用改进的ELISA法检测腺病毒抗原

用改进的ELISA法检测94份咽拭子标本中的腺病毒抗原,标本先接种人肾细胞,使病毒有一定程度的增殖,同时与传统的病毒分离作对比,结果表明,腺病毒分离阳性的18例,ELISA法检测全部阳性,76例分离阴性(盲传3代)者ELISA法也全都阴性,两者完全相符,ELISA法检测增殖24、48、72小时的细胞培养物腺病毒抗原的阳性率分别为16.7％,72.2％和83.3％,本法特异、可靠、判断客观、可用来检测腺病毒抗原。     

葡萄球菌蛋白A免疫粘附法检测单纯疤疹病毒抗原

本文用葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal Protein A,简称SPA)免疫粘附法快速检出单纯疱疹病毒抗原。试验观察了正常人角膜上皮细胞、兔角膜上皮细胞及来感染的传代细胞(Vero细胞等)对SPA的反应。同时,对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)实验感染性角膜炎的家兔,用SPA免疫粘附法与病毒分离培养法做了对照观察,并对临床诊断为单纯疱疹病毒性角膜炎的患者做了初步观察。结果表明,SPA免疫粘附法特异、简便,适合基层实验室应用。     

酶标抗原火箭免疫电泳法及其在蛇毒抗原成分含量测定中的应用

为解决目前蛇毒成份检测困难以及寻找一种可用于蛇伤快速鉴别诊断的方法,本研究建立了酶标抗原火箭免疫电泳法。本法结合了酶标法灵敏度高和火箭电泳操作简单的特点,对待测的同种抗原标记辣根过氧化物酶(酶标抗原),检测时把微量的酶标记抗原掺入被测样品中,在含多价抗血清的免疫电泳板进行电泳。最后用辣根过氧化物底物3.3′-二氨基联苯胺在板上直接显色,显色后观察到的免疫沉淀线高度与被测抗原含量呈正相关(r=+0.98)。采用本方法检测眼镜蛇毒细胞毒素和限镜王蛇毒 L-氨基酶氧化酶,细胞毒素的最低检测浓度为110ng/ml,氨基酸氧化酶为60ng/ml。比单向火箭免疫电泳法灵敏度高30倍。用同一原理的酶标记抗原融合电泳法监测L-氨基酸氧化酶的层析分离时,比酶活性法检测灵敏度高20倍。全部检测只需30分钟。初步观察商品眼镜蛇毒抗血清可对蛇毒15种成分产生免疫沉淀线,眼镜蛇的细胞毒与同科异科蛇毒的细胞毒素无交叉免疫反应。因此,采用本法可以确定不同蛇种蛇毒中所含的特异性抗原,获得蛇伤鉴别诊断的依据。     

用A蛋白夹层酶联免疫吸附法及病毒与葡萄球菌共凝集法检测黑曲霉病毒

用葡萄球菌A蛋白夹层酶联免疫吸附(PAS-ELISA)和病毒-葡萄球菌共凝集试验(SA-test),检测了葡萄糖淀粉酶生产菌中的黑曲霉病毒(AsPergillus niger virus)含量。证实了酶产量不同的黑曲霉变异株中的病毒含量与酶产量高低有相关性。并讨论了用上述技术检测病毒量作为快速简便方法筛选高酶产量菌种的可能性。     

酶标SPA玻片法快速检测流行性出血热血清抗体的研究

本文介绍了 HRP-SPA 玻片染色法检测病人和动物血清抗体的方法,并与酶标抗体和 IF 法作了比较。结果提示 EHF病人在发病3天直至病后16年均可检出抗EHF 的 IgG 抗体,故这三种方法均可用于对 EHF 的早期、快速及追溯诊断和流行病学调查。这三种方法均较快速,并具有较好的特异性,但 HRP-SPA 法较后两种方法敏感并具有更多的优点,主要是便于在基层推广使用。     

