鼠源性人乳腺癌单链抗体库的构建与乳腺癌相关抗体的筛选

目的:获得乳腺癌的噬菌体呈现型单链抗体(scFv)库,筛选与乳腺癌细胞特异结合的抗体,为乳腺癌的诊断和治疗奠定基础。方法:用乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、MDA-MB-435免疫BALB/c小鼠,取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区(VH和VL)基因,经Linker连接形成scFv基因片段。将scFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E的连接产物转化大肠杆菌TG1。用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体。选用乳腺癌细胞系MCF-7和人正常肝细胞系HL02做正负差异的筛选细胞,通过5轮筛选,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合MCF-7细胞的scFv。结果:构建了1个库容为1.3×106的单链抗体库。筛选到2株与MCF-7细胞有较高结合活性的噬菌体-单链抗体scFv-873和scFv-874。数据库搜索表明这2株单链抗体基因是与以往抗体序列不同的新基因。用Westernblot检测了这2株单链抗体在琥珀密码子非抑制型菌株TOP10中的表达情况。结论:筛选到2个与乳腺癌细胞结合特异性较好的单链抗体,为乳腺癌的诊断和治疗研究奠定了基础。     

中国组织化学与细胞化学杂志第11卷(2002年)第1期-第4期总目次

周围神经 43ｋＤ蛋白免疫化学研究顾晓松等 (1)…………纽蛋白在原代培养脊髓神经元的分布及其与神经元形态的相关性荣　明等 (4)……………………马桑内酯慢性致痛大鼠海马星形胶质细胞的激活赵珠峰 (8)………………………………………………ｃ ｅｒｂＢ 2单克隆抗体Ａ18在乳腺癌中表达特性的研究吴　强等 (14)……………………………细胞间粘附分子 1在人皮肤血管瘤的表达伍静文等 (2 0 )…………………………………………慢性捆绑紧张致大鼠记忆受损及海马神经元ＮＯＳ和Ｔａｕ5的变化———组织化学与免疫组织化学研究李宏莲等 (2 4)……     

《生物技术通讯》1996年总目次(第7卷 总第25～28期)

研究报告 应用噬菌体抗体库技术制备特异抗人纤维蛋白鼠单链抗体··················……黄君健,俞炜源,黄翠芬等(封 鼠抗人纤维蛋白抗体单链Fv片断的三维结构模建······························……王国力,刘士辉,黄君健等(6) 鼠抗人纤维蛋白抗体单链F、一片段的人源化分子设计························……王国力,刘士辉.黄君健等(1。) t一PA Kl区的同源模建及K川、g*区与赖氨酸相互作用的研究············……王国力,刘士辉,黄君健等(1劝 Hela…     

生物工程学报2004年第20卷总目录

第 1期观点与展望人源化抗体研究历程及发展趋势林　芸　阎锡蕴 ( 1)…………………………………………………………………………………………………综述核基质结合序列 (MAR)与基因表达调控张可伟　王健美　郑成超 ( 6)………………………………………………………………………………研究报告基因工程用绿色荧光蛋白监测转基因植物中选择标记基因的消除贾洪革　吕玲飞　庞永奇　陈晓英　方荣祥 ( 10 )………………………………………大肠杆菌ptsG基因敲除及其缺陷株生长特性研究韩　聪　张惟材　游　松　黄留玉 ( 16)…………………………     

甲状腺特异性抗体与乳腺癌相关性研究的系统评价 *

摘要 目的：评价血清中甲状腺特异性抗体的存在对乳腺癌患病风险的影响,为评估乳腺癌的预后及制定治疗方案提供理论依 据。方法： 计算机检索 Medline （ 1950~2012 ） 、 EMBASE （ 1949~2012 ） 、 Pubmed （1946~2012 ） 、 Current Contents Connect （ 1998~2012 ） 和 Google Scholar （ 1992~2012 ） 等英文数据库。 收集关于甲状腺特异性抗体与乳腺癌(Breast Cancer, BC)相关性分析的横断面研究 或队列研究。 按 Cochrane 系统评价方法, 评价所纳入研究的文献质量, 有效数据采用 RevMan5.2 软件进行系统评价。结果： 最终 纳入 6 项研究, 共计 6945 例患者。系统评价结果显示： 乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体 （包括甲状腺过氧化物酶抗体 anti-TPO 和甲状腺球蛋白抗体 anti-TG ）的存在而增加 （anti-TPO OR 2.51, 95%CI: 1.94-3.25; anti-TG 2.67, 95%CI: 1.65-4.33 ）。结 论： 乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体的存在而增加,甲状腺特异性抗体可能为乳腺癌预后的评估以及治疗原则的制 定提供理论基础     

