喉癌中p15、p16基因纯合缺失与EGFR基因扩增相关性研究

研究p15、p16基因缺失和EGFR基因扩增的相关性及其与喉癌发生、发展的关系。提取喉癌新鲜组织中基因组DNA,采用聚合酶链反应技术,分别对30例喉癌进行p15基因第2外显子(p15E2)和p16基因第2外显子(p16E2)进行纯合缺失研究;应用FISH方法进行喉癌实体瘤EGFR基因扩增研究。p15E2纯合缺失率为13．3％(4／30),p16E2纯合缺失率为16．7％(5／30),p15E2、p16E2共同缺失率为6．7％(2／30)。在30例喉癌实体瘤EGFR基因扩增频率为30％(9／30),扩增2～8倍。p15E2和p16E2纯合缺失以及二者共同缺失与EGFR基因扩增相关,可能引起细胞周期失控而导致细胞增殖紊乱,在喉癌的发生及恶性进展中发挥一定作用。     

PTEN、HPV16/18-E6蛋白和雌激素受体在宫颈腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨宫颈腺癌组织中抑癌蛋白PTEN、人乳头瘤病毒（HPV）16/18-E6蛋白和雌激素受体（ER）的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法对65例宫颈腺癌组织进行PTEN、HPV16/18-E6蛋白和ER检测,对30例慢性宫颈炎组织中HPV16/18-E6蛋白和ER的表达进行检测。结果：宫颈腺癌组织细胞核中PTEN的表达显著低于癌旁宫颈腺上皮组织（P〈0.01）,96%的宫颈腺癌细胞核呈低表达,而仅35%的癌旁宫颈腺上皮呈低表达（P〈0.01）;HPV16/18-E6蛋白和ER在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为32.1%与49.4%,均显著高于慢性宫颈炎组织（P〈0.01）;HPV16/18-E6蛋白和ER的表达与宫颈腺癌的病理学分级、临床分期无关,在宫颈腺癌中的表达呈正相关。结论：PTEN在宫颈腺癌的发生中起一定的作用,其抑癌作用环节可能在细胞核水平;部分宫颈腺癌的发病可能与HPV16/18-E6蛋白过度表达有关;部分宫颈腺癌可能属于激素依赖性,雌激素可能有协同人乳头瘤病毒致癌的作用。     

PTEN、HPVl6/18-E6蛋白和雌激素受体在宫颈腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨宫颈腺癌组织中抑癌蛋白PTEN、人乳头瘤病毒(HPV)16/18-E6蛋白和雌激素受体(ER)的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学S-P法对65例宫颈腺癌组织进行PTEN、HPV16/18-E6蛋白和ER检测,对30例慢性宫颈炎组织中HPV16/18-E6蛋白和ER的表达进行检测.结果:宫颈腺癌组织细胞核中PTEN的表达显著低于癌旁宫颈腺上皮组织(P＜0.01),96%的宫颈腺癌细胞核呈低表达,而仅35%的癌旁宫颈腺上皮呈低表达(P＜0.01);HPV16/18-E6蛋白和ER在宫颈腺癌中的阳性表达率分别为32.1%与49.4%,均显著高于慢性宫颈炎组织(P＜0.01);HPVl6/18-E6蛋白和ER的表达与宫颈腺癌的病理学分级、临床分期无关,在宫颈腺癌中的表达呈正相关.结论:PTEN在宫颈腺癌的发生中起一定的作用,其抑癌作用环节可能在细胞核水平;部分宫颈腺癌的发病可能与HPV16/18-E6蛋白过度表达有关;部分宫颈腺癌可能属于激素依赖性,雌激素可能有协同人乳头瘤病毒致癌的作用.     

miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤组织中的表达分析

目的:使用microRNAs基因芯片及实时定量PCR法测定骨肉瘤组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并与瘤旁组织对比,分析骨肉瘤细胞内miR-15a-5p和miR-16-5p的表达变化。方法:选取34例骨肉瘤组织蜡块样本,使用microRNAs基因芯片观察miR-15a-5p和miR-16-5p在骨肉瘤和瘤旁组织内的表达差异;实时定量PCR法测定骨肉瘤组织和瘤旁组织中miR-15a-5p和miR-16-5p的相对表达含量,并将两种结果对比分析。结果:microRNAs基因芯片结果显示,在骨肉瘤组织中,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低1.79倍,miR-16-5p较瘤旁组织低1.62倍。实时定量PCR实验结果表明,miR-15a-5p和miR-16-5p表达较瘤旁组织降低,差异有统计学意义(P0.05)。经过统计学计算,miR-15a-5p在肿瘤中的表达较瘤旁组织低3.14倍,miR-16-5p较瘤旁组织低5.65倍。结论:在骨肉瘤中,miR-15a-5p和miR-16-5p表达含量降低,提示这两种microRNAs在骨肉瘤中可能做为抑癌因子存在。     

