脑胆碱能刺激引起的促钠排泄反应和蓝斑ChAT-IR的变化

目的：观察大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱（CBC）后蓝斑胆碱能神经元活性变化及其与促钠排泄反应的关系。方法：选用SD雄性大鼠通过整体实验和免疫组化方法,观察侧脑室给予氨甲酰胆碱（0．5μg）和俄阿托品（30μg）后肾排钠量的变化及蓝斑胆碱乙酰转移酶（CHAT）免疫反应活性的变化。结果：侧脑室给予氨甲酰胆碱后40min,肾排钠量显著增加,蓝斑的CHAT-IR明显增强（P〈0．05）;阿托品预处理后可明显抑制上述反应。结论：蓝斑的胆碱能神经元参与侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应。     

脑胆碱能刺激引起的促钠排泄反应和肾的ChAT-IR的变化

目的：观察肾胆碱能系统在大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱（CBC）诱导的促钠排泄反应中的作用。方法：通过整体实验和免疫组化的方法观察大鼠侧脑室注射CBC 0.5μg后,肾排纳量的变化和肾的但碱乙酰转移酶（ChAT）免疫反应活性的变化;阿托品（30μg）阻断脑胆碱能M受体后,对上述效应的影响。结果：侧脑室给予CBC后40min,肾排钠量显著增加,肾近曲小管ChAT-IR显著增强（P〈0．05）;阿托品阻断后,上述反应显著减弱（P〈0．05）。结论：肾小管上皮细胞的胆碱能系统可能参与脑胆碱能刺激引起的肾促钠排泄反应。     

大鼠脑室内注射氨甲酰胆碱对肾钠,钾,水排出的影响

在麻醉大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱（ＣＢＣ）引起显著的促钠排泄、促钾排泄和利尿反应（Ｐ＜０．０５）,其中促钠排泄反应与剂量之间呈量效关系（ｒ＝０．９９９７,Ｐ＜０．０５）。由脑室注射ＣＢＣ（２．７４×１０－３μｍｏｌ）引起的上述反应可以被胆碱能Ｍ受体阻断剂阿托品或Ｎ受体阻断剂六甲双胺预处理完全阻断（Ｐ＜０．０５）。同样,ＣＢＣ的肾脏效应也可被肾上腺素能α受体阻断剂酚妥拉明预处理所部分阻断（Ｐ＜０．０５）。上述结果表明脑室注射ＣＢＣ引起的促钠排泄、促钾排泄和利尿反应是刺激了脑胆碱能Ｍ或Ｎ受体,有部分效应可能继发刺激去甲肾上腺素能α受体。     

AT1受体在脑胆碱能刺激引起的蓝斑TH免疫反应活性变化中的作用

目的：探讨大鼠侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱（carbachol,CBC）后蓝斑儿茶酚胺能神经元活性和血管紧张素能AT1受体表达的变化以及阻断ATl受体对上述变化的影响。方法：选用SD雄性大鼠,利用免疫组织化学方法,观察侧脑室注射氨甲酰胆碱（0．5μg）和／或losartan（20μg）后40min,蓝斑的酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）及AT1受体免疫反应活性的变化。结果：侧脑室注射氨甲酰胆碱（0．5pg）后40min,蓝斑的TH及ATl受体免疫反应阳性神经元数目明显增多（P〈0．05）,免疫染色强度明显增强（P〈0．05）。losartan预处理后蓝斑的TH免疫反应活性和AT1受体表达明显下降（P〈0．05）。结论：侧脑室注射胆碱能激动剂氨甲酰胆碱对蓝斑儿茶酚胺能神经元具有兴奋作用,AT1受体表达增强;阻断脑血管紧张素能AT1受体可下调氨甲酰胆碱在蓝斑诱导的上述变化。     

