嗜酸乳杆菌DOMLa菌株thyA基因突变株的筛选

为构建以ｔｈｙ基因为选择标记的嗜酸乳杆菌染色体－质粒致死平衡系统。我们建立了嗜酸乳杆菌ｔｈｙ基因突变菌株的筛选方法。从含有三甲氧卞氨啶（ＴＭＰ）２０μｇ／ｍｌ和胸腺嘧啶（ｔｉｈｙｍｉｄｉｎｅ）５０μｇ／ｍｌ的改良ＭＲＳ培养基因中筛选了１００株突变株,从中确定一株生物学性状稳定的菌株ＤＯＭＬａＦ８４作为进一步研究的受体侯选菌株。     

一株嗜酸乳杆菌的分离与鉴定

桂林市黄洛瑶寨地区人群在洗发过程中长期使用淘米水发酵液,该地区发质和头发根部头皮质量都要优于其他地区,淘米水发酵液中益生菌对头发和头皮的影响值得关注。为了研究该地区淘米水发酵液中益生菌,对淘米水发酵液进行菌株的分离与鉴定。从淘米水发酵液中分离得到3株嗜酸乳杆菌疑似菌株,通过菌株菌落形态、显微形态、革兰氏染色、46项生理生化指标和分子生物学方法进行鉴定,结果表明3号菌株菌落形态、显微形态、革兰氏染色符合嗜酸乳杆菌特征;46项生理生化指标与嗜酸乳杆菌接近,鉴定可信度达到90%;经过16S rDNA鉴定后,其与嗜酸乳杆菌的同源性高达99%。综合多项检测结果确定其为嗜酸乳杆菌,并且命名为CFC-001。     

梅岭霉素高产菌株链霉素抗性基因突变株筛选

通过链霉素对梅岭霉素 (Meilingmycin)产生菌南昌链霉菌NS 41 80菌株孢子致死浓度的测定 ,采用诱变剂EMS 4种不同剂量对菌株孢子进行诱变处理 ,然后涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上 ,获得了大量的链霉素抗性基因 (str)突变株。并进一步筛选到梅岭霉素高产菌株 80 5 1 1 2 2 1 ,在摇瓶条件下 ,只产梅岭霉素不产南昌霉素 ,梅岭霉素活性单位达 1 ,52 1 μg/mL,比NS 41 80的摇瓶发酵单位 855μg/mL提高了 77 9% ,该菌株连续传 6代进行摇瓶发酵     

体外拮抗幽门螺杆菌的人嗜酸乳杆菌菌株的选育

目的 探讨人嗜酸乳杆菌对幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ,ＨＰ）毒力株的体外拮抗作用,筛选出对ＨＰ毒力株有明显拮抗作用的嗜酸乳杆菌菌株。方法 从健康人胃肠道中分离出５２株嗜酸乳杆菌可疑株,通过其培养特性,生理特性,生化反应及代谢产物测定等进行鉴定,获得２６株嗜酸乳杆菌。同时,从临床患者胃活检标本中分离出２３株ＨＰ菌株,用ＰＣＲ方法筛选出ｃａｇＡ阳性ＨＰ毒力株,然后,采用打孔法进行嗜酸乳杆菌培养上清拮抗ＨＰ毒力株的实验,以１％的乳酸作对照。结果 筛选出４株对ＨＰ毒力株有明显拮抗作用的嗜酸乳杆菌,这种拮抗作用不依赖嗜酸乳杆菌分泌的乳酸。结论 人嗜酸乳杆菌在体外对ＨＰ毒力株具有明显拮抗作用。该研究为应用微生态疗法治疗ＨＰ感染提供了理论基础。     

嗜酸乳杆菌抑菌特性的研究

目的：对从婴儿肠道中分离出来的两株嗜酸乳杆菌的抑菌特性进行研究。方法：采用MRS培养基。结果：嗜酸乳杆菌对致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及炭疽杆菌有明显的抑菌作用。37℃培养24h抑菌圈大小均在15mm以上。结论：该菌是肠道中的益生菌。     