HPV16+治疗性无佐剂蛋白疫苗—HPV16Z- Hsp65-E6/E7的构建、表达及纯化工艺研究

目的：研制针对我国宫颈癌高危相关的HPV16型的治疗性无佐剂蛋白疫苗。方法：应用PCR技术自我国山西宫颈癌高发现场分离到的毒株-HPV16z中获得E6/E7转化基因片段,自卡介苗菌株中克隆获得Hsp65基因片段,对E6/E7基因片段定点突变修饰,构建pET28a-Hsp65-E6/E7表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白,并研究重组蛋白的纯化方案和工艺。结果：成功构建pET28a-Hsp65-E6/E7重组表达载体,E6/E7突变位点正确,融合蛋白在亲和层析柱上正确复性和初步纯化,经阴离子交换色谱纯化后蛋白纯度达到95%。结论：该研究为无佐剂治疗性重组蛋白疫苗Hsp65-E6/E7的进一步功能研究奠定了基础。     

青海地区46273例女性宫颈HPV检测结果分析

摘要 目的：根据青海地区妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）检测结果,分析宫颈高危HPV（HR-HPV）感染分布特点,为指导HPV疫苗接种提供理论依据。方法：采用Hybriuax技术检测21种高危型HPV亚型,对2014年1月-2020年2月于我院就诊的46273例女性宫颈人乳头瘤病毒分型检测。结果：46273例妇女中,高危HPV阳性率10.23%,高危HPV阳性率和年龄之间存在线性趋势,随年龄的增大感染比例上升。单一高危亚型HPV感染前三位的HPV亚型为16、58和39,合计占到45.64%。HPV亚型感染以单高危阳性为主,占总HPV阳性数的88.26%,占全部筛查人数的9.03%。HPV16、58、31、68亚型阳性率和年龄段之间存在线性趋势,随年龄的增大感染比例上升。HPV感染亚型检出构成比各年龄段均以HPV16感染排在第一位,排在第二位除61-70岁为双高危外,均为HPV58为主。结论：青海地区女性HPV感染率较高,以单一高危型感染为主,HPV16、58、39、52是主要的感染亚型,所以应针对青海地区HPV感染状况设计具有针对性的预防HPV感染亚型的疫苗。     

人乳头瘤病毒16 E6蛋白通过Wnt/β-catenin通路促进食管癌Eca109细胞增殖、迁移的实验研究

人乳头瘤病毒16(Human papillomavirus 16,HPV16)感染与食管癌的发生密切相关,HPV16编码的HPV16E6蛋白是主要的致癌蛋白,已经在宫颈癌细胞中被证实能够促进癌细胞的增殖、迁移,同时也可激活Wnt/β-catenin通路。但HPV16 E6蛋白对食管癌细胞增殖、迁移的调控作用及机制尚未阐明。为研究HPV16 E6蛋白对食管癌Eca109细胞增殖、迁移及细胞中Wnt/β-catenin通路的调节作用,本研究培养食管癌Eca109细胞并分组,空白对照组用不含药物及质粒的DMEM处理,空白pcDNA3.1组转染空白的pcDNA3.1质粒,HPV16 E6组转染HPV16 E6基因的pcDNA3.1质粒,HPV16 E6+XAV组转染HPV16 E6基因的pcDNA3.1质粒、同时加入β-catenin抑制剂XAV939;并检测细胞的增殖、迁移活力及细胞中增殖基因、迁移基因、Wnt/β-catenin通路基因的表达。结果显示,转染24h后,HPV16 E6组细胞的增殖活力、迁移活力以及细胞中c-myc、cyclinD1、bcl-2、HMGA-2、N-cadher...     

