水稻两性生殖细胞的N-甲基-N-亚硝基脲诱变方法

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)被用于水稻(Oryza sativa)受精卵的诱变。通过水稻辽盐6号成熟生殖器官的MNU体内同步处理及后代群体筛查, 确立了水稻两性生殖细胞的MNU诱变方法。与辽盐6号受精卵的MNU处理相比, 各组条件下两性生殖细胞的MNU处理明显使M₁群体生长发育的指标降低及M₁-M₂群体中突变性状的发生率升高。两性生殖细胞在含有1.5 mmol?L ^-1 MNU和10 mmol?L ^-1 PO₄ ^3-的缓冲液(pH4.8)中处理60分钟, 突变性状发生率是基于受精卵MNU处理的3倍。进一步筛查M₃群体, 获得了包含新型植株和籽粒突变体的纯合突变体系列。研究结果表明, 水稻两性生殖细胞的MNU诱变可显著提高广谱诱变效率。该技术的应用可为水稻的未知功能基因鉴定和育种所需的各种突变体规模化开发提供高效的技术支撑。     

水稻两性生殖细胞的N-甲基-N-亚硝基脲诱变方法

N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)被用于水稻(Oryza sativa)受精卵的诱变。通过水稻辽盐6号成熟生殖器官的MNU体内同步处理及后代群体筛查, 确立了水稻两性生殖细胞的MNU诱变方法。与辽盐6号受精卵的MNU处理相比, 各组条件下两性生殖细胞的MNU处理明显使M₁群体生长发育的指标降低及M₁-M₂群体中突变性状的发生率升高。两性生殖细胞在含有1.5 mmol∙L ^-1 MNU和10 mmol∙L ^-1 PO₄ ^3-的缓冲液(pH4.8)中处理60分钟, 突变性状发生率是基于受精卵MNU处理的3倍。进一步筛查M₃群体, 获得了包含新型植株和籽粒突变体的纯合突变体系列。研究结果表明, 水稻两性生殖细胞的MNU诱变可显著提高广谱诱变效率。该技术的应用可为水稻的未知功能基因鉴定和育种所需的各种突变体规模化开发提供高效的技术支撑。     

N-甲基亚硝基脲诱导小鼠胸腺淋巴瘤TCR基因重排分析

目的探讨N-甲基亚硝基脲（MNU）诱导的小鼠胸腺淋巴瘤的单克隆起源。方法采用巢式PCR方法,对8例MNU诱导的胸腺淋巴瘤组织进行T细胞受体β链（TCRβ）和γ链（TCRγ）克隆性基因重排分析,并对TCRγ基因重排的PCR产物直接测序。结果 8例胸腺淋巴瘤检测TCRβ和TCRγ均呈克隆性基因重排。DNA序列测定证实TCRγ基因PCR扩增产物为基因重排产物。结论巢式PCR TCR基因重排检测及DNA序列分析证实,MNU诱导的小鼠胸腺淋巴瘤是来源于T细胞的肿瘤。     

UV-B辐射对几种木本植物幼苗生长和叶绿体超微结构的影响

在实验室条件下研究了UV－B辐射对广东省南亚热带森林中5种木一植物九节,鸭脚木,猴耳环,半枫荷,山乌桕和绿化树种大叶合欢的幼苗形态和细胞超微结构。特别是叶绿体超微结构的影响。结果表明,UV－B辐射抑制幼苗主根伸长和减少侧根数,抑制茎伸长,减少叶数和叶面积。UV－B辐射破坏叶片细胞膜细胞,特别是叶绿体膜结构,但不同种受影响的程度不同,所表现的症状也不完全相同,鸭脚木的质膜收缩,导致质壁分离;鸭脚木,半枫荷和猴耳环的叶绿体膨胀,前二者的甚至破裂,鸭脚木的质膜收缩,导致质壁分离;鸭脚木,半枫荷和猴耳环的叶绿体膨胀,前二者的甚至破裂;鸭脚木和半枫荷的类囊体膨胀粘连;猴耳环的线粒体出现空泡化,半枫荷和猴耳环的叶绿体内大的淀粉粒增多;鸭脚木和山乌桕的叶绿体内或膜上黑色颗粒增多,鸭脚木的线粒体膜上也出现黑色颗粒。     

澳洲坚果光壳种叶绿体基因组的密码子使用偏好性及其影响因素分析

为确定澳洲坚果光壳种(Macadamia integrifolia Maiden&Betche)叶绿体基因组密码子偏好性形成的主要影响因素,本研究通过其叶绿体基因组的51条蛋白编码序列,系统分析其密码子的使用模式及其特征.密码子偏好性参数分析结果显示,叶绿体基因密码子3位碱基的GC含量次序为GC1>GC2>GC3;有效...     