AT1受体在脑内胆碱能刺激引起的钠水排泄反应中的作用

目的和方法 :本工作通过整体实验和免疫组化的方法 ,观察脑血管紧张素能AT1受体在侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应中的作用和下丘脑室旁核TH IR的变化。结果 :用脑血管紧张素能AT1受体阻断剂Losar tan( 2 0 μg)预处理 ,可部分阻断侧脑室注射氨甲酰胆碱引起的促钠排泄反应和利尿作用 (P <0 .0 5)。免疫组化实验显示侧脑室给予氨甲酰胆碱后 40min ,下丘脑室旁核 (PVH)、室周核 (Pe)、弓状核 (Arc)和下丘脑前区后部 (AHP)的酪氨酸羟化酶 (TH )免疫反应活性明显增强。Losartan预处理后侧脑室再注射氨甲酰胆碱 ,除PaPo的免疫反应活性未发生明显变化外 ,上述其余神经核团的TH免疫反应活性明显下降。结论 :在脑胆碱能刺激引起的钠水排泄反应中有AT1受体的参与 ;阻断脑血管紧张素能AT1受体对胆碱能刺激引起Arc、Pe和AHP的儿茶酚胺能神经元兴奋性有下调作用。提示脑血管紧张素能和儿茶酚胺能神经通路在下丘脑室旁核等脑区共同参与介导了脑内胆碱能刺激引起的促钠排泄反应 ,同时血管紧张素能神经元还影响儿茶酚胺能神经元的功能活动     

氨甲酰胆碱通过M2毒蕈碱受体增加豚鼠心肌细胞钠钙交换电流

本文旨在研究氨甲酰胆碱(carbachol, CCh)对豚鼠心肌的正性变力性机制。用Axon200A膜片钳放大器观察CCh 对电压钳制下的豚鼠心肌细胞L-型钙电流(ICa)和钠钙交换电流(INa/Ca)的效应。结果表明, CCh(100 μmol/L)分别使正向INa/Ca从对照组的(1.2 ± 0.1) pA/pF 增加到(2.0 ± 0.3) pA/pF,使反向 INa/Ca 从对照组的(1.3 ± 0.5) pA/pF 增加到(2.1 ± 0.8) pA/pF (P<0.01)。CCh对ICa无影响。CCh 对INa/Ca的激动作用可被阿托品和methoctramine所阻断。以上结果提示, CCh 对豚鼠心脏的正性变力作用是通过激动了钠钙交换,而且是 M2 毒蕈碱受体所介导的。     

氨甲酰胆碱增加大鼠心室肌细胞收缩机制的初步研究

目的:本文研究非选择性M受体激动剂氨甲酰胆碱(Cch)对心肌细胞收缩的作用,并同时观察L-型钙流,探讨其机制.方法:以分离大鼠的单个心室肌细胞为对象,采用膜片钳和单细胞收缩测量技术,在35℃恒温,细胞外钙离子浓度1.8 mmol/L,0.2 Hz,1.0 Hz刺激下测量细胞收缩幅度和ICa(L)、INa/Ca.结果:①大鼠心肌细胞收缩与刺激频率呈负相关;②选择△L0.2 Hz/△L1.0 Hz≥1.25(n=6)的细胞给予1.0 Hz的刺激,100 μmol/L Cch增加大鼠心室肌细胞收缩28%.③ Cch作用能被非选择性M受体阻滞剂阿托品阻滞,选择性M1受体激动剂MCN-A-343 100 μmol/L对细胞收缩无影响.④ 100 μmol/L Cch对ICa(L)无影响,但增加从 10 mV复极到-40 mV所产生的晚期尾电流,提示INa/Ca加大.结论:Cch能加强大鼠心室肌细胞收缩,它的作用由M2受体介导,其机制可能是通过加强INa/Ca,增加肌质网(SR)内的钙内容和钙释放,导致细胞收缩加强,而非通过L-型钙流.     

氨甲酰胆碱与心得安对γ线12Gy照射小鼠胃排空影响

用染料比色方法观察了拟胆碱剂氨甲酰胆碱(Carbachol)及肾上腺素能β受体阻断剂心得安(Inderal)对γ线12Gy照射小鼠胃对液体排空能力的影响。结果证明,氨甲酰胆碱对正常及12Gy照射小鼠胃排空皆有明显加速作用,且对照射鼠胃排空的加速作用更为显著,1.6-6.2μg/鼠氨甲酰胆碱可使照射小鼠胃排空率基本恢复至正常水平。0.2mg/鼠心得安对正常及照射小鼠的胃排空率皆无明显影响。上述结果进一步证实,胆碱能神经在照后胃排空改变中起着重要作用。     

