用土壤杆菌(Agrobacterium)Ti质粒转化单子叶植物

<正> 迄今,植物直接遗传操作方面所取得的进展主要在双子叶植物,而单子叶植物包括主要的谷类作物尚不是容易进行遗传工程的对象。然而,最近的两篇论文发表后,看来,单子叶植物有可能在某一天同样会成为遗传工程的研究课题。利用Ti质粒和Ri质粒尤其是土壤杆菌的Ti质粒可以将外来基因插入对土壤杆菌易感的     

根癌农杆菌转化单子叶植物研究概况

单子叶植物过去被人们公认公以为难以用根癌农杆菌转化,但最近有了新的进展。本文对用根癌农杆菌在转比单子叶植物方面的研究历史、现状、所取得的成功以及酚类化合物对根癌农杆菌介导的转化的促进作用做了较为详细的综述。     

植物基因工程中Ti质粒的研究与应用进展

Ti质粒是双子叶植物转化的普通而有效的载体,近年来又广泛应用于单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、小麦等。该方法以转基因低拷贝、遗传稳定及能够转化大片段的DNA等优点,又受到人们的极大关注。本文对Ti质粒在植物基因工程转化的机理、方法,及应用等方面的新进展和方向作一评述,并提出有价值的研究方向。     

Ti质粒基因在单子叶植物石蒜和金针菜中的表达

本文报道了用胭脂碱型致瘤农杆菌感染单子叶植物石蒜和金针菜的实验结果。石蒜和金针菜的花茎幼嫩部位被致瘤农杆菌A_(208)感染后,一个月内形成小瘤。纸电泳结果表明,所有瘤组织都含有胭脂碱,证明石蒜和金针菜的细胞可被转化并表达nos基因;本文讨论了致瘤农杆菌转化单子叶植物的范围和筛选方法。     

农杆菌介导的单子叶植物转基因研究进展

农杆菌介导法是目前应用最为广泛的植物转基因方法。简单介绍了农杆菌遗传转化的原理,并从农杆菌携带外源基因进入植物的角度对农杆菌转化单子叶植物的关键和相关影响因素进行了论述,同时对近年来利用农杆菌介导法转化的单子叶植物的成功范例做了总结。     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段, 其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段,其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述。     

单子叶植物表达载体的构建及农杆菌介导的玉米遗传转化的研究

构建了单子叶植物表达载体pCUA-tr-cat-als,其中含有豌豆过氧化氢酶基因cat和突变的乙酰乳酸合成酶基因als,分别由玉米ubi启动子和花椰菜花叶病毒35S启动子启动。以玉米昌7-2种子苗的茎尖分生组织为受体,用农杆菌介导法首次将目的基因定向转入玉米叶绿体中。以als基因作为选择标记,以氯磺隆为选择剂进行筛选获得一定数量的转基因植株。经PCR分析,可初步确定目的基因已经整合到玉米基因组中。     

农杆菌介导单子叶植物遗传转化问题与对策

尽管十几年来农杆菌介导的单子叶植物遗传转化研究取得了较大的进步, 但仍存在着基因型限制、转化率不高和外源基因表达活性低等问题。本文综述了近几年来此项研究在感受态细胞选择与调节、预培养及共培养体系优化、转化子的筛选及外源基因表达调控等方面的主要进展。     

两种质粒中gus基因在植物细胞和根癌农杆菌中的表达特性研究

以含有基因转化操作过程中常用的两种质粒载体pBI121和pCAMBIA2301的根癌农杆菌EHA105为材料,分别转化甜瓜子叶,应用组织化学方法检测了甜瓜子叶和子叶培养后的愈伤组织及根癌农杆菌菌液的瞬时转化效果,研究了两种不同的质粒载体上所含的gus基因在根癌农杆菌中和植物细胞中的表达特性.结果表明,不同质粒载体上所含的gus基因的表达特性不同,质粒载体pBI121上所含的gus基因既能在植物细胞中能表达,也能在根癌农杆菌细胞中表达,而质粒载体pCAMBIA2301上所含的gus基因能在植物细胞中表达,但是不能在根癌农杆菌细胞中表达.     

