化出具有生物活性的CBS△516-525酶,经高通量筛选发现2个IC50约1!mol/L的CBS天然产物抑制剂,且对同源酶CSE均有180倍选择性。[结论]在基础酶活条件下,高通量筛选发现了选择性大于180倍的CBS高效天然产物抑制剂,这可为CBS的分子机制和功能研究提供特异的分子工具。     

去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶与硫化氢的表达

目的观察去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶（Cystathionine-γ-lyase,CSE）/硫化氢（Hydrogen sulphide,H2S）的变化,进一步探讨勃起功能障碍的发病机制。方法雄性SD大鼠72只分4组：对照组、假手术组,去势组和去势炔丙基甘氨酸（PAG,CSE阻断剂）组,检测基础条件下和阿扑吗啡（Apomorphine,APO）刺激后的海绵体内压（Intracavernous pressure,ICP）及勃起率;激光共聚焦显微镜检测CSE在大鼠勃起不同时期阴茎海绵体组织中的表达,敏感硫电极测定H2S在勃起不同时期的含量。结果与假手术组比较,去势组和去势PAG组ICP与勃起率下降（P〈0.01）;且去势PAG组较去势组ICP明显下降（P〈0.01）;阿朴吗啡刺激后,与假手术组比较,勃起前去势组和去势PAG组CSE蛋白表达降低（P〈0.01）,勃起中去势各组较假手术组CSE蛋白表达降低（P〈0.01）,且去势PAG组较去势组CSE蛋白表达明显降低（P〈0.01）;勃起后各组间CSE蛋白表达变化无差异。勃起前和勃起中去势各组较假手术组H2S含量下降（P〈0.05）,且勃起中去势PAG组较去势组H2S含量明显下降（P〈0.01）：勃起后去势组和去势PAG组较假手术组H2S含量下降（P〈0.01）。结论去势大鼠勃起功能障碍与CSE和H2S表达下降有关。     

白介素6通过阻断L型钙离子通道活性抑制急性胰腺炎大鼠结肠纵行肌条收缩

本文旨在探讨白介素6 (interleukin 6, IL-6)对急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠结肠纵行肌条收缩的作用及其机制。用雨蛙肽和脂多糖联合诱导法制备AP大鼠模型,用生物机能实验系统观察IL-6对大鼠结肠纵行平滑肌条自发性收缩的影响,用ELISA检测血清IL-6的水平,用免疫组织化学染色法观察IL-6在结肠的表达分布,用全细胞膜片钳技术观察IL-6对结肠平滑肌细胞L型钙离子通道的影响。结果显示,与对照组相比,AP组大鼠结肠平滑肌条收缩幅度显著减小(P 0.05),收缩周期延长(P 0.05);IL-6可延长大鼠结肠平滑肌条收缩周期,但对肌条的自发性收缩幅度无影响。AP组大鼠血清IL-6浓度明显高于对照组,差异具有显著性(P 0.01);对照组大鼠结肠中IL-6表达较弥散,而在AP组结肠腺体、黏膜及黏膜下层中IL-6表达明显增强。IL-6可显著降低大鼠结肠平滑肌细胞L型钙离子通道的峰电流密度。以上结果提示,AP大鼠结肠运动减弱,其机制可能是表达上调的IL-6阻断结肠平滑肌细胞L型钙离子通道活性,进而抑制结肠纵行平滑肌收缩。     

辣椒素对离体大鼠胃平滑肌收缩性的影响

目的:考察辣椒素对离体大鼠胃平滑肌收缩性的影响。方法:本研究以大鼠的离体胃平滑肌条为模型,首先考察在正常钙克氏液、高钙克氏液和低钙克氏液中辣椒素对胃平滑肌收缩作用的影响。然后正常克氏液中,分别观察辣椒素对乙酰胆碱、新斯的明、阿托品分别存在下的胃平滑肌收缩性的影响。结果:辣椒素在2.5μmol/L-40μmol/L浓度范围内可剂量依赖性显著抑制高钙溶液(Ca2 终浓度5μmol/L)引起的大鼠胃平滑肌强烈收缩,在5μmol/L-40μmol/L浓度范围内可显著抑制正常克氏液中大鼠胃平滑肌条的运动,且具有明显剂量依赖性,在10μmol/L-40μmol/L浓度范围内可显著抑制低钙克氏液中大鼠胃平滑肌条的运动,且具有剂量依赖性。辣椒素(10μmol/L)可拮抗乙酰胆碱和新斯的明引起的收缩作用(P<0.01)。辣椒素(10μmol/L)的作用与阿托品具有相加作用(P<0.01)。结论:辣椒素对胃平滑肌的收缩具有明显的抑制作用。     