兔室旁核对血量扩张引起促钠排泄与利尿的作用

在室旁核(PVN)假损毁兔与PVN损毁兔血量扩张(VE)引起尿流量增加,峰值分别为0.59±0.09与0.31±0.03 ml/min (P<0.01),排钠量增加峰值分别为66.76±6.74与36.05±3.44μmol/min (P<0.01),而在PVN假损毁兔与PVN完好兔对VE的反应无显著差别(P>0.05),表明PVN损伤可明显减弱 VE 引起的促钠排泄与利尿效应.颈迷走神经切断并不能改变 PVN损伤的上述作用.双侧肾神经切断兔损毁 PVN对VE引起促钠排泄效应无显著影响,但显著减弱其利尿效应 (P<0.02).PVN损毁对VE时肾小球滤过率(GFR)与肾血浆流量(RPF)无显著影响.结果表明PVN参与VE通过迷走传入神经引起促钠排泄与利尿反应的调节,而肾交感传出神经参与其中促钠排泄的作用.     

兔脊髓α受体对血量扩张引起肾交感神经活动抑制和促钠排泄的作用

在窦主动脉去神经麻醉兔观察阻断脊髓α受体对血量扩张引起肾交感神经活动（RSNA）抑制和促钠排泄反应的影响。兔脊髓蛛网膜下腔注射a肾上腺素能受体阻断剂酚妥拉明与人工脑脊液后,血量扩张引起RSNA抑制分别为（－25．4±5．4）％与（－42．5±5.2）％（P＜0.05）;兔脊髓蛛网膜下腔注射α1受体阻断剂哌唑嗪与人工脑脊液后血量扩张引起RSNA抑制分别为（－29．3±6.1）％与（－42．5±5.2）％（P＜005）。结果表明,阻断脊髓α受体或α1受体均可减弱血量扩张引起RSNA抑制。脊髓注射哌唑嗪后血量扩张引起促钠排泄与利尿反应也显著减弱（P＜005）。     

肾神经在脑室内注射高张盐溶液引起尿钠增多反应中的作用

在清醒家兔中,侧脑室内注射200μl 高张盐溶液引起血压升高,心率减慢,肾神经放电抑制和尿钠排出明显增多等反应,但肾血流量没有明显改变。切断双侧肾神经后,脑室内注射高张盐溶液引起的升压反应仍存在,但尿钠排出增多的反应不再出现。在肾神经完整的动物中,事先于侧脑室内注射纳洛酮(20μg/kg)对脑室内注射高张盐溶液引起的促尿钠排出作用没有明显影响。另外,电针“足三里”穴或电刺激腓深神经均不能进一步加深侧脑室内注射高张盐溶液引起的肾神经放电抑制,也不能使尿钠排出量进一步增加。以上结果表明,侧脑室内注射高张盐溶液引起的促尿钠排出作用依赖于肾神经的完整,内阿片肽在此反应中可能不起重要作用。     

大鼠脑胆碱能系统对血量扩张引起利尿与尿钠排泄的作用

本工作在清醒大鼠侧脑室注射胆碱能药物,观察脑胆碱能系统对血量扩张引起利尿与尿钠排泄的作用。侧脑室注射人工脑脊液后进行血量扩张引起尿流量、排钠量和排钾量显著增加(P<0.01)。侧脑室注射胆碱能 M 受体阻断剂阿托品后,血量扩张引起尿流量、排钠量和排钾量增加的效应比注射人工脑脊液组的均显著减弱(P<0.01);而侧脑室注射胆碱能 N 受体阻断剂六烃季胺后,血量扩张引起尿流量、排钠量和排钾量增加的效应与注射人工脑脊液组的相比无显著差异(P>0.05)。侧脑室注射人工脑脊液或阿托品大鼠的肾小球滤过率(GFR)与肾血浆流量(RPF)在血量扩张后均无显著变化(P>0.05)。上述结果表明:大鼠脑胆碱能M 受体参与血量扩张引起利尿与尿钠排泄反应的调节。脑 M 受体的这种作用不是通过改变GFR 和 RPF,而可能是通过未明神经液递机制直接影响肾小管对水钠的重吸收。     