影响小黑杨花药培养中花粉愈伤组织诱导与不定芽分化的几个生理因素

建立了小黑杨花粉愈伤组织与不定芽诱导体系,观察到：（1）25℃和暗培养条件下花粉愈伤组织的诱导率最高（达到89．2％）;（2）25℃、16h·d^-1。光照（光照强度为35μmol·m^-2·s^-1左右）下培养的不定芽诱导率最高（为72.3％）;（3）花芽于0℃下低温储藏时间延长不利于花粉愈伤组织的诱导,而培养早期诱导出的愈伤组织,其不定芽分化能力高于后期诱导的愈伤组织,分化培养基中添加0.1mg·L^-1苯基噻二唑基脲（TDZ）对不定芽分化有促进作用。     

N-(2-吡啶基)-N'-苯基脲对几种作物种子根、芽生长影响的回归分析

N-（2-吡啶基）-N'-苯基脲（2PU）,属苯基脲衍生物,具有细胞分裂素活性,有关其合成和应用的研究未见报道。作者合成了2PU并进行了生物效应试验研究。结果表明,2PU对作物种子萌发时胚根、胚芽的生长具有明显的促进作用,其根、芽生长与2PU浓度之间的关系符合Y=a＋bX＋eX2＋的数学模型。2PU对小麦根芽和赤豆根芽生长最佳浓度分别是0.001～0.0lppm、0.005～0.05ppm,对黄豆根生长以0.001～0.06ppm最佳。     

几种因素对电刺激诱导小鼠卵母细胞孤雌活化的影响

为了给小鼠体细胞核移植研究提供最佳的小鼠卵母细胞电激活条件 ,研究了影响电刺激诱导小鼠卵细胞孤雌活化的 4个因素 :脉冲强度、电融合液、操作液预处理及小鼠品系。发现 :(1)小鼠卵母细胞在 0 5～1 2 5kV/cm脉冲强度下 ,获得的活化率差异不显著 (71 4 3%～ 80 39% ,P >0 0 5 ) ,而在 1 5kV/cm的脉冲刺激下 ,活化率显著下降至 4 8 15 % (P <0 0 5 ) ,死亡率显著升高 (2 9 6 3% ,P <0 0 5 ) ;(2 )含有山梨醇的EFS1和含有甘露醇的EFS2对小鼠卵母细胞的活化效果相似 ,但前者较后者更易于操作 ,可以用EFS1取代EFS2运用于小鼠体细胞核移植研究中 ;(3)用核移植操作液预处理小鼠卵母细胞后 ,在 0 75kV/cm的脉冲强度下 ,与对照组无差异 ,而当脉冲强度升至 1 0kV/cm时 ,活化率显著降低 (46 6 7% ,P <0 0 5 ) ,而死亡率显著升高(30 0 0 % ,P <0 0 5 ) ;(4)昆明白小鼠和C5 7BL/ 6小鼠卵母细胞在 0 75～ 1 0kV/cm场强下 ,活化率无差异。     

9-羧酸蒽诱导心肌细胞表达c-fos及其胞内影响因素的研究

近来发现Cl^-通道抑制剂9－羧酸蒽（9－AC）有是一种新型的磷酸酶抑制剂。本研究观察了蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶C（PKC）及非特异性磷酸酶抑制剂对9－AC诱导的新生大鼠培养心肌细胞c-fos表达的影响。同时利用放免法测定了细胞内cAMP和cGMP的变化,旨在探讨影响9－AC诱导c-fos的胞内因素。结果显示,9－AC（0.5mmol/L）可显提高心肌细胞FOS样免疫阳性细胞数及染色强度。该作用不PCK抑制剂Chelerythine(1μmol/L）预处理的影响,而用PKA抑制剂H－89（10μmol/L）预处理心肌细胞,可减弱9－AC的作用,但FOS蛋白的表达量仍显高于基础水平。与之相比,相同条件下异丙肾上腺素（Iso）对FOS蛋白表达的诱导作用不受PKC抑制剂影响,但PKA抑制剂可使之完全抑制。非特异性磷酸酶抑制剂钒酸盐（VO4,1.5mmol/L）亦可显增强FOS的表达,9－AC不能使该作用进一步增强。放免测定显示9－AC（0.5mmol/L）对胞内cAMP和cGMP无显性影响。而Iso（10μmol/L）可明显升高cAMP的浓度。结果表明,9－AC可诱导培养的新生大鼠心肌细胞表达c-fos,其胞内作用途径与PKA的活性部分相关,而与cAMP、cGMP水平及PKC无关,上述作用特点及其与非特异性磷酸酶抑制剂相似的作用提示9－AC诱导c-fos表达可能是它影响了参与核内基因表达的蛋白转录因子的脱磷酸化过程。     

外源基因在叶绿体中表达的研究

综述了叶绿体表达系统的特点,及国内外此方面的研究动态,提出了外源基因在叶绿体中表达存在的问题和解决策略.     

