甘丙肽及其受体在中枢神经系统疾病中的作用

中枢神经系统疾病因其发病机制复杂而难以找到药物作用的有效靶点。甘丙肽(galanin, GAL)因其广泛的中枢神经系统分布并与多种神经系统疾病密切相关而进入人们的视线。现已证明,GAL与三种G蛋白偶联受体(GALR1-3)结合后,通过抑制cAMP/PKA(GALR1、GALR3)和激活磷脂酶C(GALR2)等信号通路调节众多生理和病理过程。本文概述了近年来GAL及其受体在中枢神经系统疾病中的作用的研究进展,旨在为理解这些疾病的发病机制以及靶向药物的研发提供新的指导。     

甘丙肽受体的研究进展

目前已经克隆了3种甘丙肽受体（GalR1, GalR2, GalR3）,它们都是与G蛋白相偶联的受体.3种甘丙肽受体的氨基酸序列、药理学特性以及第二信使系统各不相同.GalR1/3受体可以抑制腺苷酸环化酶并可以激活钾通道,GalR2受体可以激活磷脂酶C并增加胞内钙离子浓度.用RNA印迹、反转录PCR以及原位杂交等技术对上述3种甘丙肽受体在人、大鼠和小鼠中的分布进行了研究,发现它们具有不同的分布特征,提示不同的甘丙肽受体可能参与不同的生理过程.     

甘丙肽对抑郁症状的调控作用及其机制的研究进展

甘丙肽(galanin, GAL)作为治疗抑郁症的可能靶点被关注已久,但目前仍未有广泛应用的GAL类抗抑郁药物。GAL可与3种G蛋白偶联受体(GalR1~3)结合,GalR1和GalR3介导促进抑郁的作用,GalR2介导抗抑郁的作用。GAL的N端有生物活性的片段GAL (1-15),通过其受体GalR1-GalR2异聚体(heteromer),介导比GAL更强的调节抑郁效应。GAL (1-15)还可以通过GalR1-GalR2异聚体与5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)相互作用形成GalR1-GalR2-5-HT1AR异聚体的方式,加强5-HT1AR激动剂的抗抑郁效果。此外,GAL及其受体还与去甲肾上腺素、神经肽Y、脑源性神经营养因子、多巴胺等递质或因子交互作用调节抑郁。本文梳理GAL及其受体对抑郁的调节作用及其可能机制,并对以GAL及其受体为靶点开发的药物应用于临床治疗抑郁症的可能性进行探讨。     

甘丙肽及其受体在嗅成鞘细胞中的表达及对细胞增殖的影响

本实验从新生大鼠嗅球中分离出嗅成鞘细胞,进行体外培养。运用RT—PCR方法检测甘丙肽及其受体在体外培养的嗅成鞘细胞中的表达;运用MTT法检测甘丙肽及其受体激动剂、拮抗剂对嗅成鞘细胞增殖的影响。结果显示：嗅成鞘细胞表达甘丙肽(GAL)及其受体GalR2,而不表达其他两种受体GalRl和GalR3;甘丙肽及两种受体激动剂GALl-11和GAL2-11能够明显地抑制体外培养的嗅成鞘细胞的增殖,这一效应可被非特异性甘丙肽受体拮抗剂M35所阻断。     

甘丙肽2型受体在HEK293A细胞中的同源二聚化研究

G蛋白偶联受体二聚化在受体的转运和信号转导中起着重要的调节作用.为了验证甘丙肽2型受体(GalR2)是否形成同源二聚体,本实验分别构建了N端带FLAG和HA标签的GalR2融合蛋白,并转染到HEK293A细胞中.Western blot发现,除了相当于GalR2分子量的位置有条带之外,在大约2倍于GalR2分子量的位置...     

综述与专论：甘丙肽对抑郁症状的调控作用及其机制的研究进展

甘丙肽(galanin, GAL)作为治疗抑郁症的可能靶点被关注已久,但目前仍未有广泛应用的GAL类抗抑郁药物。GAL可与3种G蛋白偶联受体(GalR1～3)结合,GalR1和GalR3介导促进抑郁的作用,GalR2介导抗抑郁的作用。GAL的N端有生物活性的片段GAL (1-15),通过其受体GalR1-GalR2异聚体(heteromer),介导比GAL更强的调节抑郁效应。GAL (1-15)还可以通过GalR1-GalR2异聚体与5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)相互作用形成GalR1-GalR2-5-HT1AR异聚体的方式,加强5-HT1AR激动剂的抗抑郁效果。此外,GAL及其受体还与去甲肾上腺素、神经肽Y、脑源性神经营养因子、多巴胺等递质或因子交互作用调节抑郁。本文梳理GAL及其受体对抑郁的调节作用及其可能机制,并对以GAL及其受体为靶点开发的药物应用于临床治疗抑郁症的可能性进行探讨。     