三羟异黄酮对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道电流的影响

本实验用全细胞膜片钳技术观察三羟异黄酮(genistein,GST)对豚鼠心室肌细胞L-钙通道电流(ICa、L)的影响。结果如下:(1)GST(10、50、100 μmol/L)可浓度依赖性地降低ICa,L(n=6,P<0.01)。GST的非活性结构类似物daidzein(100μmol/L),在同一浓度范围对ICa,L没有影响(n=5,P>0.05)。(2)GST使I-V曲线上移,但对ICa,L的电压依赖特征和最大激活电压无明显影响。(3)GST对ICa,L的激活动力学特性也无影响,但可使钙电流稳态失活曲线左移。V0.5从对照的-28.6±0.6 mV变为-32.8±1.1mV,κ值从对照的5.8±0.5 mV升至6.5±0.9 mV(n=6,P<0.05)。(4)GST明显使复活曲线右移,从而使ICa,L从失活状态下恢复明显减慢(n=7,P<0.01)。(5)酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠(1 mmol/L)显著对抗GST引起的ICa,L抑制效应(n=6,P<0.01)。根据以上结果得出的结论是:GST抑制ICa,L加速钙通道失活和钙通道在失活状态下恢复减慢;GST对ICa,L的这种抑制作用与蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制有关。     

H2S介导ABA诱导蚕豆气孔运动的生理机制研究

以蚕豆为实验材料,利用药理学实验和分光光度法,研究了ABA处理及ABA与H2S合成抑制剂共处理对蚕豆气孔运动的影响,以及体内H2S水平、H2S合成酶L-/D-半胱氨酸脱巯基酶(磷酸吡哆盐依赖性酶)活性变化.结果表明:(1)光下H2S的合成抑制剂羧甲氧基胺半盐酸盐(AOA)、羟氨(NH2OH)、L-/D-半胱氨酸脱巯基酶分解产物C3H3KO3+NH3均明显抑制ABA诱导的蚕豆气孔关闭;(2)外源ABA能够明显提高叶片的H2S水平及L-/D-半胱氨酸脱巯基酶活性;(3)AOA、NH2OH、C3H3KO3和NH3均可以逆转ABA所引起的H2S水平及L-/D-半胱氨酸脱巯基酶活性的升高.研究发现,ABA可通过增强L-/D-半胱氨酸脱巯基酶活性,促进L-/D-半胱氨酸分解生成H2S,进而诱导蚕豆气孔关闭.     

氨甲酰胆碱增加大鼠心室肌细胞收缩机制的初步研究

目的:本文研究非选择性M受体激动剂氨甲酰胆碱(Cch)对心肌细胞收缩的作用,并同时观察L-型钙流,探讨其机制.方法:以分离大鼠的单个心室肌细胞为对象,采用膜片钳和单细胞收缩测量技术,在35℃恒温,细胞外钙离子浓度1.8 mmol/L,0.2 Hz,1.0 Hz刺激下测量细胞收缩幅度和ICa(L)、INa/Ca.结果:①大鼠心肌细胞收缩与刺激频率呈负相关;②选择△L0.2 Hz/△L1.0 Hz≥1.25(n=6)的细胞给予1.0 Hz的刺激,100 μmol/L Cch增加大鼠心室肌细胞收缩28%.③ Cch作用能被非选择性M受体阻滞剂阿托品阻滞,选择性M1受体激动剂MCN-A-343 100 μmol/L对细胞收缩无影响.④ 100 μmol/L Cch对ICa(L)无影响,但增加从 10 mV复极到-40 mV所产生的晚期尾电流,提示INa/Ca加大.结论:Cch能加强大鼠心室肌细胞收缩,它的作用由M2受体介导,其机制可能是通过加强INa/Ca,增加肌质网(SR)内的钙内容和钙释放,导致细胞收缩加强,而非通过L-型钙流.     

