苹果果肉质膜微囊主动运输Ca2+的Ca2+-ATP酶特性

应用４５Ｃａ２ ＋ 示踪法研究了苹果果肉质膜微囊依赖于Ｃａ２＋ 的ＡＴＰ 酶（Ｃａ２＋ＡＴＰ酶）活性与Ｃａ２＋ 运输之间的关系及激素对该酶活性的影响。结果表明：Ｃａ２ ＋ＡＴＰ 酶存在于质膜上并受载体Ａ２３１８７ 刺激而活性增加,该酶活性与依赖于ＡＴＰ 的Ｃａ２ ＋ 运输依抑制剂ＥＢ、游离Ｃａ２＋ 和ＡＴＰ浓度的变化并呈极为相似的饱和动力学特征;而其ＥＢ 半抑制浓度,Ｃａ２＋ 和ＡＴＰ 半饱和浓度分别为０ ．１ ,０ ．１ 和５０ μｍｏｌ／Ｌ,从而证实了正是Ｃａ２＋ＡＴＰ酶推动苹果果肉质膜微囊的Ｃａ２＋ 的主动运输。生长素与萘乙酸均可促进苹果果肉质膜微囊Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性和Ｃａ２＋ 吸收,而赤霉素则无此作用。     

颈髓损伤后线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系

为了探讨颈髓损伤后颈髓线粒体系列酶活性变化与线粒体功能的关系,采用Ａｌｅｎ法造成猫颈髓损伤,观察颈髓损伤后线粒体Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及线粒体呼吸功能的变化。结果显示：颈髓损伤后２ｈ至７２ｈ,Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性、ＳＯＤ活性明显降低,而线粒体呼吸控制率（ＲＣＲ）、磷氧比值（Ｐ／Ｏ）、氧化磷酸化效率（ＯＰＲ）也明显下降。表明颈髓损伤后Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋－ＡＴＰ酶、Ｎａ＋,Ｋ＋－ＡＴＰ酶、ＳＯＤ活性与线粒体功能密切相关,提示颈髓线粒体的病理生理改变在颈髓损伤后继发性损害过程中起重要作用。     

抗寒剂CR—4对冬小麦幼苗质膜钙泵（Ca^2＋—ATPase）的稳定作用

通过磷酸铈沉淀的细胞化学观察揭示,常温下生长的冬小麦幼苗的Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性主要定位在质膜上,同时,水浸种和抗寒剂浸种的小麦质膜Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性没有差异。然而,小麦幼苗经－７℃冰冻处理１２小时和２４小时后,则表现明显的区别：水浸种的小麦幼苗质膜Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性明显下降,直至完全失活,细胞的精细结构也同时被破坏;而经抗寒剂浸种的小麦幼苗质膜Ｃａ２＋ＡＴＰ酶仍维持较高的活性,细胞结构也保持完整,显示抗寒剂对质膜Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ酶起着明显的稳定作用。     

粉防己碱对大鼠心肌缺血再灌注时心肌ATP酶活性的影响

实验旨在观察在体大鼠短暂缺血后心肌膜ＡＴＰ酶活性的变化及粉防己碱（Ｔｅｔ）的作用。分离缺血１５ｍｉｎ、再灌注２ｈ后及在缺血再灌注前给Ｔｅｔ的大鼠心肌粗制质膜和内质网,测定质膜Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性。结果表明,心肌缺血１５ｍｉｎ后二酶活性均明显降低,分别为假结扎组的６３．６％和７２．６％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性有所恢复,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的７２．１％（Ｐ＜０．０１）,而Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性则进一步下降,再灌注３０ｍｉｎ时为假结扎组的５０．４％（Ｐ＜０．０１）,再灌注后２ｈ二酶活性分别升高至假结扎组的８０．９％和６５．３％（Ｐ＜０．０１）。在缺血前２０ｍｉｎ分别给予Ｔｅｔ６４．２和９６．３μｍｏｌ／ｋｇ及硝苯啶（０．２３μｍｏｌ／ｋｇ）,能明显减少内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性的降低。结果提示心肌膜ＡＴＰ酶活性的降低可能参与了短暂心肌缺血所致再灌注损伤的发生机制,Ｔｅｔ可减少缺血和／或再灌注时内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性降低。     