信息管理系统对医院药品管理规范化的作用及意义

目的：评价血清中甲状腺特异性抗体的存在对乳腺癌患病风险的影响,为评估乳腺癌的预后及制定治疗方案提供理论依据。方法：计算机检索Medline（1950~2012）、EMBASE（1949~2012）、Pubmed（1946~2012）、Current Contents Connect（1998~2012）和Google Scholar（1992~2012）等英文数据库。收集关于甲状腺特异性抗体与乳腺癌（Breast Cancer, BC）相关性分析的横断面研究或队列研究。按Cochrane 系统评价方法,评价所纳入研究的文献质量,有效数据采用RevMan5.2 软件进行系统评价。结果：最终纳入6 项研究,共计6945 例患者。系统评价结果显示：乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体（包括甲状腺过氧化物酶抗体anti-TPO 和甲状腺球蛋白抗体anti-TG）的存在而增加（anti-TPO OR 2.51,95%CI： 1.94-3.25;anti-TG 2.67, 95%CI： 1.65-4.33）。结论：乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体的存在而增加,甲状腺特异性抗体可能为乳腺癌预后的评估以及治疗原则的制定提供理论基础。     

《生物技术通讯》1999年分类索引(第10卷总第37～40期)

研究报告人源抗ＥＰＯ基因工程抗体重链可变区的克隆和鉴定……………………………………刘一平袁斌邓继先等（１）人红细胞生成素受体胞外区克隆及序列测定…………………………………………………张映辉邓继先卢一凡（５）ＬＰＳ、ＴＮＦα刺激ＰＢＬ诱导ＴＲＡＩＬ表达的初步研究………………………………………王梁华朱玉平潘卫等（９）人ＴＲＡＩＬ基因ｃＤＮＡ的克隆与序列鉴定………………………………………………刘孟珉萨其拉鱼咏涛等（１４）人成骨蛋白－１成熟肽基因在大肠杆菌中的克隆与表达………………………………………………     

蛇志 2006年第18卷 总目次

第1期(2006年3月)抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定………………………………………………………………………刘四红,侯力强,孔天翰(1)广西圆斑蝰蛇毒凝血因子X激活物在实验鼠体内的促凝血作用研究……………………………………………王艳妮,左从林,陈明霞,等(6)蝮蛇毒蛋白C激活物对凝血系统的影响…………………………………………………………………………张受涛,文尚武,周志泳,等(11)抗海蛇毒血清用于海蛇咬伤早期急救与监护的实验研究…………………………………………………………厉瑛,张黎明,桂莉,等(15)降纤酶治疗慢性肺…     

甲状腺特异性抗体与乳腺癌相关性研究的系统评价

目的：评价血清中甲状腺特异性抗体的存在对乳腺癌患病风险的影响,为评估乳腺癌的预后及制定治疗方案提供理论依据。方法：计算机检索Medline（1950～2012）、EMBASE（1949-2012）、Pubmed（1946-2012）、Current Contents Connect（1998-2012）和Google Scholar（1992-2012）等英文数据库。收集关于甲状腺特异性抗体与乳腺癌（BreastCancer,Bc）相关性分析的横断面研究或队列研究。按Cochrane系统评价方法,评价所纳入研究的文献质量,有效数据采用RevMan5．2软件进行系统评价。结果：最终纳入6项研究,共计6945例患者。系统评价结果显示：乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体（包括甲状腺过氧化物酶抗体anti-TP0和甲状腺球蛋白抗体anti—TG）的存在而增加（anti—TP00R2．51．95％CI：1．94—3．25;anti—TG2．67,95％CI：1．65—4．33）。结论：乳腺癌的风险会随血清中甲状腺特异性抗体的存在而增加,甲状腺特异性抗体可能为乳腺癌预后的评估以及治疗原则的制定提供理论基础。     

生物工程学报2003年第19卷总目录

第 1期综述蛋白质的氧化重折叠张渝英　杨开宇 ( 1)………………………………………………………………………………………………………………后生遗传修饰及其对动物克隆的影响李文雍　郁卫东　陈清轩 ( 9)…………………………………………………………………………………研究报告基因工程糖多孢红霉菌同源片段长度与染色体重组率关系的研究张部昌　赵志虎　王以光　于秀琴　刘传暄　马清钧 ( 13 )…………………………人源抗HBsAg单链抗体在巴氏毕赤酵母中的表达熊　盛　任向荣　唐永红　粟宽源　余宙耀　罗　勇　王一飞　李久香 ( 19)…     