用酪氨酸苯酚裂合酶催化苯酚和 S-(O-硝基苯)-L-半胱氨酸合成 L-酪氨酸

近年来生物技术学家对酶法合成氨基酸具有浓厚的兴趣。我们对弗氏柠檬酸细菌(ATCC29063)酪氨酸苯酚裂合酶催化高Vmax,低Km 基质S(O—硝基苯)-L-半胱氨酸和苯酚,合成L 酪氨酸进行了研究。用可溶性S(o-硝基苯)-L-半胱氨酸反应迅速,2小时或更短时间反应达到完全,约70%苯酚转化为L-酪氨酸,反应底物所剩无几。这一反应的最适pH 值范围广泛,从6.8到9以上。由于S-(O硝基苯)-L-半胱氨酸易用L-半胱氨酸和对一氟硝基苯制备,所以采用这一反应合成L-酪氨酸及其衍生物具有潜在价值。     

L-型钙电流在血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨血管紧张素II(Ang II)诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中L-型钙电流的功能在分子水平改变。方法:在血管紧张素II诱导的新生大鼠肥大心肌细胞中,应用全细胞膜片钳技术检测L-型钙电流的密度及门控动力学变化;应用半定量RT-PCR技术检测L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA的表达量。结果:Ang II在引起新生大鼠心肌肥大的同时,也增加了心肌细胞ICa,L电流密度,但并不影响ICa,L电流的激活、失活和复活特征。另外,Ang II还增加了L-型Ca2+通道α1C亚单位mRNA表达量。Ang II的这些作用都可被其1型受体阻断剂losartan所抑制。结论:在Ang II诱导的新生大鼠肥大心肌中,L-型Ca2+通道的功能在分子水平发生了显著变化,这些变化是通过激活心肌细胞上Ang II 1型受体所介导的。     

钾通道在大鼠支气管平滑肌张力调控中作用的研究

目的：探讨延迟整流钾通道（Kv),高电导钙激活钾通道（BKCa)和ATP敏感钾通道（KATP)在大鼠支气管平滑肌张力调控中的作用。方法：以特异性钾通道阻断剂为工具,采用体外等长张力测定观察钾通道对静息和收缩状态下支气管张力的影响。结果：（1）KV阻断剂4－aminopyridine(4-AP)诱发大鼠支气管平滑肌产生浓度依赖性收缩反应,而BKCa阻断剂tetraethylammonium(TEA)和KATP阻断剂glibenclamide(Glib)对其无影响。（2）去除上皮对4－AP诱发大鼠支气管平滑肌收缩反应无影响,而钙通道阻断剂nifedipine对其有显著抑制效应。（3）在0.1mmol/L组胺或50mmol/L KCl诱发支气管平滑肌收缩之前或之后,加入TEA（1,5mmol/L)或0.1mmol/L 4-AP均显著增强二者诱发的收缩反应;而Glib(10μmol/L）对其无明显影响。结论：Kv参与大鼠支气管平滑肌静息张力的调控,而BKCa和KATP对其无影响。Kv和BKCa的关闭增强组胺及高浓度钾离子诱发大鼠离体支气管产生的收缩张力。     

硫化氢合成酶抑制剂金丝桃素的体内外抗结肠癌作用研究

为研究金丝桃素对硫化氢合成酶活性的影响,探索金丝桃素作为胱硫醚-β-合成酶(CBS)抑制剂的体内外抗结肠癌作用。本研究通过亚甲蓝法测定金丝桃素和氨基氧乙酸(AOAA)对CBS产H2S活性的抑制作用,以HT29人结肠癌细胞和移植HT29细胞的裸鼠肿瘤模型为抗肿瘤研究对象,测定金丝桃素体内外抗肿瘤作用。结果表明,来源于贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)的化合物金丝桃素是CBS的高效选择性抑制剂,其IC50为7.9±1.42μmol/L。金丝桃素能显著抑制HT29人结肠癌细胞的增殖,其IC50为22.2±2.25μmol/L。基因沉默实验表明CBS蛋白可能是金丝桃素在细胞内的潜在靶标之一。意外的是,目前普遍使用的CBS抑制剂AOAA抑制HT29细胞增殖作用非常弱,其IC50为152.5±35.68μmol/L。此外,不同剂量的金丝桃素(5~30mg/kg·d)均能显著减少裸鼠肿瘤体积和重量,30mg/kg·d剂量皮下给药2周后,和对照组相比肿瘤重量减少了68%。以上结果表明金丝桃素作为CBS的选择性抑制剂具有显著的抗结肠癌作用。     