苹果果肉质膜微囊主动动输Ca^2＋的Ca^2＋—ATP酶特性

应用＾４５Ｃａ＾２＋示踪法研究了苹果果肉质膜微囊依赖于Ｃａ＾２＋的ＡＴＰ酶（Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶）活性与Ｃａ＾２运输之间的关系及激素对该酶活性的影响。结果表明：Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶存在于质膜上并受载体Ａ２３８７刺激而活性增加,该酶活性与依赖于ＡＴＰ的Ｃａ＾２＋运输依抑制剂ＥＢ,游离Ｃａ＾２＋和ＡＴＰ浓度的变化并呈极为相似的饱和动力学特征,而其ＥＢ半抑制浓度,Ｃａ＾２＋和ＡＴＰ半饱和浓度分别为０．１     

跨膜Ca^2＋梯度对肌质网Ca^2＋—ATP酶调节的特异性

我们曾报道跨膜Ｃａ＾２＋梯度可通过膜脂影响肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的构象和活性。本文就跨膜Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的构象和活性。本文就跨膜Ｃａ＾２＋梯度对肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的调节是否具有特异性作进一步研究。结果表明这种特异性表现在两方面：一是跨膜Ｃａ＾２＋梯度对肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶功能的调节不能归结于跨膜Ｃａ＾２＋深度梯度所导致的膜电位的作用,离子载体ＦＣＣＰ可消除跨膜电位但并不影响肌     

心肌细胞Na^＋—Ca^2＋交换电流

心肌细胞上存在Ｎａ＋Ｃａ２＋交换系统,以３Ｎａ＋：１Ｃａ２＋方式交换,产生Ｎａ＋Ｃａ２＋交换电流（ＩＮａＣａ）。分子生物学实验证明：Ｎａ＋Ｃａ２＋交换体有１１个跨膜片段,其功能受多种因素的调节。膜片钳制技术研究表明Ｎａ＋Ｃａ２＋交换电流与心肌细胞动作电位形成和心律失常的产生有关。通过对Ｎａ＋Ｃａ２＋交换系统的深入研究,将有助于我们研制和开发作用于Ｎａ＋Ｃａ２＋交换电流的特异性较强的药物,对治疗心律失常和保护心肌细胞,减少心肌细胞的损伤有重要意义。     

大鼠海马神经元Na~ Ca~(2 )交换电流在低氧时的变化

目的：探讨在低氧性脑损伤发生过程中,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换体在细胞内钙超载中的作用。方法：采用全细胞膜片钳方法,在急性分离海马神经元上观察低氧对Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流的电流电压（ＩＶ） 曲线的影响。结果：在整个膜电位水平,Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流幅值均不同程度的增加,在正膜电位水平呈现一显著的外向电流。１０ ｍＶ 时,电流幅值从（９２ ．８３ ±２０．８）ｐＡ上升到（１３０ ．６７ ±２６．８８）ｐＡ（ Ｐ＜０ ．０５） ,而在５０ ｍ Ｖ,其电流幅值从（－ ７４ ．６７ ±１１ ．８４）ｐＡ上升到（－ ５８ ．５±１０ ．７１）ｐＡ（Ｐ＜ ０ ．０５）。结论：低氧时Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换电流呈外向性,这种改变有利于低氧后通过Ｎａ＋Ｃａ２＋ 交换的外向转运方式排出细胞内钠,并交换钙进入细胞     

低温,高pH胁迫对水稻幼苗根系质膜,液泡膜ATP酶活性的影响

以耐冷性不同的两个水稻品种为材料,比较研究了幼苗根系质膜、液泡膜ＡＴＰ酶对低温（８℃）及高ｐＨ（８．０）胁迫的反应。结果表明：水稻根细胞质膜和液泡膜上均存在Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶,但活性远低于Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶。耐冷品种武育粳３号经低温（８℃）处理２ｄ,根系质膜和液泡膜Ｈ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶海性均明显升高,至冷处理１２ｄ,Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性有所下降,但仍与对照     

铝和铝＋钙对小麦幼苗根尖质膜,液泡膜微囊ATP酶和膜流动性？…

研究了铝和铝＋＿钙对小麦功苗根尖质膜、液泡膜微囊Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活性及共动力学参数和膜流动性的影响。在质膜和液泡膜微囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾２＋－ＡＴＰ囊制剂中加入１．０ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＩ＾３＋（ＡＩＣＩ３）时,Ｈ＾＋－ＡＴＰ酶、Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶、Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶活笥和酶促反应的Ｖｍａｘ及膜流动性下降,而酶     

