山西市场动物饲料中转基因成分的检测

为了评估转基因玉米和大豆在山西动物饲料市场的占有率和标识情况,采用改良十六烷基三甲基溴化铵法 (Hexadecyltrimethy ammonium bromide, CTAB) 提取山西市场抽取的30份鸡和猪饲料,通过定性PCR打包筛查,对检测阳性结果打包饲料拆包并检测CaMV 35S启动子、NOS终止子、玉米内标zSSIIb、大豆内标Lectin和CryIA (b)基因。同时检测玉米和大豆转化体事件MON810和GTS40-3-2。结果表明,83.3%的饲料含有转基因成分。所抽取的玉米、大豆、猪饲料和鸡饲料转基因成分阳性率分别为6.67%、100%、93.3%和73.3%。实时荧光定量PCR检测结果与定性PCR一致。结果提示,鸡和猪饲料中转基因成分在山西市场的占有率较高。     

转基因大豆豆粕外源基因和蛋白在SD大鼠体内消化吸收分析

为了评估转基因抗草甘膦除草剂大豆的食用安全性,以20%的比例将转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS40-3-2和其亲本非转基因大豆A5403豆粕分别添加到基础饲料中喂养两代Sprague-Dawley(SD)大鼠,采用定性、定量PCR和ELISA方法检测转基因大豆成分相关基因和蛋白在长期饲喂的大鼠体内代谢残留状况。结果表明,大鼠喂养转基因大豆豆粕后,除了大鼠肠粪和盲肠内容物检测到有转基因成分的残留,肠道菌群和实质脏器均未发现相关基因和蛋白。结果提示,长期饲喂转基因抗草甘膦除草剂大豆GTS40-3-2与亲本A5403大豆豆粕对SD大鼠具有同样的食用安全性。     

加工产品中转基因玉米Bt11成分实时荧光PCR定量(性)检测

实验在玉米自身基因和外源基因的边界序列之间设计了具有品种和品系特异性的引物和探针 ,并以实时荧光PCR技术 ,建立了加工产品中转基因玉米Bt1 1成分品系鉴定检测和定量检测的方法。实验对加热条件和时间对检测转基因成分的影响作了探讨 ,并检测了部分市售食品和饲料。检测结果发现 ,加热时间温度越高、时间越长 ,对转基因成分定量检测的影响越大 ;在所检测的样品中可以检测出转基因玉米Bt1 1成分 ,有些样品还同时检出其他转基因成分。本研究实验建立的方法 ,可以用于加工产品中转基因成分的定量检测 ,也可以用于定性检测 ,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法。     

双重数字PCR在转基因大豆检测中的应用

利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)平台建立针对MON87705、MON87769、DP356043三种转基因大豆中外源基因的双重PCR检测方法。利用双重数字PCR方法检测特异性、定量范围等参数,优化所用引物探针组合及实验体系程序,检测外源基因与内标准基因的拷贝数。结果表明,所用引物探针组合在数字PCR方法中仅对目标大豆品系有荧光信号,具有特异性,可用于转基因大豆品系的筛选与鉴别。检测了大豆的转基因成分含量,结果与材料标准品参数基本一致,并根据结果设定定量检测限为0.5%,定性检测限为0.05%,可满足低纯度样品检测的需求。双重数字PCR体系能够准确且稳定的满足实际检测需要,在实际应用上具有良好的发展前景。     

Chelex-100快速提取用于转基因检测DNA模板的研究

目的:建立从转基因作物中快速提取DNA的方法.方法 :采用Chelex-100法提取抗草甘膦大豆和非转基因大豆、转基因抗虫玉米Bt176和非转基因玉米中的DNA,使用PCR扩增大豆和玉米的内源基因(Lectin,zSSⅡb)及外源特异性序列(CaMV35S,Bt176)评价提取核酸的质量.结果 :Chelex-100法能够快速在1h之内从大豆和玉米中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰,转基因抗草甘膦大豆样品和转基因抗虫玉米Bt176检测均出现强阳性结果.结论 :Chelex-100法提取DNA可以作为转基因检测的模板,该方法具有经济、简便、快速的特点,适合于转基因检测工作.     

转基因大豆GTS40-3-2转化事件特异性PCR检测

GTS40-3-2是抗草甘膦转基因大豆,为建立GTS40-3-2大豆转化体特异性PCR检测方法,本研究以GTS40-3-2标准品为实验材料,根据已公布转基因大豆GTS40-3-2基因与大豆基因组连接序列信息,利用Primer5.0软件设计了5对品系特异性引物,对每对引物进行了退火温度、特异性及扩增效率的PCR检测,结果显示,5对特异性引物均能够从GTS40-3-2中扩增出大小约279bp、238bp、470bp、490bp和257bp的预期产物,可用于特异性检测转基因大豆GTS40-3-2转化事件。以转基因大豆GTS40-3-2含量为5%、2%、1%、0.5%和0.1%的标准品进行PCR灵敏度检测,结果表明5对引物的检测灵敏度均能达到0.1%。通过荧光定量PCR对5对特异性引物的Ct值与溶解曲线比较,最后选择出RRS2引物对为转基因大豆GTS40-3-2品系特异性检测的最适引物。本文结果将为我国未来转基因生物产品成分检测提供科学合理的实验参考。     