基于万古霉素建立荧光酶联免疫吸附法检测金黄色葡萄球菌

以猪IgG作为捕获抗体固定金黄色葡萄球菌,修饰有万古霉素的量子点荧光微球作为"检测抗体",建立荧光酶联免疫吸附法检测金黄色葡萄球菌。文中制备了平均粒径为100 nm的量子点荧光微球并与万古霉素偶联;摸索了反应最佳盐离子浓度为0.01 mol/L,反应最佳pH为6.0。在该实验条件下,金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为104 CFU/m L,与其他致病菌无交叉反应。以上结果表明,该方法可用于快速检测金黄色葡萄球菌,为金黄色葡萄球菌的临床监控和食品检测提供参考。     

辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白的简易过碘酸钠法

辣根过氧化物酶(HRP)标记葡萄球菌A蛋白(SPA)的方法多为过碘酸钠法。1982年薛采芳等采用过碘酸钠改良法获得满意效果。我们依照Wilson等报道的HRP标记     

Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒

目的:建立Q-PCR法检测腺病毒基因治疗产品中的复制型腺病毒(RCA)。方法:首先制备高纯度的pXC1质粒参考品(含有E1基因序列),紫外吸收法定量后经过数学换算得到拷贝数;然后比较染料法和探针法的灵敏度,建立适用的Q-PCR检测方法;最后用新建Q-PCR法定量测定腺病毒基因治疗产品中的RCA。结果:pXC1质粒参考品的拷贝数初步标定为2.6×1010拷贝/μL;探针法的灵敏度比染料法高1000倍;将pXC1质粒参考品应用于Q-PCR(探针法)测定腺病毒基因治疗产品中的RCA,标准曲线回归方程为y=-1.416ln(x)+47.395,R~2=0.9966,供试品的Cq值均位于标准曲线范围内。结论:新建Q-PCR法适用于检测腺病毒基因治疗产品中的RCA,且结果准确可靠。     

酶标法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性

[目的]建立促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-Fc fusion protein,简称E4F4)生物学活性的检测方法,并对新建方法进行优化及验证。[方法]采用U2OS/GLP-1R转基因细胞系,通过酶标法检测胞内cAMP含量的改变来测定E4F4生物学活性。[结果]U2OS/GLP-1R转基因细胞系在30代以内均可用于E4F4生物学活性的检测,细胞接种密度为1.2×10^(4)/孔,药物作用时间30 min为该方法的最佳检测条件;在0.00305~50μg/mL范围内,剂量效应曲线呈典型的S型半对数曲线;3批E4F4成品分别进行加标回收试验,回收率均在80%~120%之间;对同一批E4F4成品独立测定8次,CV%值为12.81%;3批E4F4成品在3个工作日内进行生物学活性检测,每批分别测定3次,9次试验的CV%为16.73%。[结论]经过细胞接种密度、细胞代次和药物作用时间的优化,建立的U2OS/GLP-1R细胞酶标法专属性强,精密度好,准确性高,可作为E4F4生物学活性的常规检测方法。     

酶连接免疫吸附试验检测e抗原

1972年Magnius认为在乙型肝炎表面抗原(HB_sA_g)阳性血清中发现的一种新抗原(e抗原),可能与乙型肝炎的传染性和预后有较密切关系。此后该抗原很受重视。但多年来国内外一直使用琼脂免疫扩散法(ID)进行检测,敏感性不高。酶连接免疫吸附试验(ELISA)是七十年代发展起来的一种新的检测技术,有敏感性高、特异性好和操作简便等优点。最近,我们用     