异丙肾上腺素和氨甲酰胆碱对心肌延迟后除极的影响

用乙酰毒毛旋花子甙元2.0×10~(-7)mol/L,在绵羊心室浦肯野纤维产生延迟后除极(DAD)为实验模型,观察异丙肾上腺素与氨甲酰胆碱对DAD的影响。异丙肾上腺素1.0—3.0×10~(-8)mol/L能增加DAD幅值,为剂量依赖性,并可诱发出触发型心律失常。氨甲酰胆碱2.0×10~(-6)mol/L单独作用对DAD幅值无影响,然而在异丙肾上腺素增强DAD幅值或产生触发型心律失常后,同样浓度的氨甲酰胆碱能显著地减小DAD幅值以及消除触发型心律失常。但氨甲酰胆碱对由高钙、氨茶碱和组胺等所增加的DAD幅值却无抑制作用。以上结果表明,氨甲酰胆碱能拮抗异丙肾上腺素引起的DAD增强作用,可能与M受体的激活,并继而降低膜上β受体激活时所提高的腺苷酸环化酶活性有关。     

提前接受光照对小鼠视网膜TH和bFGF表达的影响

目的在通过手术使小鼠提前睁眼接受光照,并成功诱发近视的基础上,进一步研究TH和bFGF在视网膜中的表达变化,以探讨早产近视的发病机理.方法实验用新生第4d的C57BL/6J小鼠,通过手术分离单侧上、下眼睑,使之提前睁眼并接受正常光照,在第14d检查两眼屈光力,应用RT-PCR和免疫组化方法,检测视网膜中bFGF和TH的表达.结果提前接受光照能诱导形成-9.77±0.09D的相对近视.RT-PCR结果显示提前光照小鼠视网膜TH和bFGFmRNA含量明显减少(t值分别为4.316和12.189,P<0.01).免疫组织化学显示TH免疫阳性反应主要分布在节细胞层、内网层和内核层,bFGF免疫阳性反应主要分布在内网层及其两侧的部分节细胞和内核层细胞,另在内网层和视锥视杆层也有微弱表达.免疫组织化学染色显示提前光照小鼠视网膜中TH和bFGF的表达量明显下降.结论研究表明新生小鼠提前光照后,其视网膜TH和bFGF的表达都明显下降,提示TH和bFGF与早产近视的形成有密切关系.     

在清醒家兔中电针可易化脑室内注射高张溶液的促尿钠排出作用

在清醒家兔中,侧脑室内注射高张盐溶液50μl能引起血压升高、心率减慢、肾神经放电抑制、尿量和游离水清除率降低、尿渗透压和尿渗透压/血浆渗透压比值升高,而尿钠排出量、渗透清除率、肾血流量和肾小球滤过率则无明显改变。在电针刺激相当于“足三里”和“上巨虚”穴的部位时,脑室内注射高张溶液后肾神经放电抑制的程度加深,放电抑制的时间延长,同时尿钠排出量和渗透清除率显著增加;但血压、心率、游离水清除率、尿渗透压和尿渗透压/血浆渗透压比值等指标的改变与不予电针的动物相同。电针本身并不引起尿钠排出增多。在电针的动物中,给予阿片受体拮抗剂纳洛酮或特培诺啡对于脑室内注射高张盐溶液的促尿钠排出效应没有影响;但在切除双侧肾神经后,脑室内注射高张盐溶液不再能引起尿钠排出增多。上述结果提示,电针可能加强脑室内注射高张盐溶液引起的肾神经活动抑制的效应,从而使肾脏排钠增加。     