小鼠甘丙肽1型受体在HEK293A细胞中的表达和内化

目的:克隆小鼠甘丙肽1型受体( mGalR1)基因,构建其真核表达载体,并观察该基因在HEK293A细胞中的表达和内化.方法:应用RT - PCR方法,以小鼠下丘脑RNA为模板,扩增获得甘丙肽Ⅰ型受体(mGalR1)基因并定向克隆到pEGFP - N1真核表达载体;mGalR1 - pEGFP表达载体瞬时转染HEK293A细胞,利用激光共聚焦显微技术观察mGalR1在给予甘丙肽(10-7mol/L)0、5、10、15min刺激时的内化情况.结果:克隆得到正确的mGalR1基因全长序列,其cDNA为1047bp,共编码348个氨基酸;共聚焦显微镜结果表明mGalR1主要在膜上表达,经甘丙肽刺激5～15min后受体下膜进入胞浆.结论:成功构建真核表达载体mGalR1 - pEGFP并在HEK293A中表达;在甘丙肽刺激下小鼠甘丙肽1型受体存在内化现象.     

甘丙肽及其受体在嗅成鞘细胞中的表达及对细胞增殖的影响

本实验从新生大鼠嗅球中分离出嗅成鞘细胞,进行体外培养。运用RT-PCR方法检测甘丙肽及其受体在体外培养的嗅成鞘细胞中的表达;运用MTT法检测甘丙肽及其受体激动剂、拮抗剂对嗅成鞘细胞增殖的影响。结果显示:嗅成鞘细胞表达甘丙肽(GAL)及其受体GalR2,而不表达其他两种受体GalR1和GalR3;甘西肽及两种受体激动剂GAL1-11和GAL2-11能够明显地抑制体外培养的嗅成鞘细胞的增殖,这一效应可被非特异性甘丙肽受体拮抗剂M35所阻断。     

大鼠基底核心房肽mRNA的表达——原位杂交研究

采用原位杂交技术,研究大鼠基底核团细胞内是否存在ANPmRNA的基因表达,结果发现在尾壳核细胞内存在阳性反应产物,而苍白珠细胞内示见阳性反应。说明在尾壳核内存在ANP的基因表达及ANP的合成。实验结果为尾壳核产生分泌ANP提供了形态学依据。     

阿片受体样受体ORL1基因在大鼠脑内的表达

我们采用地主辛标记的寡聚核苷酸探针和原位杂产技术研究了新发现的阿片受体样受体ＯＲＬ１基因在正常大鼠脑仙的表达和分布。发现ＯＲＬ１基因在大鼠脑内广泛表达。尤其在大脑皮层、丘脑、下丘脑、杏仁核、海马、隔核、缰核、导水管周围灰质、中缝核群及蓝斑等区域。提示ＯＲＬ１除参与痛觉调制外,还可能参与脑内多项生理功能的调控。     

Galanin(甘丙肽)及其受体在成年小鼠脑内神经新生部位的表达及对神经干细胞分化的作用

Galanin(甘丙肽)是一种在中枢神经系统中广泛分布的神经肽,功能涉及摄食、睡眠和觉醒、疼痛、认知和生殖等各方面.我们在成年小鼠脑的神经细胞新生部位如SVZ,DG和RMS发现有galanin及其受体的mRNA表达,同时在SVZ来源的神经干细胞中也检测到有galanin及其受体的表达.细胞实验中,在分化后特定时间段GALKO小鼠来源的神经干细胞产生神经突的细胞比例及神经突的长度明显小于正常小鼠来源的神经干细胞.而加入galanin或受体激动剂GAL2-11后.该神经干细胞则在产生神经突的细胞比例及神经突的长度都明显上升.受体拮抗剂M35的添加可减弱galanin或GAL2-11所产生的作用.这些结果表明galanin及其受体与神经干细胞的分化及神经突的生长有着密切的联系,并可能参与了神经系统的发育.     