诱导选育嗜酸乳杆菌的鉴定

对亚硝基胍(NTG)诱变获得的嗜酸乳杆菌菌株的抗酸、抗胆盐及多项酶活力进行测定。亚硝基胍诱变的嗜酸乳杆菌培养于模拟胃肠环境的pH 3.5酸性环境90 min后,再培养于中性0.2%胆盐环境中,对其生长情况进行评估。对抗酸抗胆盐菌株的各项酶活性进行评估。嗜酸乳杆菌突变后筛选的2株菌株都具有良好的抗酸和抗胆盐能力,其中突变株Y48在模拟胃肠环境中生长良好,并具有良好的酶活性。诱变获得的优良嗜酸乳杆菌株,具有良好的抗酸抗胆盐及酶活各项性能,为开发优质的嗜酸乳杆菌新产品提供了条件。     

16S rRNA PCR鉴定嗜酸乳杆菌鸡源分离株

用自行设计的嗜酸乳杆菌16S rRNA的特异性引物和建立的PCR方法对初步鉴定为嗜酸乳杆菌的鸡源分离株进行检测。PCR检测结果表明分离株和嗜酸乳杆菌参考株扩增出大小一致的目的片段,从分子水平对鸡源分离菌进行了鉴定。     

嗜酸乳杆菌P302菌株产类细菌素最佳条件的研究

目的对产类细菌素嗜酸乳杆菌P302的发酵条件进行研究。方法采用琼脂扩散法测定发酵上清液对大肠埃希菌O139的抑菌活性。结果通过正交试验确定P302产类细菌素的最佳培养基组分为牛肉膏4％、胰蛋白胨0．2％、酵母粉0．8％、碳酸钙0．4％和蔗糖1％,0．4％复合维生素,0．3％Tween-80有利于类细菌素的产生。发酵工艺条件为最适初始pH7．0,最适温度37℃,最佳接种量0．3％,种龄14h,厌氧培养22h。结论通过优化发酵条件和发酵工艺,类细菌素的产量提高了35％。     

嗜酸乳杆菌制剂区域试验初步结果

嗜酸乳杆菌制剂抗痢灵,是石河子医学院研制的复方生态制剂,在完成了一系列基础研究和中间试验之后,于1991年10月开始进行扩大的区域试验。结果显示,抗痢灵用于防治畜禽下痢,总有效率达90％以上,并有明显的提高增重的效果,且无毒无副作用,是一种新型的安全有效的生态制剂。     

嗜酸乳杆菌发酵代谢产物分析

气相色谱分析表明,乳酸菌素片生产菌的发酵上清液及药品成品—乳酸菌素粉和乳酸菌素片含有大量乳酸及一定量的丁酸（ 或异丁酸） 、乙酸、正反丁烯二酸、六碳脂肪酸、微量丙酸、琥珀酸及微量抗菌多肽。它们不仅对革兰氏阳性菌,而且对革兰氏阴性菌有不同程度抑制作用。乳酸菌素片医治某些肠胃病的机理正是发酵产生的这些有机酸等代谢产物及发酵后的乳酸菌死菌体及其碎片的作用。     

Development of a chromosome-plasmid balanced lethal system for Lactobacillus acidophilus with thyA gene as selective marker

A chromosome-plasmid balanced lethal gene delivery system for Lactobacillus acidophilus based on the thyA gene was developed. The selected L. acidophilus DOM La strain carries a mutated thyA gene and has an obligate requirement for thymidine. This strain can be used as a host for the constructed shuttle vector pFXL03, lacking antibiotic-resistant markers but having the wild-type thyA gene from L. casei which complements the thyA chromosomal mutation. The vector also contains the replicon region from plasmid pUC19 and that of the Lactococcus plasmid pWV01, which allows the transfer between Escherichia coli, L. casei and L. acidophilus. Eight unique restriction sites (i.e., PstI, HindIII, SphI, SalI, AccI, XbaI, KpnI and SacI) are available for cloning. After 40-time transfers in modified MRS medium, no plasmid loss was observed. The vector pFXL03 is potentially useful as a food-grade vaccine delivery system for L. acidophilus.     

