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人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 总被引:10,自引:0,他引:10
采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用20μg/ml植物血球凝集素(PHA)和500U/ml重组人白细胞介素2(IL-2)联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总RNS,经反转录PCR获得了人胸腺素α原cDNA;将之克隆入pUC19中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体pBV220,转化大肠杆菌DH5α,观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素α原上游引物中A、T含量 相似文献
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根据已克隆的唾液酸转移酶的保守区的序列,以人胎肝mRNA为模板扩增出150bp的片段并测序。其中一个片段(s38)与已克隆的唾液酸转移酶的活性中心有57%~97%的同源性。根据s38的序列合成寡核苷酸并标记后用作探针筛选人胎肝cDNA文库。从文库中分离了一个编码α2,3-唾液酸转移酶的cDNA。该cDNA序列含一个编码340个氨基酸的开放读框,推导的氨基酸序列与人颌下腺(Galβ1,GalNAc。Α2,3-唾液酸转移酶相同,与猪颌下腺α2,3-唾液酸转移酶有83.2%的同源性。表明从人胎肝cDNA文库中分离的cDNA所编码的蛋白为Galβ1,3GalNAcα2,3-唾液酸转移酶。 相似文献
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人胎肝唾液酸转移酶基因的克隆及测序 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已克隆的唾液酸转移酶的保守区的序列,以人胎肝mRNA为模板扩增出150bp的片段并测序。其中一个片段(s38)与已克隆的唾液酸转移酶的活性中心有57%~97%的同源性。根据s38的序列合成寡核苷酸并标记后用作探针筛选人胎肝cDNA文库。从文库中分离了一个编码α2,3唾液酸转移酶的cDNA。该cDNA序列含一个编码340个氨基酸的开放读框,推导的氨基酸序列与人颌下腺Galβ1,3GalNAcα2,3唾液酸转移酶相同,与猪颌下腺α2,3唾液酸转移酶有832%的同源性。表明从人胎肝cDNA文库中分离的cDNA所编码的蛋白为Galβ1,3GalNAcα2,3唾液酸转移酶 相似文献
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目的:研究人ZP3基因的结构及构建人ZP3基因原核表达系统。方法:从人卵巢组织中分离出mRNA并以此作为模版,通过RT—PCR扩增出人ZP3基因cDNA片段,然后将其克隆在pUC18质粒上,并对克隆片段进行序列分析。结果:共克隆到ZP3-A(1300bp)、ZP3-B(1180bp)、ZP3-C(1200bp)和ZP3-D(1080bp)4种不同长度的人ZP3基因cDNA片段,对其中最长的ZP3-A片段的测序结果表明,它包含了人ZP3基因阅读框内的全部序列,与NCBI Sequence Viewer中公布的人ZP3 mRNA序列(NM-007155)相比较,在1275bp长的编码区内只有一个碱基不同,两者同源性达到99.92%。结论:本研究克隆到的ZP3-A cDNA片段确是人ZP3基因无疑。 相似文献
6.
运用电子克隆技术获得油菜中一个蔗糖转化酶基因eDNA序列,同时根据此段序列设计引物以油菜eDNA为模板进行扩增。经测序得到证实。采用生物信息学方法,对该基因编码蛋白从氨基酸组成、基本理化性质、跨膜结构域、信号肽导肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位等方面进行了预测和分析。结果表明:该基因eDNA序列长度为2150bp,包含一个1779bp开放阅读框,编码592个氨基酸;该编码蛋白含有蔗糖转化酶的多个典型的保守结构域。同源比对分析显示,该基因编码的氨基酸序列与拟南芥等植物的蔗糖转化酶基因具有高度的相似性,进一步确定该蛋白为蔗糖蛋白酶。研究结果为该基因进一步的实验克隆,表达分析,功能鉴定奠定基础。 相似文献
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β—银环蛇毒素A链cDNA的克隆和表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从银环蛇毒腺中抽提总RNA,RT-PCR扩增编码β-银环蛇毒素A链的cDNA,克隆并测定了全序列。一个新的cDNA得以克隆,其编码一个27个氨基酸的信号肽和一个120个氨基酸的成熟蛋白。该成熟蛋白和其他β-银环蛇毒素A链一样,具有13个位置固定的半胱氨酸,而且和这些A链具有很高的同源性。此外,以同样的引物,从眼镜蛇毒腺总RN中。克隆到编码眼镜蛇PLA2前体的cDNA。将β-银环蛇毒素A链和眼镜蛇P 相似文献
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克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因,为探讨HCV的变异和致癌作用,研制丙肝疫苗作准各。从1名西安市丙肝感染血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCVRNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为eDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc、pGEM-T-HCVel和pGEM-T-HCVe2克隆。将以上3个克隆用特定的酶降解,用连结酶进行连接,构建了HCV结构区的完整克隆。将克隆好的质粒pGEM-T-HCVjg从两端双向测广手,得到完整的HCV结构基因eDNA核苷酸序列,总长度为2238bp,与已发表的HCV序列长度一致,未发现缺失或移码突变,序列中间亦未发现转录终止子。本序列与HCVla、lb序列核苷酸的同源性分别为91.8%、84.5%;氨基酸的同源性分别为94.2%、86.3%;应为HCVla亚型。以上结果说明我国西部地区存在HCVla亚型,所克隆HCV结构区eDNA克隆可以用于基因工程表达。 相似文献
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周世宁 《生物化学与生物物理进展》1988,15(5):372-376
本文分析了一个细胞粘菌(Dictyostelium discoideum)基因组克隆的核苷酸顺序。这段顺序编码259个氨基酸,并含有一基因5’端非编码区结构。非编码区结构特点及氨基酸顺序表明这是一个新的肌动蛋白基因。基因组中约有15个内切酶消化所得的片段含有与此克隆同源的顺序。 相似文献
12.