叶绿体基因工程简介

叶绿体是植物细胞中一种特殊的细胞器。自1988年开始,人们认识到叶绿体在植物基因工程中的特殊地位。叶绿体基因工程的特点,特别是其高效表达和安全性,使其受到越来越多的重视,本文对叶绿体转化作了较为全面的介绍,包括其优势、方法、用途及不足等内容。 Abstract:Chloroplast is a kind of special cell organin plant cells.Since 1988,Scientists have realized its advantages in plant gene enginearing.It′s high efficient expression and safety made it been attached more and more importance to.This paper introduces the chloroplast transfer mation,including its advantages,methods,uses and defects.     

利用套叠PCR技术进行基因突变和拼接

利用套叠PCR技术（又称重叠区扩增基因拼接法）对hGM-CSF基因内第28位氨基酸处的糖基化位点进行突变和进行人促性腺激素基因,腺苷酸激酶短肽与胰岛素样生长因子－基因三者之间的拼接,结果表明采用该技术能在体外实行有效的基因重组和定点突变,其成功率为100％,这一技术不需要内切酶消化和连接酶处理,技术操作员简单易行,在基因拼接,基因内部突变方面具有良好的应用价值。     

Recombination and Heterologous Expression of Aliophycocyanin Gene in the Chloroplast of Chlamydomonas reinhardtii

Heterogeneous expression of multiple genes in the nucleus of transgenic plants requires theintroduction of an individual gene and the subsequent backcross to reconstitute multi-subunit proteins ormetabolic pathways.In order to accomplish the expression of multiple genes in a single transformationevent,we inserted both large and small subunits of allophycocyanin gene (apcA and apcB) into Chlamydomonasreinhardtii chloroplast expression vector,resulting in papc-S.The constructed vector was then introducedinto the chloroplast of C.reinhardtii by micro-particle bombardment.Polymerase chain reaction and Southernblot analysis revealed that the two genes had integrated into the chloroplast genome.Western blot andenzyme-linked immunosorbent assay showed that the two genes from the prokaryotic cyanobacteria couldbe correctly expressed in the chloroplasts of C.reinhardtii.The expressed foreign protein in transformantsaccounted for about 2%-3% of total soluble proteins.These findings pave the way to the reconstitution ofmulti-subunit proteins or metabolic pathways in transgenic C.reinhardtii chloroplasts in a single transformationevent.     

油菜叶绿体16SrRNA基因的一级结构分析

本文报道了油菜叶绿体16S rRNA基因的全顺序及其5′端上游的156bp和3′端下游的101bp的核苷酸顺序。油菜叶绿体16s rRNA基因长为1491bp,和烟草、玉米相比,同源程度分别为98.5％、96.1％。油菜叶绿体16S rRNA基因5′端上游及3′端下游的顺序能互补而形成一个较大的茎环结构,但与烟草相比,由于3′端下游顺序有79bp的缺失,因此,该结构中的茎部分大小仅为烟草的二分之一。     

基于基因突变的基因工程抗体亲和力成熟研究

基因工程重组抗体可通过对基因序列的分析、修饰与修改,从而改进抗体特性。对基于基因突变的基因工程抗体亲和力成熟的方法进行总结,主要包括小分子有机物-抗体相互作用机制分析、抗体序列数据库及计算机模拟技术,以及新兴的分子模拟与对接技术。     

同源重组置换衣藻叶绿体chlL基因及其同质化鉴定

设计以 aad A基因置换衣藻 chl L基因并作为转基因衣藻筛选标记 ,将 chl L基因两侧的基因片段 clp P- trn L- pet B- chl L5′- 3′作为同源片段 ,构建衣藻叶绿体同源重组质粒 p64D.通过改进的基因枪法转化程序 ,将此质粒轰击入衣藻叶绿体 .经抗性筛选、暗培养及 PCR、Southern- blotting等鉴定 ,证实衣藻叶绿体基因组中大部分 chl L结构基因已被外源基因 aad A所置换     