耐除草剂玉米G1105E-823C定性检测方法

转基因耐除草剂玉米G1105E-823C是经过改造的转mG2-aroA基因耐草甘膦玉米新品系,具有更高的草甘膦耐受性,目前已完成生产性试验,具有重要的产业化应用前景。但目前尚无针对G1105E-823C的转化体特异性检测方法的相关报道,这十分不利于对该品系的检测及监管。基于此,以G1105E-823C转化体特异性序列为靶标,建立了转基因耐除草剂玉米G1105E-823C的普通PCR和实时荧光PCR定性检测方法。结果表明,2种方法均能检测出转基因耐除草剂玉米G1105E-823C转化体成分,且具有较高的特异性。普通PCR检测方法检出限达0.1%,实时荧光PCR检测方法检出限达0.05%。研究建立的2种定性检测方法为转基因耐除草剂玉米G1105E-823C的精准检测提供了新的技术手段,可为农业转基因监管提供技术支撑。     

转基因大豆GTS40-3-2环介导等温扩增检测方法的建立

采用转基因大豆GTS40-3-2品系特异性基因LAMP引物,建立2种转基因大豆GTS40-3-2品系特异性基因等温扩增方法:(1)实时荧光环介导等温扩增方法;(2)反应前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,根据反应后HNB的颜色变化进行判定。对两种方法进行灵敏度、特异性测试,结果表明,两种方法皆能快速、特异性检测出转基因大豆GTS40-3-2品系成分,定性检测限为0.1%。基于颜色判定的LAMP检测方法对设备要求更简单,更适用于日常检验及监管部门进行转基因成分的快速检测。     

转基因玉米实验室PCR检测体系的优化及应用

为建立稳定的转基因玉米PCR检测体系,本实验采用正交设计法优化了玉米PCR反应体系,并对当地主要种植的16个玉米品种进行了转基因检测。结果显示Mg2+浓度对PCR扩增结果有较大影响,浓度低时影响扩增条带的特异性。降低d NTPs和引物浓度有助于扩增出较清晰的带型。3对定性PCR引物均可扩增出2个转基因玉米阳性样品的z SSIIb、Ca MV35S、NOS基因,而随机抽样的16个玉米样品均未检测到转基因目的片段。优化的PCR方法可作为转基因玉米实验室定性筛查的推荐方法,转基因玉米在本地的种植并不普遍。     

转基因玉米NK603品系特异定量PCR检测方法的建立

目的:建立转基因玉米NK603品系特异定量PCR检测方法,为转基因玉米NK603提供科学的定量检测依据。方法:根据转基因玉米NK603外源基因的旁侧序列设计引物和Taqman探针,建立转基因玉米NK603品系特异定量PCR检测方法,并采用该法检测2%含量的NK603标准品(不确定度为10%)。结果:采用构建的方法获得标准曲线斜率为-3.6~-3.1,相关系数大于0.99,扩增效率为100.2%,在90%~110%范围内;样品检测结果(1.9%)接近已知含量(2%,不确定度为10%)。结论:建立的转基因玉米NK603品系特异定量PCR检测方法的准确度较高,可在日常检验中推广应用。     

应用实时荧光PCR技术定性定量检测改良品质的转基因小麦

目的:对转入高分子量谷蛋白亚基的小麦中转基因成分进行实时荧光PCR定性定量检测。方法:针对转基因小麦品系中通用的ubiquitin启动子,NOS终止子以及标记基因bar基因进行定性筛选检测,同时用已知为单拷贝的Wx012基因作为小麦物种内源特异参照基因,用单粒B73转基因小麦提取基因组DNA建立内源基因和外源基因的标准曲线,对转基因小麦样品A进行定量检测,同时优化实时荧光PCR条件反应条件。定量检测结果为5.35%。结果:研究的实时荧光PCR技术对转基因小麦中转基因成分能够快速准确地进行定性定量检测。     

抗虫玉米CM8101定性检测方法的建立

转基因抗虫玉米CM8101是经人工改造合成的转Bt抗虫基因Cry1Ab?Ma转基因玉米新品系,由我国自主研发,具有更优良的抗虫性,目前已进入生产性试验阶段,具有广阔的产业化应用前景。依据CM8101的5′端旁侧序列信息,设计并筛选出最佳引物探针组合,通过普通PCR和实时荧光PCR技术,建立了转基因抗虫玉米CM8101的两种特异性定性检测方法。结果显示,普通PCR检测方法检出限达0.1%,实时荧光PCR检测方法检出限达0.05%。这两种定性检测方法的建立为今后准确高效检测转基因抗虫玉米CM8101及其产品提供了新的参考方法。     