人慢性胃炎胃粘膜内胃泌素及其mRNA的表达和意义

目的　探讨慢性胃炎胃粘膜对细胞内胃泌素 (G)及其mRNA的表达和意义。方法　标本均来自活检的胃窦部粘膜组织 ,用免疫细胞化学和原位杂交技术。结果　对照组G细胞及GmRNA阳性细胞数 ,与浅表性胃炎组比较无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而与萎缩性胃炎组比较则有显著性差异 (P <0 0 1) ,不论对照组还是胃炎组的G细胞数量与GmRNA阳性细胞均有平行关系。结论　证明浅表性和萎缩性胃炎的胃泌素基因的转录和蛋白表达功能保存完好 ,因此检测G细胞的数量及GmRNA不仅可以帮助了解胃炎的萎缩程度 ,而且能判断临床疗效。     

慢性缺氧对大鼠肺内皮素表达的影响

本文以ＡＢＣ法和原位杂交技术,观察了慢性缺氧时大鼠肺组织内内皮素－１（ＥＴ－１）的表达情况,结果发现：①正常肺血管内皮细胞有少许ＥＴ－１样阳性染色物质呈现。②缺氧ＩＷ后,肺内ＥＴ－１含量增加,主要位于肺血管内皮细胞和支气管粘膜上皮细胞。③缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ１阳性免疫物质进一步增加,于肺泡细胞内也见到阳性染色。④缺氧１Ｗ后肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达增加,缺氧２Ｗ和３Ｗ后,ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达进一步加强。提示缺氧可刺激肺内ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达,慢性缺氧时肺内ＥＴ－１持续分泌增加,这可能是缺氧性肺动脉高压发生的重要因素之一。     

微小RNA在前列腺癌组织中的表达及意义

目的研究5种微小RNA（microRNA）在前列腺癌组织中的表达情况及其临床意义,并探讨它们在前列腺癌诊断中的潜在应用价值。方法应用核酸分子原位杂交（IsH）的方法,结合组织芯片（TMA）技术检测38例良性前列腺增生（BPH）,52例前列腺癌（PCa）及2例正常前列腺组织中5种miRNAs的表达情况。结果（1）miR-96、miR-183、miR-139在PCa中的表达率分别为67．31％（35／52）,71．15％（37／52）,67．31％（3s／52）,分别与它们在BPH中的表达率44．74％（17／38）,47．37％（18／38）,39．47％（15／38）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;miR-145在PCa中的表达率为21．15％（11／52）,较BPH的63．16％（24／38）低（P〈o．01）;miR-let-7d在PCa中的表达率为25．00％（13／52）,较BPH的34．21％（13／38）无显著性差异（P〉0．05）。（2）5种miRNAs的表达与前列腺癌患者的年龄及血清PSA水平均无明显相关性（P〉0．05）;5种miRNAs表达与肿瘤的G1eason评分均相关（P〈0．01）;miR-96、miR-let-7d及miR-139的表达与肿瘤的临床分期有关（P〈0．01）,miR-145、miR-183的表达则与其无明显相关性（P〉0．05）;miR-96的表达与肿瘤累及前列腺的叶数相关（P〈0．01）,而其余四种miRNAs的表达则与其无明显相关性（P〉0．05）。结论miRNAs与前列腺癌的发生有关,并可能作为前列腺癌早期诊断及预后评估的重要生物标记物。     

甘丙肽提高离体海马神经细胞在过氧化氢损伤中的存活率

实验运用离体培养的大鼠海马神经细胞,观察了过氧化氢对海马神经细胞的损伤效应及甘丙肽(GAL)对氧化应激过程中海马神经细胞的保护作用。结果显示,过氧化氢对海马神经细胞具有明显的剂量相关毒性效应。甘丙肽以及甘丙肽非特异性受体激动剂GAL1-11和甘丙肽受体2 (GalR-2)特异性激动剂GAL2-11能显著减少海马神经细胞在氧化应激过程中的损伤反应,这种效应可被GAL非特异性受体阻断剂M35阻断。实验提示GAL对氧化应激导致的海马神经细胞损伤具有保护作用,这种作用很有可能是由GalR-2受体介导。     