代谢过程中相关氨基酸对高密度发酵生产腺苷蛋氨酸的影响

对清酒酵母高密度发酵生产S-腺苷-L-蛋氨酸（SAM）代谢过程中的相关氨基酸进行了考察。分别考察了十二种氨基酸对生物量和SAM产量的影响。实验发现L-胱氨酸、L-半胱氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸和L-蛋氨酸对SAM的积累有利,其中L-赖氨酸和L-组氨酸可以提高生物量,进而提高SAM的产量;L-胱氨酸、L-半胱氨酸和L-蛋氨酸可以提高SAM的含量,但是会抑制生物量的增长。通过3种补加方式的比较,得到最优的补加方式为：L-赖氨酸和L-组氨酸在培养基中加入,L-胱氨酸,L-半胱氨酸和L-蛋氨酸采取在发酵过程前24h流加。通过正交实验确定补加量为：L-赖氨酸为1g／L,L-组氨酸为1g／L,L-胱氨酸为1．5g／L,L-半胱氨酸为1g／L,L-蛋氨酸为1g／L。将此结果应用于5L发酵罐培养,SAM最高产量为5．53g/L,生物量为128g／L。     

水杨酸调控内源H_2S缓解黑大豆铝胁迫的作用机理研究

该研究以铝(Al)敏感型黑大豆(SB)根为实验材料,通过一系列生理生化和组织化学实验手段,探讨了水杨酸(SA)通过调控内源H_2S信号缓解铝胁迫的作用方式。结果表明:(1)AlCl_3处理黑大豆SB根系Al积累增加,AlCl_3与SA共处理能明显抑制Al在SB根系的累积,加入H_2S清除剂(HT)或H_2S合成抑制剂(PAG)后SB根系Al累积量增加。(2)SA使Al胁迫下黑大豆(SB)根内源H_2S水平增加1.5倍,并显著缓解Al胁迫导致的根生长抑制、活性氧(ROS)累积、氧化损伤和细胞死亡,共处理HT或PAG均能够显著降低内源H_2S水平,并可逆转上述所有SA对Al胁迫的缓解效应。(3)SA降低了Al胁迫下黑大豆(SB)根尖抗氧化酶CAT、SOD和APX活性,抑制SB根系细胞ROS的产生,用HT或PAG抑制H_2S信号可增强抗氧化酶活性。(4)在Al胁迫条件下,SA可进一步上调一系列耐Al基因的表达,包括外部解毒机制中的耐铝转录因子GmART1、柠檬酸合成酶基因GmCS、柠檬酸转运蛋白基因GmMATE,内部解毒机制中的苹果酸转运蛋白基因GmAlCT以及Al3+相关转运蛋白基因GmAlS1和GmNIP1;2,通过HT或PAG降低内源H_2S水平可逆转SA对上述基因表达的调控。(5)SA可提高Al胁迫下黑大豆(SB)根柠檬酸的分泌量,此效应亦可被HT或PAG抑制。研究发现,H_2S可作为SA的下游信号参与调控黑大豆(SB)响应Al胁迫的过程,为揭示植物Al耐受信号调控网络途径提供部分新的理论基础。     