限量抗原底物珠体系固相酶免疫分析法用于抗腺病毒的IgG抗体的检测

1978年冬至1979年春我们用固相酶免疫分析法中的限量抗原底物珠体系(Dass)间接法检测临床诊断为病毒性肺炎及麻疹合并病毒性肺炎患儿的9 l例双份血清中的抗3和7型腺病毒的0gG抗体,同时以微量血凝抑制试验进行对照,其符合率为90．5％。同时期对临床诊断为非腺病毒感染的lo例双份血清进行检测,两种方法滴度均无四倍升高。非腺病毒感染息者DAssIgG抗体水平较有近期感染患者为低,前者1：64,后者1：2,048。对抗3和7型腺病毒的兔免疫血清及正常兔血清Dass法测定结果及抑制与阻断实验均说明本方法是特异的,其灵敏度较血凝抑制试验高约50倍左右。     

用固相酶免疫吸附法检测克里米亚出血热(CHF)抗原

<正>对于自然疫源地采集标本中克里米亚出血热(CHF)病原的检测一般采用接种新生小白鼠法(生测法);分离出的病原再用补体结合试验(CF)、间接血凝试验(IHA)和免疫荧光(IF)试验进行鉴定。这些方法特异性高,但是十分费力,且均不能直接用于原始材料中的病原体测定。     

单克隆抗体酶联免疫吸附法检测尿标本中人巨细胞病毒抗原

本文运用抗人巨细胞病毒(HCMV)包膜20KD或/和130KD结构蛋白的单克隆抗体分别建立了4类酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法,共对44人份临床尿标本进行HCMV抗原检测。方法的敏感度可高达10.3—32.8ng HCMV抗原/ml尿,与尿标本中的HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ和EBV抗原无交叉反应,重复性良好,与病毒分离比较,敏感性和特异性在71—83％和88—100％之间;与核酸杂交比较,敏感性和特异性也可分别高达60—100％和83.3—100％。混合使用多种单克隆抗体作为包被抗体会得到较好的技术参数。上述结果提示运用单克隆抗体ELISA将有助于一般临床实验室对HCMV感染的快速诊断。     

间接酶免疫组化法对烫伤皮肤金黄色葡萄球菌定位的研究

以抗金葡萄抗体（兔IgG）为第一抗体,以HRP标记的羊抗兔IgG为第二抗体,建立了一种间接的酶免疫组化法,该法显色效果较好,并且具有较高的特异性,另外,利用该法对烫伤大白鼠动物模型的病变皮肤组织中金黄色葡萄球菌进行了定位研究,结果表明该菌在病变组织中呈现明显不均一性之特征。     

免疫酶标(ELISA)法检测宫颈癌妇女阴道分泌物中HSV抗体的研究

应用免疫酶标ELISA法检测宫颈癌阴道分泌物中HSV抗体,其阳性率为85.7％,HSV-2抗体滴度的几何均值为57.98、与非宫颈癌组妇女比较,阳性率及抗体滴度的几何均值均存在显著差异,提示宫颈癌患者生殖道HSV的高感染率。     

用免疫荧光法检测登革病毒抗原

建立了为检测登革病毒抗原的直接免疫荧光法。将标记荧光素的抗IV型登革病毒的免疫腹水IgG抗体,滴加到感染了该病毒原型株的新生小白鼠脑印片和白纹伊蚊细胞系盖玻片培养上进行结合,都观察到特异的荧光。而未经感染或感染了其它型别登革病毒或日本乙型脑炎病毒的新生小自鼠脑印片上,均未观察到特异的荧光。这种特异的荧光能被未标记的特异性抗体阻断或抑制。在吸过感染了该病毒的小白鼠血的饲养的部份雌性白纹伊蚊头压片上,观察到特异的荧光,而在未吸过感染血的雌性白纹伊蚊头压片上,都未观察到特异的荧光。在流行区捕得的21只雌性白纹伊蚊中8只的头压片和82只中5只的涎腺、胃和卵巢压片中的细胞浆内观察到IV型登革病毒抗原的特异性荧光。而用此法对非流行区饲养的雌性白纹伊蚊的各种压片中都未观察到特异荧光。