携带pWR 590-BCA4质粒的大肠杆菌经发酵培养,提取出人胰岛素原融合蛋白。该融合蛋白经BrCN降解,氧化磺化及QAE-Sepha-dex A-25和Sephadex G-50分离所得到的磺化胰岛素原,经折叠和分离得到了人胰岛素原(HPI)。HPI 再经酶切转化为人胰岛索(HI)和C-肽,HI 的得率为5 m8/L,并获得了HI 的晶体。HPI 和HI 的氨基酸组成、N-端顺序和C-末端分析均与预期值相符。HI 的RIA 活性为猪胰岛素的99%,整体活性为26~27U/mg。 相似文献
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利用序列比对、拼接和软件预测等生物信息学方法成功克隆了家犬RNF141基因,其eDNA序列全长1450bp,含有一个编码231个氨基酸的完整开放阅读框。起始密码子侧翼序列符合Kozak规则。与人的RNF141基因进行比对,核酸序列同源性为90%,编码氨基酸序列相似性达96%。 相似文献
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目的为了获得长白山白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。方法根据GeneBank自眉类凝血酶eDNA5.和3保守序列设计了引物,通过RT-PCR从白眉蝮蛇乌苏里亚种毒腺TotalRNA中扩增得到1条长714bp的特异cDNA片段,将该cDNA片段重组到SimpleTvector,转化进E.coliJM109competentcell,阳性克隆委托生物公司测序,利用生物信息学方法对测序结果进行分析。结果该特异性片段与蛇毒类凝血酶同源性为95%,它为一个开发阅读框架,其编码的蛋白质序列与其他蛇毒类凝血酶序列同源性为94%,与其他蛇毒类凝血亲缘关系非常近。结论本实验获得了一种新型白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。 相似文献
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猪胰岛素前体在酵母Kluyveromyces lactis中的分泌表达及其转化为人胰岛素 总被引:1,自引:0,他引:1
通过将包括猪胰岛素前体(PIP)基因在内的表达框架克隆至质粒pKD1衍生的两种载体上而在酵母Kluyveromyceslactis中分泌表达猪胰岛素前体。根据放射免疫测定结果,猪胰岛素前体的表达水平为20~30mg/L。猪胰岛素前体经过转肽被转变为基因工程人胰岛素。分析结果表明,来自K.lactis的人胰岛素,其氨基酸组成、晶体形状和生物活力与天然胰岛素相同。 相似文献
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以高转移性人肺巨细胞癌细胞系PG的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人尿激酶受体(uPAR)的cDNA。将其亚克隆至pGEM-T载体后进行测序,结果表明,我们所克隆的uPAR cDNA片段与文献报道的人uPAR基因编码区cDNA序列高度同源(达99%),其中第705、746和755碱基分别由A、A和G替代了文献中的T、G和A,从而导致了第249和252位氨基酸由Gly和Glu变为Asp和Gly,我们已将此序列申请登录GenBank,登录号为AF257789。 相似文献
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利用序列比对、拼接和软件预测等生物信息学方法成功克隆了家犬RNFl41基因,其eDNA序列全长1450bp,含有一个编码231个氨基酸的完整开放阅读框.起始密码子侧翼序列符合Kozak规则.与人的RNFl41基因进行比对,核酸序列同源性为90%.编码氨基酸序列相似性达96%. 相似文献
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大鼠脑α1型甲状腺激素受体基因cDNA克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
使用RT-PCR方法克隆了Wistar大鼠脑α1型甲状腺激素受体的cDNA,得到包含起始及终止密码子共1233bp、编码409个氨基酸的受体全长编码离列,酶切分析后,将此特异DNA片段重组入质粒pUC系统,得重组质料pTRA。双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序。 相似文献
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Met-Lys-双C肽人胰岛素原基因的构建表达及分离纯化 总被引:2,自引:0,他引:2
应用 P C R 定点突变方法构建编码 M et Lys 双 C 肽人胰岛素原基因,并在大肠杆菌中以包含体方式获得表达 表达产物经还原、重组、 Sephadex G 75 分离纯化,获得 M et Lys 双 C 肽人胰岛素原,经胰蛋白酶与羧肽酶 B的酶解, Resource T M Q 阴离子交换柱层析分离制备得人胰岛素,其放免活性、受体结合活性均与猪胰岛素相同 相似文献
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利用电子克隆方法获得两条橡胶草异戊烯焦磷酸异构酶基因(IDI)的eDNA序列和编码区基因组序列,分别命名为TkIDI1和TklDl2,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行系统进化、亚细胞定位、活性位点、高级结构等方面的预测和分析。结果显示,TklDI1的eDNA序列长度为980bp,包含一个696bp的开放读码框(ORF),编码232个氨基酸,预测定位于内质网或叶绿体上;TkIDl2的eDNA序列长度为1038bp,包含一个843bp的ORF,编码281个氨基酸,预测定位于线粒体或叶绿体;而他们的截短转录本蛋白定位于胞质中,且都具有过氧化物酶体定位信号。结构分析表明TkIDI1和TkIDI2与植物IDI蛋白同源,活性位点保守,高级结构与其他植物的IDI均具有高度的相似性。 相似文献