中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素和催产素能神经元的比较分布

应用PAP-PAAP双重免疫组化染色程序在同一切片上进行两种肽能物质的定位,观察了中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内VP能和OT能神经元的比较解剖学分布,发现:视上核被视束分成主部和交叉后部。在视上核主部,其头侧部几乎仅含OT能神经元胞体,中间部VP能胞体出现并逐渐增多,尾侧部VP能胞体数目明显超过OT能胞体。在明显含有两种胞体的中间部和尾侧部,OT能胞体多位于背内侧,VP能胞体多位于腹外侧;在视上核交叉后部,其头侧部以VP能胞体为主,且多位于背外侧,OT能胞体多位于腹内侧。中间部OT能胞体多位于内侧,VP能胞体多位于外侧。尾侧部OT能胞体多位于背、腹两侧,VP能胞体则多位于中间;在室旁核,其头侧部几乎全由OT能胞体构成。中间部,VP能胞体出现并逐渐增多,OT和VP能胞体分别主要位于内、外侧。尾侧部两种神经元胞体较明显地分为内、外两群,内侧群主要为OT能胞体,外侧群几乎全为VP能胞体,该群的头侧半又可分为背腹两个亚群,至尾侧半,此二亚群渐合并。本文讨论了OT和VP能神经元在中国树鼩和大鼠视上核和室旁核内的比较分布。     

中国树鼩下丘脑视上核和室旁核内加压素能和催产素能神经元的形态计量学分析

采用免疫组织化学ＰＡＰ／ＤＡＮ－镍加强技术和形态计量法研究了中国树鼩下丘脑加压素（ＶＰ）能和催产素（ＯＴ）能视上核主部（ＳＯＮｐ）、视上核交叉后部（ＳＯＮｒ）和室旁核（ＰＶＮ）的平均矢轴长度,ＳＯＮｐ,ＳＯＮｒ和ＰＶＮ内ＶＰ能和ＯＴ能神经元胞体截面积的平均值;ＳＯＮｐ,ＳＯＮｒ和ＰＶＮ的ＶＰ能和ＯＴ能神经元总数;各校团的各个系列节段内ＶＰ能和ＯＴ能神经元的比较计数。发现,ＳＯＮｐ前１／３部分ＯＴ能神经元明显多于ＶＰ能的,而后２／３部分则相反;ＳＯＮｒ前２／３部分ＶＰ能神经元明显多于ＯＴ能的,而后１／３部分两者差别不明显;ＰＶＮ前２／３部分ＯＴ能神经元明显多于ＶＰ能的,而后１／３部分则相反。本文就中国树下丘脑ＳＯＮ和ＰＶＮ内ＶＰ能和ＯＴ能神经元的形态计量学资料与大鼠的进行了比较。     

大鼠第三脑室及中脑水管多巴胺能触液神经元的分布

目的观察大鼠第三脑室、中脑水管及中缝背核内多巴胺能触液神经元的分布情况.方法应用CB逆行追踪、TH免疫组织化学和CB/TH免疫荧光双重标记技术,观察多巴胺能触液神经元在间脑及中脑内的分布情况.结果 TH免疫阳性触液神经元分布在第三脑室尾侧部和中脑水管全程的腹侧室管膜上及室管膜内,其胞体呈倒置梨形、圆形或椭圆形、多角形和梭形;在中缝背核内可见少量CB/TH免疫荧光双重标记的远位触液神经元;另在正中隆起部位TH免疫阳性神经末梢含量丰富.结论大鼠第三脑室、中脑水管及中缝背核内存在多巴胺能触液神经元,其在脑-脑脊液之间的信息传递中有着重要的作用.     

垂体在刺激脑内渗透压感受器引起的肾脏反应中的作用

实验在α氯醛糖和氨基甲酸乙酯混合麻醉的大鼠中进行。脑室内注射高张盐水(icv.HS)后,肾血浆流量、肾小球滤过率、尿量、尿钠排出量、尿钾排出量和渗透物质清除率均增加,游离水清除率下降。去除垂体后,icv.HS不再能引起上述肾脏反应。另外给大鼠静脉注射血管升压素(VP)拮抗剂(V_1和V_2受体拮抗剂),并不能削弱上述icv.HS引起的肾脏反应。脑室内注射高张盐水后,尿中多巴胺(DA)排出量无显著增多;给予多巴脱羧酶抑制剂苄丝肼也不能削弱icv.HS引起的肾脏反应。上述实验结果表明,在本实验条件下刺激脑内渗透压感受器引起的肾脏反应依赖于垂体的完整性,但看来并不依赖于外周的VP和DA,故垂体通过何种机制介导icv.HS引起上述肾脏反应,有待于进一步的研究。