木耳属种间杂交技术研究 Ⅰ.木耳菌丝原生质体的形成与再生

本文比较了不同酶液、渗透压稳定剂、酶解温室及菌丝培养基成份等因素对木耳属(Auricularia)中木耳(Auricularia auricula)和毛木耳(Auricularia polytricha)菌丝释放原生质体的作用及影响。用0.5%纤维素酶加0.5%蜗牛酶的混合酶液,以0.6M的MgSO_4为稳定剂,在34℃下可自两种菌丝体获得大量原生质体。对原生质体再生条件的研究表明,纤维二糖和菌丝体培养物浸提物对再生有明显促进作用,再生率达20%左右。本文还用VBL型荧光增白剂观察了菌丝脱壁以及原生质体细胞壁再生的过程。     

新月弯孢霉原生质体制备及再生条件的研究

以从自然界中筛选的新月弯孢霉（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａｌｕｎａｔａ）Ｄ－１为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究。将培养至１６ｈ的Ｄ－１菌丝体经ＤＴＴ溶液处理３０ｍｉｎ后,用溶壁酶和纤维素酶的混合酶液于３０℃下酶解４ｈ,原生质体释放量达到６．０×１０^６个／ｍＬ,原生质体再生率为８．３％。     

食用真菌核荧光染色技术的研究

本文报道荧光染料双苯并咪唑Hoechst 33258(bisbenzimlde),应用于香菇(Lentinusedodes)、平菇(pleurotus ostreatus)、金针菇 (Flammulina velutipes)、木耳(vAurtculariaaurieula),毛木耳(A．Polytricha)等5种食用菌菌丝体。担孢子、分生孢子核的荧光染色研究。配制染液的Mcllvaine缓冲液pH值、缓冲液含0.6M MgSO₄·7H₂O、菌丝生长期、孢予贮存期亦与染色效果密切相关。我们观察到,使用插片法,爬片2／5的菌丝体,pH7.0一7.4 Hoechst 33258染液,染色3分钟为菌丝体核荧光染色的最佳效果。新鲜的担孢子,分生孢子、使用pH 6.8含0.6 M MgSO₄·7 H₂O Hoechst 33258染色液染色3分钟比使用pH 6.8 Hoechst 33258的染液有明显增效作用。     

福堤霉素产生菌小单孢菌sp．SIPI 4812原生质体的再生及其产量的提高

以福堤霉素产生菌——小单孢菌(Micromonospora)sp．SIPl4812为材料进行的研究表明,0．05％以上甘氨酸能抑制它的孢子发芽,适当培养的菌丝体在含有消色肽酶和溶菌酶的溶菌系统中可分离原生质体达10⁹／ml以上,该菌的原生质体在营养成分相对贫乏的高氏一号合成培养基(补充高渗剂)上再生,再生频率可达5％以上。再生菌落的产量分布较自然分离分散,其中一株达到原株生产能力的280％。     

金龟子绿僵菌原生质体形成和再生的研究

用0.5%纤维素酶和0.5%蜗牛酶的混合酶液,以0.6mol/L KCl为渗透压稳定剂,pH6.5时,30℃处理菌龄为24小时的金龟子绿僵菌3-4小时,可从1克湿菌丝获得5×10⁷个以上的原生质体。原生质体在祭氏培养基上再生率仅为0.1—1.2%。但原生质体先在液体中培养再转移到固体平皿上,再生率可提高到8%。实验还观察和确证了原生质体的形成及其再生。     

苏云金芽孢杆菌Bt-3701与巨大芽孢杆菌Bm-107种间原生质体融合

具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌(B. thuringensis subsp kurstaki)Bt-3701与具有解磷活性的巨大芽孢杆菌(B. megaterium var. phosphaticum)Bm-107原生质体进行了融合。Bt-3701原生质体形成率为99.4％,再生率为21.4％;Bm-107原生质体形成率为97.5％,再生率为23.8％。以PEG为助融剂进行原生质体融合,得到22个融合子,融合率达6.03×10~(-3)。融合子在双抗培养基(DR-CNB)上连续传代12次,得到4个稳定的融合于生物测定表明,融合子既具有一定的杀虫活性又具有一定的解磷活性。     