嗜酸乳杆菌YIT2004株的抗生素敏感性及对万古霉素耐药机制

目的 研究嗜酸乳杆菌YIT2004株的抗生素敏感性及其耐药机制。方法 最低抑菌浓度法检测嗜酸乳杆菌YIT2004株对抗生素的敏感性;提取YIT2004株基因组,用特异性引物对耐药基因进行PCR扩增。结果 嗜酸乳杆菌YIT2004株对青霉素、氨苄西林、亚胺培南、庆大霉素、红霉素和克林霉素敏感,对万古霉素耐药;YIT2004株基因组中不存在vanA、vanB耐药基因,但存在高度相似的aad、ddl万古霉素耐药基因。该耐药为固有耐药,不具备传递性。结论 嗜酸乳杆菌YIT2004株对青霉素、氨苄西林、亚胺培南、庆大霉素、红霉素和克林霉素敏感,对万古霉素固有耐药且其耐药性不可传递。嗜酸乳杆菌YIT2004株的使用具有安全性。     

嗜酸乳杆菌NCFM粘附宿主后对其粘附相关基因表达的影响

摘要：【目的】益生菌粘附于肠道上皮细胞上是它的一种益生作用。本研究通过体内外实验,分析嗜酸乳杆菌NCFM对粘附相关基因的影响。【方法】利用GO (Gene Ontolog) 分类筛选Human Genome U133 Plus 2.0 Array基因表达谱芯片中的粘附相关基因,通过体外Caco-2细胞培养模型和体内小鼠粘附模型,采用Real-time PCR方法对粘附相关基因进行验证分析。【结果】经NCFM作用后,12个粘附相关基因呈上调表达。利用Real-time PCR验证,12个基因在体内和体外经嗜酸乳杆菌NCFM作用后亦均同样为上调表达,其中CCL2基因上调表达最为明显。【结论】经体内外研究表明,嗜酸乳杆菌NCFM粘附肠上皮细胞后能够引起宿主粘附相关基因出现特定表达变化,为今后深入揭示其粘附作用提供必要基础。     

嗜酸乳杆菌SR-1产类细菌素发酵条件及生物学特性的研究

本研究通过正交试验获得嗜酸乳杆菌sR-1分泌类细菌素的最适培养条件,即葡萄搪2％,大豆蛋白胨2．5％,酵母粉0．4％,血浆蛋白2．5％。并首次利用流加培养的方式,改进了类细菌素产生菌的发酵条件,抑菌直径从19mm提高到25mm,同时对类细菌素生物学特性进行了初步的探索。结果表明：嗜酸乳杆菌产生的类细菌素对多种蛋白酶不敏感,在低pH下能抑制革兰阴性、阳性的致病菌,在pH6．5下吸附菌体作用最强。     

嗜酸乳杆菌在不同pH条件下生长和存活情况的研究

以豆汁为基质,研究了嗜酸乳杆菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）在不同ＰＨ值的发酵基质和保存基质下的生长和存活情况。结果表明：嗜酸乳杆菌适宜生长的ＰＨ值在５．７左右,然而经过１０周保存实验,在较低ＰＨ值（４．５）培养的嗜酸乳杆菌存活率最高,在最适生长ＰＨ值（５．７）的菌活率却最低。将培养好的嗜酸乳杆菌置于不同ＰＨ值的豆汁中进行保存实验,偶然ＰＨ值对活菌的存活有一定的影响,但影响     

Adhesion and aggregation ability of probiotic strain Lactobacillus acidophilus M92