TCT、HPV检测在宫颈锥切术后复发中的预测价值

目的:评估薄层液基细胞学检查(thinprep cytologic test,TCT)和人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)检测在宫颈锥切术后复发中的预测价值。方法:随访531例病理诊断为子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅱ-Ⅲ级接受宫颈锥切术的患者,分别于术后3、6个月及术后每6-12月随访1次,以TCT及HPV检测作为随访的检测指标,若二者有一项异常,行阴道镜下活组织检查,病理证实存在子颈上皮内瘤变Ⅰ-Ⅲ级者视为复发。采用敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值表示TCT、HPV检测性能。结果:531例患者中10%(54例)的患者出现不同级别的病变复发。TCT在术后预测病变复发的灵敏度77%,特异度72%;HPV在术后预测病变复发的灵敏度95%,特异度60%,TCT联合HPV预测病变复发的灵敏度100%,特异性80%。术后HPV负荷量100 RLU/PC者较HPV负荷量100 RLU/PC者而言术后病变复发的风险增高,差别有统计学意义(P0.01),术后HPV负荷量100 RLU/PC是锥切术后病变复发的高危因素。结论:使用细胞学联合HPV检测是有效的预测宫颈锥切术后病变复发的方法,术后高HPV负荷量与病变复发相关,并可对术后复发高风险人群进行分流,临床需严密随访。     

高危型人乳头瘤病毒及p16和Ki-67联合检测在宫颈鳞状上皮内病变诊断中的价值分析

目的探讨p16和Ki-67在不同宫颈鳞状上皮内病变中的表达情况及不同宫颈鳞状上皮内病变与高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papilloma virus, HR-HPV)感染的关系。方法应用免疫组织化学技术检测138例宫颈病变(32例慢性宫颈炎、56例低级别鳞状上皮内病变、50例高级别鳞状上皮内病变)活检组织的p16和Ki-67表达水平,同时回顾性分析活检时HR-HPV的感染情况。结果 HR-HPV感染率、p16和Ki-67阳性表达率和表达水平随着宫颈病变级别增加而逐渐增高;HR-HPV感染率与p16和Ki-67表达水平均呈正相关。结论 HR-HPV的检测可用作临床宫颈病变筛查的常规检查,HRHPV及p16和Ki-67联合检测可降低宫颈病变的漏诊率,可用于指导宫颈病变的分级,提高宫颈活检诊断的准确率。     

腺病毒载体介导密码子优化型HPV 16 L1基因在哺乳动物细胞中的高效表达及病毒样颗粒的装配

为研究重组腺病毒载体作为HPV16预防性疫苗的可行性,构建了含密码子优化型HPV 16 L1基因的重组腺病毒,并对优化基因在哺乳动物细胞中的表达进行研究。首先按照哺乳动物密码子偏好对野生型HPV16 L1基因进行改造并合成优化基因,命名为mod.HPV16L1。将mod.HPV16L1基因克隆到穿梭质粒PDC316上,与骨架质粒共转染293细胞,在细胞内包装重组腺病毒rAd-mod.HPV16L1。用免疫印迹法检测病毒感染的293T细胞中HPV16L1蛋白的表达。通过Optiprep密度梯度超速离心法纯化HPV16 L1病毒样颗粒(VLPs)。用磷钨酸负染,在电子显微镜下观察HPV16 L1蛋白自我装配形成的VLPs。结果显示,重组腺病毒载体可介导mod.HPV16 L1基因在哺乳动物细胞内的高效表达,L1蛋白可自我装配形成VLPs。     

甲状腺乳头状癌中Survivin,VEGF,EGFR的表达及临床意义分析

目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中存活素(Survivin)、血管内皮生长因子(VEGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达及临床意义。方法:选择2013年4月~2016年4月在我院收治的100例PTC患者的手术标本以及同期100例癌旁正常甲状腺组织为研究对象,采用免疫组化方法检测盒比较Survivin、VEGF、EGFR的表达在PTC及癌旁正常甲状腺组织中的表达及二者的相关性,并分析其Survivin、VEGF、EGFR的表达与PTC患者临床病理特征的相关性。结果:PTC组织中Survivin、VEGF、EGFR阳性表达率均显著高于癌旁正常甲状腺组织,差异具有统计学意义(P0.05);Survivin、VEGF在淋巴结转移患者中的阳性表达率显著高于无淋巴结转移者(P0.05);EGFR在女性PTC患者中的阳性表达率显著高于男性(P0.05)。PTC组织中VEGF和Survivin、EGFR的表达无显著相关性(P0.05),但Survivin和EGFR的表达显著相关(r=0.235,P0.05)。结论:Survivin、VEGF、EGFR在PTC组织中表达上调,Survivin、VEGF与PTC的淋巴结转移有关,Survivin和EGFR在PTC的发生、发展过程中可能存在着协同作用。     

