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为减轻逆转录病毒载体介导的外源基因的沉默,进一步提高逆转录病毒载体MFG介导的外源基因的表达水平,同时探讨逆转录病毒3’端长末端重复序列(long-terminal repeat,LTR)内U3区对病毒基因表达的影响,将逆转录病毒载体3’端LTR内的U3区用cmv核心增强子、启动子序列替代,同时去除了3个与逆转录病毒载体启动子甲基化有关的序列NCR、DR,并以egfp为报告基因,构建了MFG-egfp和MFG-egfp-cmv表达载体。结果显示:利用cmv启动子替代MFG载体3’端LTR的U3启动子序列,会显著降低MFG载体的病毒滴度及其介导的外源报告基因的表达。提示利用cmv启动子替代病毒载体的3’端LTR内的U3区,并不是提高MoMLV(moloney murineleukemi virus)逆转录病毒载体介导外源基因的表达及其病毒滴度的理想策略。结果也同时提示:在MoMLV逆转录病毒3’端LTR限的U3区,可能存在与病毒RNA加工、成熟及稳定性有关的信号序列。 相似文献
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在人泡沫逆转录病毒 (humanfoamyvirus ,HFV)原病毒全长克隆pHRSV13的基础上 ,缺失病毒基因组的env基因和bel基因 ,构建了一个表达标记基因neo和报道基因 gfp的重组人泡沫病毒载体质粒pGPSNI GFP。在与辅助质粒 p△GP共转染情况下 ,得到复制缺陷型的重组病毒颗粒GPSNI GFP。该病毒颗粒可以感染多种宿主细胞 ,将携带的外源基因整合于细胞染色体DNA上并实现表达 相似文献
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pBV220载体中外源基因表达水平定量分析 总被引:21,自引:0,他引:21
运用基于螺旋区随机堆积的RNA二级结构预测与密码子偏性计算等序列分析技术,分析了pBV220载体中携带的人白细胞介素2、人白细胞介素4等22个外源基因的表达水平,结果表明:5‘-30-39区域和3’端30--39区域的二级结构有与表达水平具有显的统计学意义;其次是3端9bp的局部密码子偏性,SD序列与起始密友子ATG之间碱基数在8±3范围内与表达水平无显关系。另外,运用判别分析方法构建了判别函 相似文献
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酵母作为外源基因表达系统的研究进展 总被引:10,自引:0,他引:10
甲醇营养型酵母和裂殖酵母作为外源基因表达的有效系统,正引起人们广泛研究。甲醇营养型酵母具有易诱导调控、适用于高密生长、能高效表达外源蛋白的特点。裂殖酵母有许多与高等真核细胞相似的特点,是研究真核分子生物学和真核基因表达有用的工具。本文综述了这两个酵母表达系统的特点。 相似文献
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巴斯德毕赤酵母外源基因表达系统 总被引:5,自引:0,他引:5
巴斯德毕赤酵母是目前最为成功的外源基因表达系统之一。有关研究主要涉及以下几个方面。宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因的整合与影响外源蛋白表达的因素等。 相似文献
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基因治疗所用的逆转录病毒载体系统徐铿,陈诗书(上海第二医科大学生物化学教研组,200025)关键词基因治疗,逆转录病毒载体,包装细胞八十年代初发展的以逆转录病毒为基础的基因转移系统对今天基因治疗的实现起了关键性的作用。目前近50个基因治疗计划绝大部分... 相似文献
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Størvold GL Gjernes E Askautrud HA Børresen-Dale AL Perou CM Frengen E 《Molecular biotechnology》2007,35(3):275-282
Utilization of RNA interference (RNAi) for knockdown of gene expression has become a standard tool for the study of gene function.
Short hairpin RNAs (shRNAs) expressed from RNA polymerase III promoters are widely used to achieve stable knockdown of gene
expression by RNAi. We have constructed a retroviral-based shRNA expression vector, pSiRPG, as a tool for shRNA-based functional
genomic studies. This vector is based on a widely used shRNA expression system and was modified to harbor an enhanced green
fluorescent protein (EGFP) and a puromycin selection marker.
The functionality of the elements in the pSiRPG vector was validated. The H1(TetO2) promoter in the vector facilitates doxycycline-inducible shRNA expression, which was demonstrated in cells expressing the
Tet repressor (TetR). However, we also demonstrated limited efficiency of the inhibition of shRNA expression in an uninduced
TetR-expressing cell line. This observation strongly indicates that the H1(TetO2) promoter, which is used in a wide range of vectors, is not optimal for tightly regulated shRNA expression. Stable repression
of the NDRG1 protein level was observed when introducing pSiRPG constructs expressing shRNAs targeting NDRG1 into two mammary epithelial cell lines by retroviral delivery. This vector should therefore facilitate functional studies
in breast cell lines that are hard to transfect with conventional plasmid-based methods. 相似文献
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