大鼠前列腺上皮细胞角蛋白8mRNA表达调节的定位研究

本文应用反义RNA探针原位杂交法,研究雄激素对大鼠腹侧前列腺(VP)上皮细胞角蛋白(CK)8 mRNA表达的影响。发现1.在任何VP组织切片中,CK 8探针专一、大量定位于VP腺上皮细胞中,CK 8 mRNA是前列腺上皮细胞特异而灵敏的标志。2.去睾大鼠VP CK 8 mRNA染色增强,提示CK 8mRNA有过度表达,注射雄激素又可抑制其过度表达。3.与已知受雄激素抑制性基因不同,即使大鼠VP完全萎缩之后达2个月之久,其存留腺上皮细胞CK 8 mRNA表达仍持续增高。4.前列腺发育早期,迅速增殖的幼稚腺上皮细胞高度表达CK 8 mRNA,以后随着体内雄激素水平升高,VP上皮CK 8 mRNA表达下降,分布转移。以上结果进一步支持前列腺CK 8基因是新的一类受雄激素抑制性基因的推测,同时表明前列腺CK 8基因的表达与前列腺干细胞的增殖分化有密切联系,CK 8 mRNA高度表达是前列腺干细胞一个重要特征。     

基质金属蛋白酶-9及其抑制剂mRNA在吸烟大鼠肺组织中的表达

目的 研究吸烟大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)基因的表达,探讨其在细胞外基质重塑中的作用。方法 建立吸烟大鼠模型,随机分为对照组和吸烟1、2、3、4、5及6月组(每组10只),用原位杂交技术检测肺组织和肺泡巨噬细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达,用免疫组织化学技术观察Ⅳ型胶原在肺内的表达。结果 吸烟组肺组织和肺泡巨噬细胞MMP-9 mRNA的表达逐渐上升,至吸烟6月时均达高峰;而TIMP-1 mRNA的表达渐上升,至吸烟3～4月时达高峰,后逐步下降;肺组织Ⅳ型胶原的表达在吸烟3月时达高峰,然后渐降。结论 MMP-9／TIMP-1的动态平衡在吸烟大鼠肺气肿模型肺组织的细胞外基质重塑中有重要作用。     

食管鳞癌VEGF-C mRNA和CD31表达及其意义

研究食管鳞癌血管内皮生长因子C(VEGF-C)mRNA和CD 31的表达,探讨VEGF-C促食管鳞癌淋巴转移的作用。应用原位杂交法检测43例食管鳞癌组织VEGF-C mRNA表达,CD 31免疫组织化学染色标记血管、淋巴管内皮细胞,并计数肿瘤组织的微血管密度(MVD)。结果显示,食管鳞癌组织VEGF-C mRNA阳性19例(41.86%),MVD平均为76.36±20.30/mm~2。VEGF-C mRNA表达与食管鳞癌淋巴结转移、TNM分期和肿瘤浸润深度相关(p<0.05或p<0.01);而与肿瘤组织学分级无关(p>0.05)。MVD与食管鳞癌淋巴结转移、TNM分期的相关性有统计学意义(p<0.05);而与肿瘤浸润深度和组织学分级的相关性则无统计学意义(p>0.05)。VEGF-C mRNA表达阳性者MVD高于表达阴性者,两者比较具有显著性差异(p<0.05)。研究提示VEGF-C促进了肿瘤诱导的淋巴管新生和血管新生,在食管鳞癌的淋巴转移中起重要作用。     

缺氧和DDPH对人胚肺成纤维细胞前胶原mRNA表达的影响

用核酸原位杂交和图像分析等方法,观察直接缺氧（Ｈ）和缺氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）对人胚肺成纤维细胞（ＫＭＢ１７）的前胶原ｐｒｏα１（Ⅰ）,ｐｒｏα１（Ⅲ）ｍＲＮＡ表达和抗高血压药１－（２,６－二甲基苯氧基）－２－（３,４－二甲氧基苯乙氨基）丙烷盐酸盐（ＤＤＰＨ）对此过程的影响。结果发现,Ｈ和ＨＥＣＣＭ均可使ＫＭＢ１７的两型前胶原ｍＲＮＡ表达量增高,明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。ＤＤＰＨ对ＨＥＣＣＭ组细胞的Ⅰ,Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达增高均有显著的抑制作用（抑制率分别为－４３．９７％和－５６．２２％）,而对Ｈ组仅抑制ｐｒｏα１（Ⅰ）前胶原ｍＲＮＡ的过量表达（－５３．５８％）。提示缺氧可直接或通过肺动脉内皮细胞的介导,促进人胚肺成纤维细胞的Ⅰ、Ⅲ两型前胶原ｍＲＮＡ表达,ＤＤＰＨ在基因转录水平上对此过程有抑制作用