双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光PCR检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。     

玉米蛋白粉DNA提取方法比较研究

饲料样本本身的复杂性给进出口产品转基因（genetically modified,GM）成分的检测工作带来了巨大的压力和挑战。玉米蛋白粉主要包含蛋白质、淀粉和脂类等成分,从中提取高品质的DNA比较困难,而高品质的DNA是转基因检测研究的关键,能够大大降低进出口检验中的“假阴性”结果。采用市售主流品牌常用的7种试剂盒（Promega公司、Biotecon公司、天根生化科技有限公司、Invitrogen公司、Qiagen公司、TaKaRa公司）、CTAB法以及改良SDS?CTAB法提取玉米蛋白粉中的DNA。通过对玉米内源基因进行实时荧光PCR检测,发现改良SDS?CTAB法提取的玉米蛋白粉DNA质量明显优于其他方法,改良SDS?CTAB法内源基因zSSIIb的C_t值为28.14,较CTAB法提高了27%。研究建立的改良SDS?CTAB法在国内外尚属首次应用于饲料转基因产品中,并对7批次实验室送检样品进行转基因成分检测,成功检出2批次阳性样品。     

转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种,该品种于2020年1月21日获得农业转基因生物安全证书,具有广阔的应用前景。转化体特异性PCR方法是进行转基因生物安全监管的最有效的技术手段之一,可以对转基因产品进行身份鉴定。本研究组织8家实验室对研发单位提供的的双抗12-5转化体特异性定性、定量PCR方法进行了验证,验证结果显示定性与定量PCR检测方法均具有稳定性好、特异性强和灵敏度高的特点,定量PCR方法能精确地定量检测质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品,并且具有良好的重复性和再现性,符合相关标准的要求。本研究有助于后续标准方法的建立和完善,为我国转基因生物安全监管提供技术支撑和决策依据。     

PCR技术定性检测转基因大豆方法的建立与研究

以转基因大豆(RRS品系)为材料,采用PCR技术,通过特异性引物和探针,对转基因大豆中的内源性基因Lectin和外源基因35S启动子、NOS终止子及CP4-EPSPS进行定性检测,旨在建立一种简单、快速、高效的检测方法,并将该方法用于我国进口自美国大豆实施检测,以评判是否为转基因大豆,为我国的商业谈判提供依据,同时也可满足百姓的知情权。     

转基因玉米双抗12-5转化体特异性PCR方法验证结果分析

抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种,该品种于2020年1月21日获得农业转基因生物安全证书,具有广阔的应用前景。转化体特异性PCR方法是进行转基因生物安全监管的最有效的技术手段之一,可以对转基因产品进行身份鉴定。本研究组织8家实验室对研发单位提供的的双抗12-5转化体特异性定性、定量PCR方法进行了验证,验证结果显示定性与定量PCR检测方法均具有稳定性好、特异性强和灵敏度高的特点,定量PCR方法能精确地定量检测质量分数为5%和0.5%的双抗12-5样品,并且具有良好的重复性和再现性,符合相关标准的要求。本研究有助于后续标准方法的建立和完善,为我国转基因生物安全监管提供技术支撑和决策依据。     

研发动态

<正>农业部发布16项转基因检测标准农业部近日发布公告,根据《中华人民共和国农业转基因生物安全管理条例》规定,经专家审定通过了转基因动物及其产品成分检测、转基因植物及其产品成分检测的16项标准,并批准发布为中华人民共和国国家标准,自2014年8月1日起实施。具体包括:转基因动物及其产品成分检测:猪内标准基因定性PCR方法、羊内标准基因定性PCR方法;转基因植物及其     

抗虫耐除草剂转基因玉米SW-1目标性状测试及多重PCR检测

以转基因玉米IE034和12-5为亲本,通过杂交复合获得同时含有cry1Ie、cry1Ab/cry2Aj和G10evo-EPSPs基因的复合性状转基因玉米SW-1。农艺性状检测证明SW-1同时具有抗虫和耐除草剂的特性。通过引物特异性筛选、退火温度和引物浓度等条件优化,建立了SW-1的多重PCR检测体系。多重PCR检测体系所用的内标基因为zSSIIb,反应体积为30μL,最佳退火温度为62℃,各引物加入量为0.3μL(10μmol/L)。利用此多重PCR检测体系,当产品中SW-1的质量百分比超过0.5%时,目标基因cry1Ie、cry1Ab/cry2Aj和G10evo-EPSPs都能同时被检测出来。研究结果为复合性状转基因玉米SW-1的分子特征检测提供了良好的技术支撑,同时也为含有cry1Ie、cry1Ab/cry2Aj和G10evo-EPSPs基因的其他转化体的多重PCR检测提供了科学数据。     

转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究

旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持。根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测。结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%。建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持。