粉被虫草N6-(2-羟乙基)腺苷高产菌株的原生质体诱变育种*

在粉被虫草(Cordyceps prainosa Petch)无性型——粉被马利娅霉(Mariannaeapruinosa Liang)原生质体形成和再生的前期研究基础上,报道了通过原生质体诱变培育高产N⁶-(2-羟乙基)腺苷菌株的研究结果。粉被马利娅霉Cp-14单孢子株经15W紫外灯照射后,获得一高产突变株MpM-135．经多代移植后,此突变株比出发菌株Cp-14的N⁶-(2-羟乙基)腺苷含量提高了14.8％。实验还表明,粉被虫草无性型菌丝提取物对枯草杆菌(Bacillussubtilis)抗紫外辐射效果与菌丝所含N⁶-(2-羟乙基)腺苷含量有正相关性。     

金线莲一促生真菌原生质体制备和再生研究

从药用植物内生真菌中筛选到对植物生长有显著促进作用的粘帚霉属的一种真菌（Ｇｌｉｏｃｌａｄｉｕｍｓｐ.简称Ｙ菌）,以它为出发菌株,进行原生质体制备与再生条件的研究。将培养４８ｈ的Ｙ菌菌丝体经过巯基乙醇处理３０ｍｉｎ,并用１％的纤维素酶和溶壁酶混合液于２８℃酶解３ｈ,原生质体得率可达２．１４Ｘ１０^７个／ｍＬ,在含０.５Ｍ的甘露醇为稳渗剂的再生培养基上,其原生质体的再生率可达３．８６ｘ１０^４。     

黄绿木霉原生质体诱变育种研究*

利用正交实验方法研究了影响黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)原生质体形成的因素,并利用紫外线、硫酸二乙酯、氯化锂几种因素复合诱变原生质体筛选高产纤维素酶菌株。影响原生质体形成的因子顺序是酶系统>菌龄>酶解时间>酶解温度,原生质体形成的最佳条件是0.5%蜗牛酶+0.5%溶菌酶+1.0%纤维素酶,菌龄为18h,酶解时间为3.0h,酶解温度为32℃;在该条件下原生质体产量可达到4.25×10⁶个mL^-1。Ca^{2+相似文献}   

扩展青霉原生质体的形成、再生及其影响因素

本文比较了不同酶解温度、酶解pH、菌体浓度、过滤介质、氨基酸和菌体预处理方法等因素对扩展青霉(Penicllium expansun)原生质体形成再生的影响,研究了原生质体对紫外光的敏感性以及贮存和再生活性。采用0.5％纤维素酶加0.5％蜗牛酶,对用振荡培养23小时的菌丝体经30℃保温1小时酶解,可以得到4.7×10~5/ml的原生质体悬液,原生质体再生率可达30％左右。原生质体的平均体积为207μ~3。     

兽疫链球菌原生质体激光诱变及高产菌株筛选*

探索了透明质酸 (Hyaluronicacid)产生菌—兽疫链球菌 (Streptococcuszooepidemicus)原生质体制备与再生的最佳条件。研究了酶浓度、酶解时间、高渗液的选择、预处理及高渗预培养等因素的影响。确定了最佳条件为 :经 12%甘氨酸预处理及高渗预培养共同作用2h后 ,用 5 0U mL溶菌酶 ,在NaCl高渗体系中 ,于 39℃作用 60min。在此条件下 ,原生质体形成率可达 94.6% ,再生率可达18.5 %。用不同功率的He Ne激光照射不同时间诱变原生质     

棒状杆菌原生质体的形成、再生以及融合的初步探讨

Corynebacterium 属中的一些种是生产氨基酸的重要菌株。它们对蛋清I容菌酶和其他几种酶均不敏感。作者用0.4—0.8u／ml青霉素G处理对数期菌令菌体,可明显增加对蛋清溶菌酶的敏感性。继而用0.5—1.0mg／ml的蛋清溶菌酶,于37℃,12—15小时保温,渗透压敏感细胞可达99％以上。在丁二酸钠高渗完全培养平皿上,原生质体再生率可达20％。C. pekinenseAS 1.563与C. crenutum 82原生质体融合率为3×10-4 每对原生质体。融合菌株不稳定呈现出不同程度的分离现象。对融合菌株发酵产物——氨基酸进行了纸层析,70％的融合株同时产生两亲株所产的氨基酸,10％菌株不产生两亲株所产的氨基酸。通过光学显微镜和电镜技术,观察了原生质体的形成、再生和原生质体聚集现象。     

黄色直丝链霉菌新种

34-773链霉菌对产朊圆酵母(Torulopsis utilis)细胞及稻瘟菌(Piricularia oryzae)菌丝有溶菌作用,对形态、培养特征、生理生化特性等方面的研究指出,34—773链霉菌的孢子丝直形,孢子长杆状,表面光滑;气生菌丝体先蚌肉白,后豆汁黄;基内菌丝体淡鹅掌黄、淡雅梨黄;无可溶性色素。经鉴定和国内、外文献中报道的近似种比较定为新种——黄色直丝链霉菌(Streptomyces flavorectus n. sp．)。     

