人源单克隆抗人免疫缺陷病毒1型抗体Fab段基因的获得

应用噬苏体抗体库技术有效地筛选出了多株抗ＨＩＶ－１人源单克隆抗体。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从ＨＩＶ－１感染者外周血淋巴细胞中扩增抗体轻重链可变区基因,插入载体ｐＣＯＭＢ３,建立噬菌体抗体库。分别以ＨＩＶ－１ｇｐ１２０和ｇｐ１６０为固相抗原,经过多轮筛选,从中获得了多株抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｇｐ１２０和ｇｐ１６０的单克隆抗体Ｆａｂ段基因。抗ＨＩＶ特异性噬菌体抗体随抗体库的筛选高度富集,抗     

BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇｐ１２０全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ中多角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ－ｇｐ１２０,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Ｓｆ９中高效表达了ＨＩＶ－１的外膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果一致,证明表达了２种糖基化程度不同的ｇｐ１２０。     

中国HIV-1流行毒株的DNA疫苗的初步研究

为研制针对我国ＨＩＶ－１流行毒株的艾滋病毒疫苗,构建了具有代表性的ｇａｇ和ｇｐ１２０核酸疫苗,进行了初步的小鼠免疫实验。结果初步显示：（１）免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠可以产生ＨＩＶ－１特异性的体液和细胞免疫;（２）ｇａｇ和ｇｐ１２０基因联合免疫可以同时诱发针对ｇａｇ和ｇｐ１２０的细胞和体液免疫反应,而且效果比各自单独免疫要好;（３）Ｂ亚型ｇｐ１２０基因免疫可以诱发识别Ｃ亚型ｇｐ１２０抗原的ＣＴＬ反应。本     

HIV－1感染初始阶段的分子机制

ＨＩＶ－１感染初始阶段的分子机制项秉懿（第四军医大学分子生物学研究所,西安７１００３２）关键词艾滋病,人类免疫缺陷病毒－Ｉ型,包膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＣＤ４受体,感染ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＩＶ－１ＩｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩ...     

mrp多基因家族

1992年 ,Ｃｏｌｅ等在耐阿霉素小细胞肺癌细胞株Ｈ6 9/ＡＲ的研究中发现 ,该细胞不表达Ｐ ｇｐ ,但表达另一种多药耐药蛋白ＭＲＰ1。氨基酸序列分析发现 ,ＭＲＰ1与Ｐ ｇｐ仅有1 5 %的同源性 ,两者同属ＡＢＣ超家族 ,与Ｐ ｇｐ相似 ,ＭＲＰ也是一种“药物泵” ,但其介导的耐药方式与Ｐ ｇｐ的不同。此后发现 ,人类ｍｒｐ基因家族至少含有 6个成员 :ｍｒｐ1编码的多药耐药蛋白 ,ｍｒｐ2或ｃＭＯＡＴ (ｔｈｅｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｆｉｃｏｒｇａｎｉｃａｎｉｏｎｔｒａｎｓ ｐｏｒｔｅｒ)编码的管状多特异性有机阴离子…     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的克隆和全序列测定

：Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因在杆状病毒分子生物学和杆状病毒表达系统研究中具有重要的作用,以ＡｃＭＮＰＶ ｇｐ６４ 基因为探针,杂交显示Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因定位于其基因组Ｂａｍ ＨＩ酶切的４ ．２ｋｂ 和７－４ｋｂ 片段上,克隆阳性片段,重组质粒分别命名为ｐＺＤＢＭ４２ 和ｐＺＤＢＭ７４ 。对重组质粒进一步杂交,将片断更精确定位于０－４５ｋｂ 片段、０－７５ｋｂ 片断上和１－１５ｋｂ 片断上,将三个片断ＤＮＡ 进行序列分析,结果表明：Ｂｍ ＮＰＶ 的ｇｐ６４ 基因的开放阅读框（ＯＲＦ） 有１５３０ 核苷酸,编码５０９ 个氨基酸。序列同源性比较显示,Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因和ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４ 基因的核苷酸序列同源性达８４－３ ％ ,氨基酸序列同源性达９４－７ ％ 。Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因Ｃ 端的信号肽序列和Ｎ 端的锚定序列对于Ｂｍ ＮＰＶ 表达系统的改进具有重要的意义。     