AIMS: To investigate aggregation and adhesiveness of Lactobacillus acidophilus M92 to porcine ileal epithelial cells in vitro, and the influence of cell surface proteins on autoaggregation and adhesiveness of this strain. METHODS AND RESULTS: Lactobacillus acidophilus M92 exhibits a strong autoaggregating phenotype and manifests a high degree of hydrophobicity determined by microbial adhesion to xylene. Aggregation and hydrophobicity were abolished upon exposure of the cells to pronase and pepsin. Sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis of cell surface proteins revealed the presence of potential surface layer (S-layer) proteins, approximated at 45 kDa, in L. acidophilus M92. The relationship between autoaggregation and adhesiveness to intestinal tissue was investigated by observing the adhesiveness of L. acidophilus M92 to porcine ileal epithelial cells. Removal of the S-layer proteins by extraction with 5 mol l-1 LiCl reduced autoaggregation and in vitro adhesion of this strain. CONCLUSIONS: These results demonstrate that there is relationship between autoaggregation and adhesiveness ability of L. acidophilus M92, mediated by proteinaceous components on the cell surface. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: This investigation has shown that L. acidophilus M92 has the ability to establish in the human gastrointestinal tract, which is an important determinant in the choice of probiotic strains.     

嗜酸乳杆菌固态发酵的初步研究

研究了嗜酸乳杆菌在 4种不同固态基质 (豆渣、麦麸、芋艿渣、纤维素 )中的生长情况 ,结果显示 :1)豆渣作为基质时嗜酸乳杆菌生长最佳 ,最高活菌数可达 1.6 45× 10 9cfu/g ,麦麸次之 ,达 3.2× 10 8cfu/g ,纤维素最差 ,仅为 2 .1× 10 7cfu/g ,并且豆渣固态培养基优于对照的 3种液体培养基 ;2 )豆渣的含水量以 75 %左右为宜 ;3)通过加入可中和所产酸量的CaCO3 ,并用缓冲液代替水配制培养基 ,结果发现用pH 6 .0的缓冲液配制的培养基 ,培养后活菌量可达 2 .12 4× 10 9cfu/g ,,比对照用自来水提高了 4.2倍 .     

嗜酸乳杆菌NCFM对Caco-2细胞中PTX3基因表达的影响

【目的】研究嗜酸乳杆菌NCFM对肠道上皮细胞中免疫与炎症介质因子PTX3表达的影响,并进一步揭示其调节机制。【方法】嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养0、2、4、8和12 h,提取细胞RNA,采用RealTime RT-PCR方法检测PTX3基因的表达。嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养0、0.5、1、2和4 h,提取细胞蛋白质,采用Western blot方法检测NF-κB的磷酸化水平;用NF-κB的特异性抑制剂PDTC预处理Caco-2细胞30 min,然后加入嗜酸乳杆菌NCFM作用2 h,提取细胞RNA,采用Real Time RT-PCR方法检测PTX3基因的表达。【结果】嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养后能诱导PTX3的表达,并且在共培养4 h的时候PTX3的表达量达到最大,然后逐渐下降;嗜酸乳杆菌NCFM能快速的诱导NF-κB的磷酸化,并且在加入其特异性抑制剂PDTC后,PTX3的表达显著下降。【结论】嗜酸乳杆菌NCFM作用于肠道上皮细胞后能够通过迅速激活NF-κB途径暂时性的调控PTX3的表达。     

奶牛阴道嗜酸乳杆菌生物学特性的研究

通过生长曲线、最适培养温度、最适培养方式、体外抑制奶牛子宫内膜炎常见病原菌的效果及其与奶牛子宫内膜上皮细胞黏附性等一系列实验,对1株分离自健康奶牛阴道的嗜酸乳杆菌进行生物学特性的研究。结果表明该菌最适培养温度为39℃,在偏于厌氧的环境下生长最佳,在培养18~20 h后收获最佳,对奶牛子宫内膜炎常见病原菌具有一定的抑制作用,并与奶牛子宫内膜上皮细胞具有一定的黏附作用。     

Identification of the replication region of Lactobacillus acidophilus plasmid pLA103

Abstract The structure of the region necessary for replication of the plasmid pLA103 from Lactobacillus acidophilus TK8912 has been characterized. Sequence analysis revealed that the replication region contained an open reading frame (OrfA) encoding a 282-amino acid peptide preceded by a 22-bp tandem repeat sequence region. The predicted OrfA protein showed homology to the replication protein of a plasmid from Pediococcus halophilus . The plasmid containing the repeat sequence region preceding OrfA was able to replicate in the Lactobacillus host when provided with OrfA in trans , suggesting that the repeat sequence region contains the origin sequence essential for the pLA103 replication.