热应激大鼠心肌钙代谢的变化及其机理探索

心肌细胞内钙离子对心功能的调节有着极其重要的作用。本研究观察了不同热应激强度下大鼠心肌细胞内质网、线粒体中钙含量,Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力,内质网Ｃａ２＋主动转运速率及心肌ＡＴＰ含量的变化。研究结果表明,热应激大鼠心肌细胞内质网、线粒体钙含量随肛温升高显著下降;大鼠肛温达４２℃时,其钙含量分别较对照下降３２．２％和４６．５％;心肌细胞内质网和线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力亦明显降低,线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力下降幅度更为激烈。热应激大鼠心肌内质网Ｃａ２＋主动转运速率和Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力变化趋势相同,且两者呈密切相关关系。热应激大鼠心肌ＡＴＰ含量亦随肛温升高大幅度降低,当动物肛温超过４２℃时,其可降至对照动物的３７．５％;热应激大鼠心肌ＡＴＰ含量的变化与内质网Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力关系密切。实验结果提示：热应激心肌细胞质膜受损所致细胞Ｃａ２＋主动转运功能紊乱及心肌能量代谢障碍是心肌钙稳态失调的主要原因;心肌细胞钙代谢紊乱是诱导心肌细胞严重受损,导致热应激机体心血管功能失调,甚至心功能衰竭的重要机制     

神经革苷脂GM3对肌质网Ca^2＋—ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ３参入肌质网膜后Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果表明：ＧＭ３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用。当参入的ＧＭ３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的激活作用最大。     

DOPE、DOPC对重组去脂肌质网Ca~(2+)-ATPase活力和构象的影响

经磷脂酶Ａ２ 去脂的肌质网Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 重组于不同比例的二油酰磷脂酰胆碱（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ,ＤＯＰＣ） 和二油酰磷脂酰乙醇胺（Ｄｉｏｌｅｏｙｌｐｈｏｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ,ＤＯＰＥ） 形成脂酶体,研究了不同磷脂环境中Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 转运活力。结果表明,ＤＯＰＣ 和ＤＯＰＥ 分别有利于ＡＴＰ 水解和Ｃａ２ ＋ 的转运,ＤＯＰＥ 可以增强Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的ＡＴＰ水解和Ｃａ２ ＋ 转运之间的偶联效率。利用内源荧光、荧光淬灭及Ｆｏｒｓｔｅｒ 能量转移原理测定Ｃａ２ ＋ －ＡＴＰａｓｅ 相应的构象变化, 发现随着ＤＯＰＥ／ ＤＯＰＣ 比例的改变使Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 构象发生相应的变化。     

稀土对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活性的影响

研究了镧、轧、镱及四种配合物对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响．结果表明,低浓度的Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对肌质网Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶有激活作用;随着其浓度的增加,它们对酶活性的抑制程度增大;而Ｌａ~（３＋）,Ｇｄ~（３＋）和Ｙｂ~（３＋）对纯化的Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶则只有抑制作用;Ｇｄ─Ｎ─乙酰─缬氨酸和Ｙｂ─丙氨酰代丙氨酸配合物对肌质网膜和纯化的Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响与Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）类似,但其激活程度和抑制程度比Ｇｄ~（３＋）及Ｙｂ~（３＋）小;Ｇｄ─ＤＴＰＡ和Ｙｂ－ＤＴＰＡ对Ｃａ２~（＋）－ＡＴＰ酶活性基本无影响。     

外源性神经节苷脂对人－肝癌培养细胞内钙的作用及其方式

本工作采用荧光探针Ｆｕｒａ－２ＡＭ观察了外源性神经节苷脂ＧＭ３和ＧＤ３对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌培养细胞钙的影响,证明ＧＭ３和ＧＤ３均能升高细胞内钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）,但程度上有极大差异。１０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＭ３或１．０ｎｍｏｌ／ｍＬＧＤ３可使［Ｃａ２＋］ｉ上升高是明显,与对照相比［Ｃａ２＋］ｉ分别增加２１５～２５０％和４２％。进一步用Ｖｅｒａｐａｍｉｌ阻断钙通道和内质网钙释放、去除细胞外Ｎａ＋以抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换以及去除细胞外Ｃａ２＋在无外钙内流等系统观察了ＧＭ３和ＧＤ３的作用方式,结果提示ＧＭ３升高［Ｃａ２＋］ｉ的机制是一个同时增加内质网钙释放、激活钙通道并伴有质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶激活的综合结果;而ＧＤ３则主要抑制Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换系统。     