人类免疫缺陷病毒1型感染中的抗体中和反应

本文介绍了人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）感染中有关中和抗体研究的新近进展,包括中和抗体反应的特异性,如中和表位的种类和表达,ＨＩＶ中和反应的机制等。地ＨＩＶ－１ｇｐ１２０和ｇｐ４１分子的研究结果资料,作了较为详尽的描述。文中尚提出了ＨＩＶ感染预防疫苗研制的途径。     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型膜糖蛋白gp160人单链抗体

人获得性免疫缺陷综合症（ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ,简称ＡＩＤＳ）主要是由人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ１）引起的严重危害人类健康的传染病。ＨＩＶ研究的最新进展揭示了膜糖蛋白ｇｐ１２０与其受体和中和抗体复合物晶体结...     

人类免疫缺陷病毒1／2型抗体检测酶联免疫试剂盒的研制

采用二聚体合成肽（ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｐ２４和ＨＩＶ－２ｇｐ３６）包被酶标板条制备成固相抗原,与鼠抗人ＩｇＧ单克隆抗体酶标记物、底物ＴＭＢ及阴阳性参考血清配套制备成ＨＩＶ抗体ＥＩＡ试剂盒,专供检测人血清或血浆ＨＩＶ１／２抗体之用。以荷兰、韩国及万泰试剂作为对照,用该试剂盒对检定所的Ｐａｎｅｌ标准及献血员１５５５０例（其中ＨＣＶ抗体阳性１２８例,ＨＢｓＡｇ阳性４６例）进行检测,四种试剂对检定所Ｐａｎｅｌ标准的１３份阳性血清均呈阳性反应,２８份阴性血清均为阴性;献血员１５５５０例,四种试剂对其中１份血清均呈阳性反应,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验证实为阴性,四种试剂的阴性检出率均为９９．９９％。连续制备三批试剂经中国药品生物制品检定所检定,所检项目全部合格;同时委托检定所进行临床考核,４７份阳性血清全部呈阳性反应,１５０份阴性血清全部为阴性。说明该试剂盒具有很好的敏感性和特异性。     

化学趋化因子受体在HIV感染中的作用及其在AIDS治疗中的应用价值

化学趋化因子受体作为协同受体,为人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）进入细胞所必需。其中ＣＸＣＲ４被亲Ｔ细胞的病毒株利用,而ＣＣＲ５被亲巨噬细胞的病毒株利用,它们是大多数病毒株利用的协同受体。协同受体和ＣＤ４一起形成复合受体,ｇｐ１２０与之结合后发生构象改变,使ｇｐ４１暴露出来,引起膜的融合。ＨＩＶ协同受体发现为治疗艾滋病开辟了新的途径。利用趋化因子拮抗剂、单克隆抗体和天然配体封闭趋化因子受体可阻止ＨＩＶ     

含有Epstein—Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游,构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０,并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合。Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ法证实,表达的抗原分子量为３５０ｋＤ。用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ２Ｂ柱     

一种新的促心肌肥大细胞因子——心脏营养素—1

心脏营养素－１是新发现的一种具有促心肌肥大作用的活性物质,为白细胞介素－６细胞因子家族的新成员,其受体由三部分组成,包括ｇｐ１３０、ｇｐ１９０和分子量为８０ｋＤ的ＣＴ－１特异受体。ＣＴ－１与受体结合,可促进未成熟心肌细胞的存活和增殖,并诱导心肌细胞肥大,可能在多种心血管疾病所致的心肌肥大和心力衰竭的发病中具有重要的意义 。     

融合gp67信号肽的慈菇蛋白酶抑制剂基因在蚕体内表达

用ＡｃＭＮＰＶ的ｇｐ６７信号肽与慈菇蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ２）融合,并整合到昆虫病毒表达载体ＢｍＢａｃＰＡＫ６中,受多角体蛋白基因启动子控制。慈菇蛋白酶抑制剂在蚕体内成功地得到了高效表达。比较了ｇｐ６７信号肽和慈菇蛋白酶抑制剂信号肽在昆虫表达系统中对表达产物的影响,发现表达产物都能分泌到血淋巴中,表达量很相似,但这两种信号肽在表达过程中都没有被切除,且不同信号肽对表达产物的生物活性有很大影响。     