EGFR和KRAS在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)和鼠Kirsten肉瘤病毒致癌基因(KRAS)蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达水平及临床意义。方法:利用免疫组化SP法对上皮性卵巢癌组织(病例组,n=57)、卵巢良性肿瘤组织(良性组,n=50)以及正常卵巢组织(对照组,n=50)中的EGFR、KRAS蛋白水平进行检测,并分析其在上皮性卵巢癌发生发展中的作用。结果:病例组的EGFR、KRAS蛋白阳性率高于良性组和对照组(P0.05),良性组和对照组的EGFR、KRAS蛋白阳性率差异无统计学意义(P0.05)。浆液性腺癌组EGFR、KRAS蛋白的阳性表达率高于非浆液性腺癌组,Ⅲ~Ⅳ期的上皮性卵巢癌组织中EGFR、KRAS蛋白阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ期,中、低分化组中EGFR、KRAS蛋白阳性表达率高于高分化组,差异均具有统计学意义(P0.05)。上皮性卵巢癌组织中EGFR与KRAS的蛋白的阳性表达率呈正相关关系(r=0.469,P0.05)。结论:EGFR及KRAS蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达水平明显升高,可能参与了上皮性卵巢癌的发生发展过程,且两者之间呈正相关关系,联合检测可作为早期诊断上皮性卵巢癌的重要指标。     

颅内原发性胚胎性癌的临床特征及预后影响因素分析

目的:探讨颅内原发性胚胎性癌的临床特征及预后影响因素,为该病的临床诊治提供参考依据。方法:回顾性分析我院经病理证实的6例颅内原发性胚胎性癌患者的临床资料,随访并比较患者的预后情况。结果:本组病例5例男性和1例女性,平均年龄9.8岁;5例病变位于松果体区,1例位于鞍区;5例头痛起病,1例表现为多尿;术前血液学检查提示:4例患者甲胎蛋白明显升高,1例患者β亚单位绒毛膜促性腺激素明显升高;3例患者手术全切,平均生存期32.0月,3例患者手术次全切,平均生存期21.0月;4例患者术后接受规范放化疗,平均生存期32.0月,1例仅行化疗,生存期22.0月,1例术后未行放化疗,生存期9.0月。结论:颅内原发性胚胎性癌是一种罕见的颅内肿瘤,多见于年轻男性,病变多位于松果体区;术前血液学检查有助于诊断;患者预后差,手术切除程度是一重要预后影响因素,术后放化疗或可延长患者的生存期。     

妊娠期糖尿病小鼠胎盘EGFR的表达与其发病关系的研究

目的:研究妊娠期糖尿病小鼠胎盘表皮生长因子受体(EGFR)的表达,探讨EGFR表达与妊娠期糖尿病发病的关系。方法:采用链脲佐菌素建立妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)小鼠模型,对照组为正常妊娠小鼠,腹腔注射等量缓冲溶液。测定母鼠体重、血糖;计算胎鼠的存活率;测定胎鼠、胎盘重量,计算胎盘效率;RT-PCR、免疫组化分别测定GDM组和对照组胎盘EGFR m RNA和EGFR蛋白的表达。Pearson相关性分析用于母鼠血糖与EGFR表达的相关性分析。结果:GDM组母鼠体重和血糖均高于对照组(P0.01);GDM组胎鼠、胎盘重量及胎盘效率均高于对照组(P0.01);RT-PCR和免疫组化结果显示GDM组胎盘EGFR m RNA和EGFR蛋白的表达与对照组相比差异有统计学意义(P0.01)。GDM组小鼠血糖值与其胎盘EGFR的表达具有相关性(r=0.582,P0.05)。结论:GDM导致胎盘EGFR表达升高,EGFR并不是GDM的发病因素,EGFR是预防GDM的潜在靶点。     

信号转导与转录因子3和表皮生长因子受体在宫颈不同病变组织中的表达及其临床意义

目的:探讨信号转导与转录因子3(STAT3)与表皮生长因子受体(EGFR)在宫颈不同病变组织中的表达变化及其临床意义。方法:采用Western blot与免疫组化的方法检测100例上皮内瘤样病变(CIN)组织、60例宫颈癌组织及40例正常宫颈组织中STAT3与EGFR的表达;分析STAT3与EGFR的表达与宫颈癌组织病理特征的关系;对宫颈癌组织中STAT3与EGFR的表达的相关性进行分析。结果:宫颈癌组织以及CIN组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率显著高于正常宫颈组织(P0.05),且宫颈癌组织中STAT3、EGFR的表达量和阳性率高于CIN组织,差异有统计学意义(P0.05);STAT3与EGFR在宫颈癌组织中的染色强度较正常宫颈组织以及CIN组织显著增强;STAT3与EGFR的异常表达与宫颈癌患者的组织学分级、临床分期以及是否发生淋巴结转移有关(P0.05),而与年龄以及病理分型无关(P0.05);宫颈癌组织中STAT3和EGFR表达呈正相关(P0.05)。结论:STAT3与EGFR表达与CIN、宫颈癌的进展紧密相关,且与宫颈癌部分病理特征相关,二者有可能作为宫颈癌诊断及预后的参考指标。     