Ri质粒基因转化植物细胞的机理

发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)含有一个约250Kb的大质粒,与Ti质粒转化植物细胞产生冠瘿瘤(crowngall)相似,它也可以侵染双子叶植物受伤部位的细胞并产生大量不定根(所谓发根或毛状根,(hairyroot),因此,这个大质粒被称为Ri质粒(根诱导质粒,Root-inducingplasmid)。     

植物的光调节基因在受体细胞中的表达-植物遗传工程的一个新进展

在植物分子遗传学和遗传工程研究中,根癌农杆菌的Ti质粒是个重要的载体。实验已经证明,它可将外源的功能基因插入到植物细胞并整合到植物细胞核的基因组中。在某些情况下,这些细胞再生成植株,而插入的基因可以通过减数分裂转给种子遗传下来。     

Ti质粒T区基因转移与整合分子机制的研究进展

由根癌农杆菌Ti质粒介导的转化系统现已发展成为向许多植物转移外源基因的有效途径。然而,长期以来,人们对Ti质粒T区基因（即T-DNA）转移、特别是整合的具体细节一直不甚了解。随着对Ti质粒分子生物学及其介导转化过程研究的广泛展开与不断深入,这一天更多然的基因转移与整合过程近几年来逐步被人们所揭示和认识。     

拟南芥植物硫肽激素基因在玫瑰茄细胞中的表达

利用玫瑰茄愈伤组织遗传转化体系,通过根癌农杆菌将AtPSK2基因导入玫瑰茄细胞,并获得了功能性表达。研究结果表明,所获得的转基因玫瑰茄细胞系的临界植板细胞密度和临界起始细胞密度分别降低了60%和50%,悬浮细胞培养周期由16d缩短到12d,转化愈伤组织的比生长速率比对照提高了75%,转基因玫瑰茄细胞和愈伤组织中的花黄素含量与对照相比没有发生明显变化。本研究所获得的转基因玫瑰茄细胞系不仅为花青苷和花黄素等次生代谢产物高产细胞株的选育提供出发材料,而且为PSK-α作用机理的深入研究提供一个有用的模型。     

影响农杆菌转化效率的植物因子H2A1基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建

拟南芥组蛋白H2A1是影响农杆菌T-DNA整合到宿主基因组的关键因素之一。与其它H2A组蛋白一样,它含有1个保守的H2A结构域。本研究利用PCP技术从拟南芥中成功扩增到H2A1基因组序列的全长。产物纯化后克隆到pBI121(Kmr),从而构建了H2A1的植物表达载体pBI121-H2A1。PCR和DNA测序证实载体构建成功。最后用电击法将该重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404菌株中形成工程菌。此表达载体的构建为进一步研究H2A1的功能和提高外源基因在植物中稳定表达水平奠定了基础。     

根癌农杆菌质粒:植物遗传工程可能的载体

一、冠瘿肿瘤 植物的冠瘿肿瘤是由根癌农杆菌所引起的(Smith和Townsend,1907)。许多双子叶植物,以及不少单子叶植物,在受到外损以后,经过病菌的感染,就可以诱导产生具有不能自我限制生长特性的冠瘿肿瘤。农杆菌在落地生根属(Kalanchoe)植物茎上,诱导产生冠瘿肿瘤的整个过程,不需要20小时就可以完成。     

农杆菌介导的植物转化及其将来在植物生物学中的应用

本综述意在于对农杆菌介导的植物转化及除此外的农杆菌系统在其它许多方面的应用情况作一概述。由于最近已有几篇综述就转化载体及T-DNA转移的机制进行了详细的论述,故我们对这些问题不作详细的讨论。我们对农杆菌转化的某些基本性质进行讨论,目的是为了更合理地设计植物转化系统。     

基因操作原理(续)——第九章 在植物细胞中克隆DNA的可能载体

在原核生物细胞中,克隆外源DNA的技术比较简单,因此,目前在全世界范围内,已有数百家的实验室都能常规地进行这类实验操作。而在真核生物细胞中,克隆外源DNA的工作尚处于相当初步的阶段,这主要是由于缺乏适当的载体。当前唯一可用作真核细胞载体的是猴肾病毒SV40。关于使用SV40作载体的情况,在前一章中已经作过讨论。     

棉花曲叶病毒启动子在根癌土壤杆菌中的表达活性

棉花曲叶病毒（CLCuV)是一种单链DNA病毒,属于双生病毒亚组Ⅲ,检测了双生病毒双向启动子在根癌土壤杆菌（Agrobacterium turnefaciens(Smith et Townsend) Conn()LBA4404中的活性,研究发现在根癌土壤杆菌中CLCuV双向启动子的互补链启动子活性高于病毒链启动子,其在土壤杆菌中驱动的GUS活性为CaMV 35S启动子驱动的GUS活性的2倍,同时,通过对一系列CLCuV双向启动子的互补链5′端缺失体在土壤杆菌中的活性分析表明－287bp上游可能存在一负调控元件,该元件的缺失可使启动子活性达全长启动子的4倍之多,还讨论了CLCuV互补链启动子所亿的其他顺式元件的功能。