天花粉凝集素糖结合专一性Ⅱ.

本文报道一些糖类、糖苷、糖蛋白和几种外源凝集素对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖或胎盘细胞膜结合的影响。在低浓度时,所用的糖类中,乳糖是最强的抑制剂,蜜二糖和棉籽糖的抑制能力和乳糖相仿,而纤维二糖、蔗糖、麦芽糖,则无明显影响。三个所用的糖蛋白,它们的抑制活性以下列顺序递减:猪甲状腺球蛋白,人血清转铁蛋白,鸡卵白蛋白。未标记的天花粉凝集素和蓖麻凝集素,两者都专一地和半乳糖结合,它们都能竞争标记天花粉凝集素,而伴刀豆球蛋白A和半夏凝集素则不能竞争。由此,我们推测天花粉凝集素主要是和半乳糖结合,但与乳糖的结合能力最强,故推测其结合部位能容纳半乳糖和另一个单糖。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

天花粉凝集素的糖结合专一性

本文对天花粉凝集素的糖结合特性,进行了初步研究。观察到除了半乳糖外,高浓度的葡萄糖也可将天花粉凝集素从酸处理交联琼脂糖亲和吸附柱上洗脱下来。N-乙酰氨基半乳糖对标记天花粉凝集素和酸处理交联琼脂糖的结合的抑制能力和半乳糖相同,甘露糖、葡萄糖、N-乙酰氨基葡萄糖仅在高浓度下才有较强的抑制能力。     

红花菜豆凝集素的糖结合专一性

经肼解、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－２柱层析、ＮａＢ＾３Ｈ４和ＮａＢＨ４还原,制备各种来源的、氚标记在还原末端的、还原末端为Ｎ－乙酰氨基葡萄糖醇的混合寡糖,经Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４凝胶柱分离,以及用糖苷酶酶解,制备了各种不同类型的氚标记的寡糖。这些寡糖在固定化的ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上亲和层析,根据各种类型寡糖在ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上的层析行为,确定红花菜豆（矮生红花变种）凝集素（ＰＣＬ）的     

坛紫菜凝集素的糖结合专一性和细胞凝集作用

坛紫菜的磷酸盐缓冲液浸取液,经硫酸铵沉淀和DEAE－Sepharose,SephadexG-100二步层析纯化,获得纯化的坛紫菜凝集素（PHL）。该凝集素能与3种单糖（阿拉伯糖,半乳糖,木糖）及麦芽糖专一性结合,其中与麦芽糖结合最强。细胞凝集实验结果显示,PHL能凝集兔,绵羊及鸡红细胞而不能凝集鸭,鸽子及人血红细胞,PHL还能凝集海洋微藻－绿色巴夫藻和淡水微藻－蛋白核小球藻,它们的凝集活性与藻细胞密度有关。不同状态的细菌和酵母细胞对PHL反应不同,表明随着细胞状态的改变,细胞表面的凝集素受体也随之发生变化。     

半夏凝集素的糖类结合专一性

半夏是一种多用途的中草药。从其块茎鲜汁中分得的结晶蛋白——半夏蛋白——能凝集兔红细胞叫,很可能是对某种糖专一结合的凝集素。为此我们采用了琼脂糖双扩散以及亲和层析等技术对半夏中血凝活性成分和各种糖类结合的专一性进行了探讨。用0.025M巴比妥-HCl缓冲液,pH8.6,或pH8.8的Tris-HCl缓冲液配成的     

半夏凝集素的糖类结合专一性

半夏是一种多用途的中草药。从其块茎鲜汁中分得的结晶蛋白——半夏蛋白——能凝集兔红细胞,很可能是对某种糖专一结合的凝集素。为此我们采用了琼脂糖双扩散以及亲和层析等技术对半夏中血凝活性成分和各种糖类结合的专一性进行了探讨。     

麦胚凝集素的结构及与专一性糖的相互作用

麦胚凝集素(WGA)分子由两个相同原体组成。WGAⅡ的原体为一条171个氨基酸残基的多肽链,肽链可分成四段,各段氨基酸顺序呈明显同系现象,折叠成形态相似的结构域。WGA的高级结构有明显对称性。二原体交界处有两对糖结合部位,能借氢键和疏水相互作用特异地结合N-乙酰葡糖胺和N-乙酰神经氨酸及其衍生物和寡聚糖。WGA与某些细胞上依赖糖的受体作用引起生物效应,其特殊的空间结构是重要的。     

凝集素碎片的糖结合活性

用固相合成法分别合成了羊蹄甲、小扁豆和欧洲百脉根３种植物凝集素中的某些糖结合活性部位的肽段。用毛细管电泳法观察到这些肽段和拟糖蛋白以及寡糖之间有一定的结合能力,而且表现出相对的专一性。     

天花粉凝集素的晶体学研究

天花粉凝集素是从中药天花粉瓜蒌块根中分离出的一种能专一结合糖类的新蛋白质。用悬滴汽相扩散法培养出了该蛋白质的晶体,最大线度尺寸达１．１ｍｍ。该晶体属正交晶系,空间群为Ｐ２１２１２１,晶胞参数ａ＝４４．７,ｂ＝６９．５,ｃ＝１８０．９,晶胞内每个不对称单位含１个天花粉凝集素分子。收集了３．０分辨率的衍射数据,并以具有某些相似性能的已知蛋白质结构为模型,做了分子置换研究。本文报导天花粉凝集素的晶体培养及Ｘ射线晶体学研究的初步结果。     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素(PTL)可与甘露聚糖结合。本文以PTL与~(125)I标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对PTL的糖结合活性的影响,井对PTL的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或EDTA对其糖结合活性无显著影响,但K~+可明显增加PTL的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制PTL与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。PTL专一与高甘露糖型糖链结合。     