对SK、AK、cSCC临床及病理特征的差异性分析

摘要 目的：探讨SK、AK、cSCC临床及病理特征的差异。方法：收集2010年1月-2020年12月期间经皮肤科病理确诊为SK（484例）、AK（68例）和cSCC（152例）患者的临床及病理资料,分析患者发病性别、年龄、皮损部位、病理分型及误诊疾病的构成等特点。结果：1. SK好发于46-60岁和61-75岁,在31-45岁年龄段好发于非暴露部位;AK好发于61-75岁和≥76岁年龄段,无论在哪个年龄段均好发于暴露部位,且随年龄增长患病率增高;cSCC好发于61-75岁和≥76岁年龄段,在46-60岁年龄段,好发于非暴露部位,在≥76岁年龄段,cSCC好发于暴露部位。2. SK及cSCC可发生于任何部位;AK可发生于除外阴以外的其他部位,好发于头面颈部。3. SK发病男女无差异,AK发病女多于男,cSCC发病男多于女。4. SK以棘层肥厚型（52.9%）和角化过度型（38.2%）多见,AK以萎缩型（47.0%）和角化过度型（26.5%）多见。6.SK误诊率为29%,AK误诊率为63%。结论：SK、AK及cSCC发病性别、年龄、皮损部位等各有异同,临床表现多样,易误诊,临床需提高警惕。     

新型小分子酪氨酸激酶抑制剂NXGH/NXGF对不同肺癌细胞的敏感性研究

目的:研究新型小分子酪氨酸激酶抑制剂NXGH和NXGF对不同EGFR表达水平及突变状态肺癌细胞的敏感性,为构建EGFR分子分型成像探针提供参考依据。方法:构建基于NXG结构的新型小分子酪氨酸激酶抑制剂NXGH和NXGF,选择4种不同EGFR表达水平及突变状态肺癌细胞:PC9(EGFR 19外显子缺失突变)、H1975(EGFR L858R突变合并T790M二次突变)、H358(EGFR野生型表达)及H520(EGFR阴性表达),应用MTT方法分析梯度浓度NXGH及NXGF 48 h时间点对4种肺癌细胞的抑制作用,分别计算IC_(50)及细胞存活率,比较NXGH及NXGF对不同肺癌细胞的敏感性。结果:NXGH作用下,PC9、H358、H520、H1975肺癌细胞IC_(50)分别是0.675μmo L·L~(-1)、12.097μmo L·L~(-1)、11.368μmo L·L~(-1)和0.981μmo L·L~(-1),NXGH浓度为1.25、2.5和5μmo L·L~(-1)时,PC9和H1975细胞的IC_(50)低于H358和H520(P0.05)。NXGF作用下,PC9、H358、H520、H1975肿瘤细胞IC_(50)分别是0.685μmo L·L~(-1)、4.265μmo L·L~(-1)、3.097μmo L·L~(-1)和0.331μmo L·L~(-1),NXGF浓度为1.25、2.5μmo L·L~(-1)时,PC9和H1975的IC_(50)低于H358和H520(P0.05)。结论:本实验室设计构建的新型小分子酪氨酸激酶抑制剂NXGH和NXGF对不同EGFR表达水平和突变状态的肺癌细胞均有较高亲和性,且低浓度时对EGFR突变型更敏感。     

甲状腺乳头状癌淋巴结转移的临床危险因素分析

目的:探讨甲状腺乳头状癌发生颈部淋巴结转移的危险因素。方法:回顾性分析我院自2017年1月至2017年5月手术治疗甲状腺乳头状癌病人177例的临床资料,采用卡方检验、t检验及logistic回归分析甲状腺乳头状癌发生颈部淋巴结的危险因素。结果:甲状腺乳头状癌淋巴结转移率为45.8%,术后并发症发生率为6.2%,淋巴结转移组较未转移组年龄更小、癌结节更大(P0.05),两组比较性别无统计学差异(P0.05),0.5 cm癌结节≤1 cm组较癌结节≤0.5 cm组更易出现淋巴结转移(P0.05),年龄大于45岁、癌结节≤0.5 cm的患者,9.6%发生淋巴结转移。Logistic回归分析提示年龄、癌结节大小是淋巴结转移的独立危险因素(P0.05)。结论:年龄、癌结节大小是淋巴结转移的独立危险因素,年龄越小、癌结节越大的甲状腺乳头状癌患者,越容易出现颈部淋巴结转移。