《激光生物学报》2007年第16卷总目次

第一期S波段高功率微波对眼组织结构和功能影响的实验研究陈鹏,梁洁,马萍,等(1)………………………………………激光照射对中华大蟾蜍原肠胚蛋白质表达的影响张楠,时永香,白增亮,等(6)……………………………………………不同应变对骨髓间充质干细胞系细胞骨架影响的研究赵红斌,张西正,吴金辉,等(12)………………………………………催乳素受体基因与羊驼繁殖性能关系的初探张巧灵,姜俊兵,贺俊平,等(18)…………………………………………………特异性高免卵黄抗体与鸡柔嫩艾美尔球虫致病关系的研究郑明学,泰刚,古少鹏,等(22)……………………     

Her2抗体与MMAE偶联物的制备及生物活性研究

目的:制备Her2抗体与海兔毒素MMAE的偶联物,检测该抗体-药物偶联药物(ADC)对于乳腺癌细胞的抑制作用。方法:将Her2抗体通过一个可降解的linker与小分子毒素(MMAE)连接起来,形成抗体药物偶联物(ADC)。通过细胞学试验检测Her2抗体-MMAE偶联物对于肿瘤细胞抑制、细胞凋亡和细胞周期的作用。结果:通过优化偶联条件,ADC偶联率达80%以上。肿瘤细胞生长抑制的实验显示ADC药物的IC50比单克隆抗体的IC50明显降低,作用效果更加明显。细胞凋亡和细胞周期实验结果表明,ADC药物72h诱导细胞凋亡率高达40%,单一抗体药物则仅为20%。结论:该ADC药物具有很好的抑制乳腺癌细胞的作用。     

中国微生态学杂志2007年第19卷总目次

论著两株乳杆菌对牙鲆体表及消化道粘液的粘附特性……………………………………………………………刘倩,邵占涛,陈营(1)新生儿肠道双歧杆菌数量影响因素与其婴儿期腹泻关系………………………………………………………刘泉波,刘作义(4)四君子汤及其纳米制剂对微生态失调小鼠的调整作用………………………………………………鞠宝玲,陆叶,唐小云,等(6)艰难梭菌细胞毒素B功能区的克隆及序列分析…………………………………………………………刘红升,张清华,蒋知新(9)PBP2a多克隆抗体制备及其胶乳凝集检测法的建立……………………………………     

乳腺癌细胞EGFR表达水平与长春瑞滨敏感度的相关性研究

乳腺癌是较早开始个体化治疗的肿瘤之一。表皮细胞生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR）6~表达与乳腺癌组织学分期、生长速度呈正相关,可作为乳腺癌患者预后的指标之一。临床上,长春瑞滨（Vinorelbine,NVB）~要作为耐药性晚期乳腺癌的挽救性化疗药物,单药治疗亦具有一定疗效。该研究结果发现,乳腺癌组织EGFR表达与NVB的敏感性相关（P=0．001）,而与紫杉醇、阿霉素及5．氟尿嘧啶无相关性。EGFRFH性乳腺癌细胞MDA-MB-435s对NVB耐药,而EGFR阳性细胞MCF-7则敏感．但是EGFR中和性抗体会降低敏感性。进一步研究发现,NVB会引起MCF-7表面EGFI滚达上调,以及胞内ERK1／2激酶的磷酸化,且这一效应会被抗EGFR抗体部分抑制。研究结果表明,乳腺癌细胞对NVB的敏感性与膜表面EGFR表达水平相关,提示EGFR可作为NVB治疗敏感性的预测分子。     

生物化学与生物物理进展1989年第16卷(第1—6期)总目次

专论与综述RNA研究的一些新进展—RNA生物功能的多样 性··························~·······……刘望夷王德宝(2)多胺代谢与调节,·····························……缪金明等(12)植物单链核糖体失活蛋白的研究概况······……郑硕(16)植物细胞培养生产天然产物的研究进展···……韩迎山(19)s0D脂质体及临床应用·,················……陈雨亭等(23)交联法在分子生物学研究中的应用·········……贺福初(27)胶体金标记抗体技术·····…     