Biochemical characteristics of cytosolic and particulate forms of protein tyrosine kinases from N-methyl-N-nitrosourea (MNU)-induced rat mammary carcinoma

Summary Protein tyrosine kinase (PTK) activities in methyl nitrosourea (MNU)-induced rat mammary carcinoma has been investigated by using poly (glu: tyr; 4 : 1) as an exogenous substrate. The PTK activity of the mammary carcinoma was almost equally distributed between the particulate and soluble (cytosolic) fractions at 110,000 × g. The activity of the particulate enzyme was stimulated by non-ionic detergent Triton X-100 by about 2-fold whereas the detergent had no effect on the cytosolic form. More than 60% of the particulate enzyme could be solubilized by 5% Triton X-100. Although, both particulate and cytosolic PTKs catalyzed the phosphorylation of several tyrosine containing synthetic substrates to various degrees, poly (glu: tyr; 4 : 1) was the best substrate (apparent Km, 0.7 mg/ml). Both forms of enzymes utilized ATP as the phosphoryl group donor, with an apparent Km of 40 µM. Among various divalent cations tested, Co², Mn² and Mg² were able to fulfill the divalent cation requirement of both forms of the PTKs. All these cations exerted biphasic effects on the kinase activities, however, Mg² was the most potent cation. Agents such as epidermal growth factor, insulin and platelet derived growth factor which stimulate their respective receptor-PTK activities were without effect on the PTK activities of mammary carcinoma. On the other hand, though heparin and quercetin inhibited both enzyme activities in a concentration dependent manner, the particulate form was more sensitive to inhibition than the cytosolic form. These data indicate that MNU-induced rat mammary carcinoma expresses both particulate and cytosolic forms of PTKs and that there are significant differences in the properties of the two forms of PTKs. Differential effects of some agents on mammary carcinoma PTKs suggest that these enzymes may be acutely regulated in vivo and could play an important role in mammary carcinogenesis.Abbreviations PTK Protein Tyrosine Kinase - EGF Epidermal Growth Factor - PDGF Platelet Derived Growth Factor     

苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达

将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３’端缺失,得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度（１．８ｋｂ、２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动子和终止子调控之下,并与选择标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３’－腺苷酸转移酶,具壮观霉素抗性）表达盒相连;以烟草叶绿体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段,构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪把Ｂｔ基     

中国人扩张型心肌病与受磷蛋白基因关系的研究

受磷蛋白（phospholamban）是心肌收缩的一个重要调节因子,可抑制心肌肌浆网钙ATPase的活性、降低其对钙的亲和力。正常情况下,受磷蛋白可被不同的蛋白激酶磷酸化从而解除其肌浆网钙ATPase的抑制作用。国外两个DCM家系研究发现受磷蛋白基因突变与DCM的发生有关,研究目的旨在探讨中国人群心肌特异性受磷蛋白基因突变与特发性扩张型心肌病发病的关系。收集60例确诊的特发性扩张型心肌病患者临床资料,采集血样本并分离白细胞和提取基因组DNA。应用PCR扩增肌特异性受磷蛋白基因片段,经测序检测基因突变的存在。结果显示60例扩张型心肌病人受磷蛋白基因开放阅读框未发现突变,仅有两例患者出现阅读框3′部分非翻译区分别离终止密码153和173位单个碱基T的缺失。两例患者终止密码后非翻译区单个碱基T的缺失据分析并无实际意义。因此我们认为绝大部分中国人扩张型心肌病的发病可能与受磷蛋白基因突变无关。Abstract: Phospholamban (PLB) is a prominent regulator of myocardial contractility and a reversible inhibitor of the cardiac sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase activity. In normal cardiac muscles, phospholamban can be phosphorylated at distinct sites by various protein kinases and release its inhibition to sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase. The studies of pedigrees have shown dilated cardiomyopathy (DCM) is related with mutation of PLB. The aim of present study is to investigate the relationship between mutation of PLB gene and DCM. Sixty patients with idiotic DCM were enrolled in present study. The clinical data were collected, including clinical symptoms, ECG and echocardiography. Peripheral blood samples of all these subjects were collected to extract genome DNA. The fragments of PLB gene were amplified by PCR and PCR fragment sequencing was performed to study weather mutation of phospholamban gene exists. phospholamban gene did not show any mutation in these patients. Most Chinese DCM patients may not be related with mutation of PLB gene.