含有Epstein-Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游,构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０,并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法证实,表达的抗原分子量为３５０ｋＤ．用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱纯化后,注射经普鲁卡因预处理的Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠的四头肌,观察到ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ抗体水平比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ低,而ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ的持续时间比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ长。采用表达ＥＢＶＭＡ的质粒ＤＮＡ与ＣＨＯ细胞表达的ＭＡ蛋白免疫小鼠,均获得抗ＥＢＶＭＡ的抗体。     

IL－6受体结构与功能的研究进展

ＩＬ－６是一个多功能的细胞因子,其生物学作用在很大程度上受ＩＬ－６受体（ＩＬ－６Ｒ）结构和功能的影响。ＩＬ－６Ｒ由两条多肽链组成,即配体结合链ｇｐ８０和信号传导链ｇｐ１３０。它们在结构和功能上既有分工又有合作。两种亚基组成的高和力ＩＬ－６Ｒ是介导细胞效应所必需的。ＩＬ－６Ｒα中的造血功能区属于造血因子受体超家族成员,它决定着结合ＩＬ－６的能力,然而ｇｐ１３０则是多种细胞因子共用的信号传递分子,其胞     

HIV—1 SF2株env基因（120）在大肠杆菌中的表达

运用基因重组技术,将ＨＩＶ－１ ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组,构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ,并在大肠杆菌（Ｅ．ＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达,经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ反应证实,该重组蛋白与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。     

gp130的结构,功能信信号传导

ｇｐ１３０是ＩＬ－６家族细胞因子共用的受体和信号转导子,弄清ｇｐ１３０结构与功能的关系以及ｇｐ１３０介导的信号途径,对于阐明ＩＬ－６家族不同因子作用的特异性具有十分重要的意义。本文就ｇｐ１３０结构、功能及其信号传导等方面的最新进展进行了简要综述。     

一种新的促心肌肥大细胞因子——心脏营养素

心脏营养素１（ｃａｒｄｉｏｔｒｏｐｈｉｎ１,ＣＴ１）是新发现的一种具有促心肌肥大作用的活性物质,为白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｓ６,ＩＬ６）细胞因子家族的新成员,其受体由三部分组成,包括ｇｐ１３０、ｇｐ１９０和分子量为８０ｋＤ的ＣＴ１特异受体。ＣＴ１与受体结合,可促进未成熟心肌细胞的存活和增殖,并诱导心肌细胞肥大,可能在多种心血管疾病所致的心肌肥大和心力衰竭的发病中具有重要的意义     

小鼠白血病病毒致白血病机制的研究进展

小鼠白血病病毒分为两类;（１）急性转化ＭｕＬＶ：Ａｂｅｌｓｏｎ,ＭｕＬＶ 其代表,基因组含有ｖ－ａｂｌ癌基因,编码产生Ｐ１２０＾ｇａｇ－ａｂｌ磷蛋白,诱发小林巴细胞白血病,（２）慢性转化ＭｕＬＶ：极大多数ＭｕＬＶ均属于此类。基因组不携有ｖ－ｏｎｃ癌基因为其特点,Ｍｏｌｏｎｅｙ－ＭｕＬＶ（Ｍ－ＭｕＬＶ）是研究这类ＭｕＬＶ致瘤机制的良好模型。白血病生成中包括原癌基因激活、ＭＣＦ重组体形成、１５号染色体     

HIV—1gp41基因的高效表达及表达产物的纯化

为了获得高效表达的人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ１）ｇｐ４１蛋白,从而为ＨＩＶ１基因工程诊断抗原的国产化打下基础,用ＰＣＲ的方法从ＨＩＶ１全基因序列中扩增出编码ｇｐ４１Ｎ端的６９０ｂｐ片段。经酶切后,克隆到ｐＥＴ２８ａ载体中,再将重组质粒转化到表达宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导,高效表达出ｇｐ４１蛋白。间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、ＳＤＳＰＡＧＥ电泳证实,该表达产物具有良好的抗原性和特异性,且表达量约占总菌体蛋白的４５％。重组蛋白经金属鏊合纯化,纯度达９９％。