半夏凝集素的糖结合活性研究

半夏凝集素可与甘露聚糖结合。本文以ＰＴＬ与＾１２５Ｉ标记的甘露聚糖的结合活性为指标,观察了一些金属离子对ＰＴＬ的糖结合活性的影响,并对ＰＴＬ的糖结合专一性作了较系统的研究。结果表明常见的金属离子或ＥＤＴＡ对其糖结合活性无显著影响,但Ｋ＾＋可明显增加ＰＴＬ的糖结合活性。大多数单糖,二糖不抑制ＰＴＬ与甘露聚糖的结合,但一些疏水配基形成的糖苷可产生显著的抑制效应。ＰＴＬ专一与高甘露糖型糖链结合。     

竹叶青蛇毒凝集素的糖结合性质

本文利用竹叶青蛇毒凝集素和去唾流酸的ａ１－酸性糖蛋白之间相互作用的研究系统,对ＴＳＬ的糖结合条件及结合性质作了更为全面深入的研究。研究结果表明,在ｐＨ５－１０的范围内,ＴＳＬ的糖结合活性基本不变,具有较广泛的ＰＨ适应性;ＴＳＬ的温度适应范围较窄,５０℃保温２小时活性便基本更新换代。在简单糖类中,半乳糖是最强的糖结合活性抑制剂。就吡喃型已糖而言,以Ｃ－３和Ｃ－４位置上的取代基的取向最为重要,特别是Ｃ     

天花粉凝集素的固定化及其应用

制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱,用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物,发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ,４０ｋＤ等糖蛋白,这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础,从人及骆驼,绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的,分子量不等的糖蛋白,进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α１－抗胰蛋白酶等,为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法,在寻找天     

天花粉凝集素的固定化及其应用

制备了天花粉凝集素ＴＫＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ的亲和柱,用来分离其它来源物质中与ＴＫＬ相互作用的糖复合物,发现从兔红细胞的血影细胞的抽提物中可以得到分子量为６２ｋＤ,４０ｋＤ等糖蛋白,这可能就是ＴＫＬ凝集兔红细胞的分子基础。从人及骆驼、绵羊血浆中也能得到与ＴＫＬ结合的、分子量不等的糖蛋白,进一步鉴定人血浆ＴＫＬ结合物中含有α＿１－抗胰蛋白酶等,为从血浆中分离这些糖蛋白提供了较为便利的方法。在寻找天花粉植物体内此凝集素的内源受体时,探讨了它可能的生理功能。     

天花粉凝集素的荧光光谱研究

天花粉凝集素在天然状态下荧光发射峰位于３３２ｎｍ处,以丙烯酰胺,ＫＩ及ＣｓＣ１等淬灭剂研究ＴＫＬ分子中Ｔｒｐ残基的微环境,发现只有丙烯酰胺能淬灭ＴＫＬ分子Ｔｒｐ的荧光,同此推断大部分的Ｔｒｐ残基位于ＴＫＬ分子内部,其荧光不易为Ｉ＾－或Ｃｓ＾＋接近而淬灭。疏水探针ＴＮＳ能够检测到ＴＫＬ中疏水微区的存在,并且这一疏水微区亦不同于ＴＫＬ的半乳糖结合位点,ＴＫＬ中不存在金属离子的结合部位。     

半乳糖凝集素糖结合的新模式：一个糖结合域的双重配体结合

半乳糖凝集素家族通过糖识别结构域(CRD)可以专一性识别和结合含β-半乳糖的多糖配体来发挥其生物学功能.到目前发现的CRD对β-半乳糖的识别模式是非常保守的,在结构已知的半乳糖凝集素结构中,一个CRD只能结合一个多糖配体分子.最近,通过对人源半乳糖凝聚素-3 CRD与对硝基TF二糖(TFN)复合物的晶体结构解析首次发现,一个CRD可以同时结合2个TFN分子.与这2个TFN分子有双向结合的残基突变体E165A结构分析显示,一个残基的突变引起的结构上的微小变化会使结合位点2丧失结合糖底物的能力,而位点1的配体结合却不受影响.这表明,结合位点1对糖底物保守的识别和结合是基本的、主要的,而结合位点2对于糖有条件的结合,是额外的、次要的.序列比对和立体化学分析显示,参与新位点2结合的关键残基在其他半乳糖凝集素分子中都是保守的,而它们参与糖配体结合并不常见,表明它们作用的发挥是有条件的.可能在复杂寡聚结构的情况下,如有多重分支结构,双重结合位点将有利于对这类配体分子的辨识和结合,已有一系列研究报道,具有分支结构的寡糖与半乳糖分子的亲和势明显高于单价糖配体,与上述分析相一致.对这类双重位点糖结合的可能生物学意义进行了讨论.     

红花菜豆凝集素糖—结合肽段的分离

红花菜豆凝集素糖－结合肽段的分离施炜星宋金芳孙册（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词红花菜豆凝集素;糖－结合肽段;分离收稿日期：１９９６－０６－０８;接收日期：１９９６－０９－０３。凝集素的生物学作用和功能与其糖－结合专一性密切相...