抗ANXA1自身抗体ELISA检测方法的建立及应用

[目的]建立检测抗膜联蛋白A1(Annexin A1,ANXA1)自身抗体的ELISA方法,初步探索其临床应用。[方法]设计ANXA1特异性抗原肽并人工合成,用抗原肽制备可检测ANXA1抗体的ELISA板,通过回归方程的建立、精密度的测定和抗干扰能力的验证,建立检测ANXA1抗体的ELISA方法。用该法检测临床乳腺癌及健康对照患者血清中的抗ANXA1自身抗体。[结果]该方法在抗体浓度0.025～0.400μg/mL范围内线性良好,R²=0.994,连续5次批内和批间变异系数%均小于10%,对乳糜标本和溶血标本的检测相对误差均小于10%,用于乳腺癌患者抗ANXA1自身抗体的诊断上,实验组抗ANXA1自身抗体表达显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]建立了抗ANXA1自身抗体检测的ELISA方法,线性范围0.025～0.400μg/mL,变异系数小于10%,对乳糜标本和溶血标本检测的相对误差小于10%,应用于临床初步显示乳腺癌患者血清中抗ANXA1自身抗体高表达。     

噬菌体抗体库的构建及抗乳腺癌细胞单链抗体的筛选

构建抗人乳腺癌细胞MCF 7的噬菌体单链抗体库 ,从中筛选MCF 7细胞特异性单链抗体。用MCF-7细胞免疫BALB C小鼠 ,取脾脏 ,提取总RNA ,用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链 (V_H)和轻链 (V_L)可变区基因 ,经重叠PCR(SOE-PCR) ,在体外将V_H和V_{L连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,电转化至大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体超感染 ,构建噬菌体单链抗体库。从该抗体库中筛选特异性识别MCF-7细胞的噬菌体单链抗体 ,将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌TOP10进行可溶性表达。成功地构建了库容为12×10⁶ 的抗MCF-7乳腺癌细胞的单链抗体库 ,初步筛选到了与MCF 7细胞特异性结合的scFv,Westernblot检测表明 ,在大肠杆菌TOP10中实现了单链抗体可溶性表达}     

鼠源抗人乳腺癌MRP1/ABCC1噬菌体Fab抗体库的构建

鼠源抗人乳腺癌多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1/ABCC1)噬菌体Fab抗体库的构建首先是利用乳腺癌组织匀浆液作为免疫原免疫BALB/c小鼠,成功免疫后提取小鼠脾组织的总RNA逆转录为cDNA。然后设计小鼠IgG各亚型的特异性Fab引物,PCR扩增Fd和L基因并依次连接到噬菌体载体pComb3中。重组体pComb3-Fab转化至E.coli XL1-Blue菌中,最后经辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建噬菌体Fab抗体库。以化学合成的MRP1/ABCC1膜表位10肽为抗原进行3轮淘选、富集,对淘选后获得的各级噬菌体抗体库进行ELISA检测和鉴定。成功获得的抗MRP1/ABCC1-10肽三级噬菌体Fab抗体库将为抗人乳腺癌MRP1/ABCC1 Fab抗体的制备提供保障。     

骨唾液酸蛋白在乳腺癌骨转移中的研究进展

骨唾液酸蛋白（Bonesialoprotein,BSP）是细胞外基质中一种高度磷酸化和糖基化分泌性蛋白,它是多种癌症（乳腺癌,前列腺癌和肺癌等）进程中的重要参与者。乳腺癌细胞转染实验和裸鼠移植模型证明过表达BSP可以促进乳腺癌细胞骨转移。BSP抗体和反义核酸均可有效抑制乳腺癌细胞骨转移的发生,故BSP有可能成为一种新的诊断和治疗乳腺癌骨转移的靶蛋白。     

乳腺肿瘤中抗酸菌L型感染的研究

用ＩＫ抗酸染色和卡介苗抗体免疫组化染色等方法对乳腺癌（９７例）,和乳腺纤维腺瘤（２１例）进行了研究。结果发现Ｌ型阳性例数在乳腺癌和乳腺纤维腺瘤间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。乳腺癌中抗酸菌Ｌ型主要分布于癌细胞巢及其间质内,常集聚成堆,且该处癌细胞有不同程度变性或坏死。乳腺纤维腺瘤中的抗酸菌Ｌ型主要存在于间质巨噬细胞中。并讨论了抗酸菌Ｌ型感染与乳腺癌发生的可能关系。