嘌呤拟似物对豚鼠胃窦环行肌自发性收缩及电活动的影响

为探讨非肾上腺素能非胆碱能神经递质对胃窦环行肌功能的调节作用,在离体胃平滑肌上观察了嘌呤拟似物对胃窦环行肌自发性收缩活动和电活动的影响。电活动用传统的细胞内微电极记录,并和收缩活动同步描记于多道生理记录仪。结果表明,嘌呤能P2Y受体激动剂,三磷酸腺苷(ATP)和2-methylthio ATP(2-MeSATP)均增强胃窦平滑肌的收缩活动,但不影响电活动,而且ATP和2-MeSATP对胃平滑肌收缩活动的增强作用可被嘌呤能P2Y受体阻断剂,reactive blue-2和苏拉明(suramin)所阻断。用100μmol／L α,β-MeATP引起的脱敏感使P2X受体被阻断,ATP增强胃窦平滑肌收缩活动的效应不受影响。嘌呤能P2X受体激动剂,α,β-MeATP明显抑制胃窦环行肌自发性收缩活动,同时使膜电位明显超极化。ATP对胃窦平滑肌的收缩作用不被L型钙通道阻断剂尼卡地平(nicardipine)阻断,但细胞外用无钙液灌流时这种效应则完全被阻断。用前列腺素合成抑制剂消炎痛预先处理20min后,ATP和2-MeSATP仍能增强胃窦平滑肌的自发性收缩活动。以上结果提示：(1)ATP和2-MeSATP通过嘌呤能P2Y受体增强胃窦平滑肌的自发性收缩活动,而α,β-MeATP或β,γ-MeATP通过嘌呤能P2X受体使膜电位超极化,引起胃窦平滑肌的舒张;(2)ATP和2-MeSATP增强胃窦平滑肌自发性收缩活动的效应依赖于细胞外钙,但钙离子进入细胞的途径并不是电压依赖性钙通道;(3)ATP和2-MeSATP增强胃窦平滑肌自发性收缩活动的效应不通过前列腺素介导。     

大鼠肝硬化形成中气体信号分子一氧化氮、一氧化碳对硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶体系的影响

目的:研究气体信号分子一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)在大鼠肝硬化中对硫化氢(H2S)/胱硫酶-γ-裂解酶(CSE)体系的影响.方法:将SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NC组)、肝硬化模型组(CIRM组)、肝硬化模型+左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)+锌原卟啉-Ⅸ(Znpp-Ⅸ)组(CIRM+L-NAME+ZnPP-Ⅸ组).采用复合因素法建立大鼠肝硬化模型.运用敏感硫电极方法检测大鼠血浆中H2S的含量;应用免疫组织化学方法对大鼠门静脉(PV)上CSE蛋白进行定位及半定量分析;利用蛋白质免疫印迹技术(Western blot)4定大鼠肝组织中CSE蛋白的表达量.结果:在大鼠肝硬化形成后,血浆H2S含量显著降低,CIRM组[(134.49±12.25)umol/L]与NC组[(180.34±11.71)umol/L]比较有显著性差异(P<0.01);门静脉上CSE蛋白的表达[NC组、CIRM组分别为(139.19±1.13)、(153.68±0.90)]及其在肝组织中的蛋白含量[NC组、CIRM组分别为(159.30±1.37)、(121.72±1.61))显著降低(P<0.01);当外源性给予L-NAME、ZnPP-Ⅸ后,CIRM+LNAME+ZnPP-Ⅸ组血浆H2S含量[(160.81±6.79)u-mol/L]显著高于CIRM组[(134.49±12.25)umol/L,P<0.01],同时,CIRM+L-NAME+ZnPP-Ⅸ组门静脉上CSE蛋白的表达(148.72±1.39)及其在肝组织中的蛋白含量(142.79±1.13)显著高于CIRM组(P<0.01).结论:在大鼠肝硬化形成中,NO、CO可以上调H2S/CSE体系.     

槲皮素舒张大鼠离体肾动脉及其与L-型电压依赖性钙通道和蛋白激酶C的关系

为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)L-型电压依赖性钙通道(L-type voltage-gated Ca~(2+) channels,LVGC)电流。实验结果显示,槲皮素能够舒张60 mmol/L KCl或1×10~(-5) mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的大鼠肾动脉,其最大舒张百分比分别为(84.53±7.35)%和(76.42±4.63)%;血管内皮完整组和去内皮组肾动脉相比,槲皮素对预收缩肾动脉的最大舒张百分比没有显著性差异;预孵育PKC特异性抑制剂C6303可使槲皮素对肾动脉的最大舒张幅度降低,与未孵育C6303组相比具有统计学差异(P0.05);离体大鼠肾动脉VSMC的正常LVGC尖峰电流密度为(23.17±1.33)pA/pF,10μmol/L槲皮素可以降低其电流密度到(10.46±1.35)pA/pF,其抑制百分比为54.86%,1μmol/L C6303可部分逆转槲皮素对LVGC电流的降低幅度,其抑制百分比为62.08%(P0.05)。上述实验结果提示,槲皮素可舒张大鼠离体肾动脉,该作用具有浓度依赖性且不受内皮影响,可能与抑制LVGC和激活PKC有关。