黑曲霉原生质体的形成、分离与再生的研究补*

本文研究了从黑曲霉中获得原生质体的各种条件（例如渗透压稳定剂、温度、菌龄、培养基的成分、 酶索统等）。结果表明,采用0.5lo蜗牛酶和1％ 纤维素酶的混合溶液酶解菌丝体,可获得大最的原生 质体。该原生质体用。．8mol/L N“ 作为渗透压稳定剂在再生培养基上再生率为50 %.     

复合诱变原生质体选育耐热碱性蛋白酶高产菌

以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)53号为原始菌株,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行复合诱变,对大量再生突变株进行筛选,最终获得了高产、稳定、耐热的碱性蛋白酶产生菌53-G38-6,产酶活力由1104U/ml提高到22080U/ml。适宜的发酵条件:培养基(％)胰蛋白胨1,酵母膏0.5,玉米粉5,Na_2HP0_4·12H_20 0.4,KH_2P0_4 0.03,Na_2CO_3 0.1,自然pH。42℃旋转培养44～48h,得到的蛋白酶热稳定性强,60℃处理1h剩余酶活55％。酶反应最适条件:62℃,pH10.0,在pH9～10.5范围内稳定。     

血清单胺氧化酶遗传特性的初步研究

本文研究了从黑曲霉中获得原生质体的各种条件（例如渗透压稳定剂、温度、菌龄、培养基的成分、 酶索统等）。结果表明，采用0.5lo蜗牛酶和1％ 纤维素酶的混合溶液酶解菌丝体，可获得大最的原生 质体。该原生质体用。．8mol/L N“ 作为渗透压稳定剂在再生培养基上再生率为50 %.     

松茸菌丝原生质体形成与再生条件的研究

采用多因素实验正交优选法比较不同酶、渗透压稳定剂、菌丝生理状况、菌丝培养基、预处理液和酶解时间等因素对松茸原生质体形成的影响和再生培养基、明胶、酪蛋白对松茸原生质体再生的影响.以0.6MMgSO4作为渗透压稳定剂,2-硫基苏糖醇为预处理液,用2%蜗牛酶在30℃酶解6h,每克菌丝可以得到1×106个原生质体.再生最优条件0.6MMgSO4,PDY再生培养基,2.5%明胶,松茸菌丝再生率最高4.97%.     

头孢菌素C产生菌产黄顶孢霉菌原生质体的分离和再生

用1％拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningii Rifui产生的纤维素酶,不颓硫醇类化合物预处理,可直接裂解产黄顶孢霉菌菌丝体,得到大量原生质体。不同批号纤维素酶活力相差很大,需比较采用。产黄顶孢霉菌菌丝体用玻璃纸平板培养法培养,培养时间为40—48h。纯化后原生质体悬浮液用渗透压处理后分离计数,可计算非原生质体形成的菌落数,从而统计再生频率约为0．7—2.5％。在原生质体再生过程中,观察到不同于孢子再生的生长延缓现象,原生质体再生菌株仍保留亲株的菌落形态及合成头孢菌素C的生产能力。     

斜卧青霉原生质体制备和再生的研究

研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件：菌丝体培养12h,用1％溶壁酶＋1％纤维素酶＋1％蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂,酶解时间为1．5h。在此条件下原生质体的形成量达到5．3×10^5个／mL,再生率为19．4％。     

长白山地区真菌降解木质素的研究

采用Bavendamn氏反应,漆酶(Laccase)和α-酪氨酸酶反应(α-tyrosinase reacrion)呼吸率,紫外分光光度法和扫描电镜等方法,对来自长白山地区的五株真菌进行了定性、定量测定。结果表明,长白山地区存在木质素分解菌,它们分属于曲霉属(Aspergillus)、木霉属(Trtchoderma)及毛霉属(Mucor)。它们均能不同程度地降解小叶杨(Populus simonti)、龙爪柳(Salix matsydana F. fortuosa)、家榆(Ulmus pumila)、山毛桃(Persian davidiana)的碱性水溶木质素,游离木质素及细胞回复木质素。降解主要发生在第8天以后,在第12-14天时趋于稳定,其木质素的剩余量在44—74％,它们参与木质素降解的酶不同于已报道过的白腐菌的酶。