铝胁迫对小麦根系液泡膜ATP酶、焦磷酸酶活性和膜脂组成的效应

研究了铝胁迫下耐铝性不同的两个小麦品种根细胞液泡膜ＡＴＰ 酶、焦磷酸酶活性和膜脂的变化。与对照相比,经２０ 和１００μｍｏｌ／Ｌ的ＡｌＣｌ３ 处理后,耐铝品种Ａｌｔａｓ ６６ 的液泡膜Ｈ＋ＡＴＰ 酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ 酶活性迅速下降; 铝敏感品种Ｓｃｏｕｔ ６６ 液泡膜Ｈ＋ＡＴＰ酶和Ｃａ２＋ＡＴＰ 酶活性则在２０ μｍｏｌ／Ｌ 时增加,１００ μｍｏｌ／Ｌ时下降。焦磷酸酶活性在Ａｌｔａｓ６６ 中下降,在Ｓｃｏｕｔ ６６ 中增加。与对照相比,在ＡｌＣｌ３ ２０ μｍｏｌ／Ｌ处理时,液泡膜磷脂含量增加,Ａｌｔａｓ ６６ 中的增加比Ｓｃｏｕｔ ６６ 更为明显;１００ μｍｏｌ／Ｌ 时,Ｓｃｏｕｔ ６６ 液泡膜磷脂含量迅速下降,而Ａｌｔａｓ ６６ 下降不显著。两品种小麦在铝处理后根液泡膜糖脂结合半乳糖含量均高于对照,而Ａｌｔａｓ ６６ 中的含量又高于Ｓｃｏｕｔ６６ 。铝处理后,两品种小麦根液泡膜的棕榈酸和油酸含量增加,亚麻酸含量下降, 不饱和指数也随之下降,其中Ｓｃｏｕｔ６６ 下降更为明显。表明Ａｌｔａｓ ６６ 根细胞液泡膜比Ｓｃｏｕｔ６６ 对铝胁迫有更强的适应能力。     

神经节苷脂GM_3对肌质网Ca~（2＋）－ATP酶活力的调节

研究了神经节苷脂ＧＭ_３参入肌质网膜后Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶活力的变化,结果表明：ＧＭ_３参入肌质网膜后,对肌质网Ｃａ~（２＋）ＡＴＰ酶活性（ＡＴＰ水解活力与转运活力）有明显的激活作用．当参入的ＧＭ_３浓度为８μｍｏｌ／Ｌ、参入时间为１２０ｍｉｎ、温度为３０℃时,对Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰ酶的激活作用最大．     

急性缺氧小鼠脑组织Na~＋，K~＋─ATP酶和Ca~（2＋）─ATP酶活性的变化

急性缺氧小鼠脑组织Ｎａ~＋,Ｋ~＋─ＡＴＰ酶和Ｃａ~（２＋）─ＡＴＰ酶活性的变化张锦楠,阎淑莲,刘永利,吕国蔚,甘午君（首都医学院化学教研室,首都医学院神经生物学研究室北京１０００５４）我们过去的工作发现,动物重复密闭缺氧后,对缺氧、低氧分压和氰化物作?..     

Amiloride和耗竭细胞内糖原对心肌缺血再灌注损伤的影响

本工作在离体大鼠等容收缩心脏模型上,观察在缺血前给予ａｍｉｌｏｒｉｄｅ和耗竭心肌细胞内糖原以减少Ｎａ＋－Ｈ＋交换的底物对缺血后再灌注损伤的影响,以探讨Ｎａ＋－Ｈ＋交换和Ｎａ＋－Ｃａ２＋交换机制在心肌缺血后再灌注损伤中的发病学意义。结果表明,Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ及耗竭心肌细胞内糖原均能提高心脏血液动力学的恢复,心肌组织乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出及丙二醛（ＭＤＡ）生成减少,线粒体中谷胱甘肽过氧化物酶有较高的活性;心肌细胞内Ｎａ＋,Ｃａ２＋超负荷减轻。Ａｍｉｌｏｒｉｄｅ的心肌保护作用可能与其抑制再灌注初期的细胞膜Ｎａ＋－Ｈ＋交换机制有关。耗竭细胞内糖原因减少缺血末细胞内Ｈ＋的堆积,使Ｎａ＋－Ｈ＋交换底物减少而抑制Ｎａ＋－Ｈ＋交换机制。     

鸭肫平滑肌肌球蛋白的提纯及其ATP酶性质的研究

从鸭肫肌肉中分离纯化了平滑肌肌球蛋白,并对平滑肌肌球蛋白分子的亚单位组成和平滑肌肌球蛋白的ＡＴＰ酶性质进行了分析研究。鸭肫平滑肌肌蛋白的Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力与溶液的离子强度有关。在低于０．２０ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＬ浓度时,酶活力很低;大于０．３０ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＬ浓度时,酶活力较高,Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶有两个最适ｐＨ值。Ｋ＾＋／ＥＤＴＡ－ＡＴＰ酶活力随ＫＣＬ浓度升高而增加。肌动蛋白激活的磷酸化肌球