慢性束缚应激大鼠中枢糖皮质激素受体变化及中药复方的影响

目的:研究慢性束缚应激时大鼠脑内糖皮质激素受体的变化以及逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸三种中药复方对其影响.方法:制作大鼠束缚应激模型,用特制束缚架连续束缚7 d与21 d,每天3 h用免疫组织化学方法结合图像分析检测中枢(海马CA1区、齿状回、大脑皮质)糖皮质激素受体的变化.结果:慢性束缚应激后,大鼠海马CA1区、大脑皮层和齿状回GR免疫反应阳性细胞平均总面积和阳性细胞数目在慢性应激的早期(7d模型组)明显增多(P＜0.05),免疫反应强度明显增强(P＜0.01).在慢性应激的后期(21 d模型组),则表现为相关脑区GR免疫反应阳性细胞平均总面积和阳性细胞数目均明显减少(P＜0.05),免疫反应强度明显减弱(P＜0.01).中药复方各组相关脑区神经元GR免疫反应阳性细胞平均总面积和阳性细胞数目较21 d模型组明显增高,免疫反应强度明显增强,三给药组之间并无明显差异,说明三给药组均能使GR含量保持于较高的状态,同时能保持GR免疫活性,其中又以逍遥散作用为明显.结论:逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸明显逆转糖皮质激素受体下降趋势.     

疏肝、健脾、补肾复方对慢性束缚应激大鼠行为学和免疫功能的影响

目的　研究慢性束缚应激时大鼠行为学和免疫功能的变化以及疏肝、健脾、补肾三种中药复方对其影响。方法　用特制束缚架连续束缚 2 1d(或 7d) ,每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,观察大鼠行为学和免疫功能的变化。结果　慢性束缚应激后 ,大鼠的行为学发生了明显的变化 ,血清IL - 1β 上升 ,IL - 2和IL - 6下降 ,并且随着束缚时间的延长变化越明显。结论　逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸能改善大鼠行为学的变化 ,明显增强慢性束缚应激大鼠的免疫功能。     

逍遥散对慢性束缚应激模型大鼠相关脑区CRF基因表达的影响

目的:观察慢性束缚应激大鼠相关脑区CRF mRNA(下丘脑、垂体、海马、皮层)含量变化以及逍遥散对其影响.方法:用RT-PCR和图像分析方法测定相关脑区CRF mRNA含量变化.结果:应激组较正常对照组在下丘脑CRF-1基因表达下调(P<0.01).在下丘脑逍遥散组较应激组CRF-1基因表达显著下调(P<0.01),CRF-2基因表达显著上调(P<0.01);在海马区逍遥散组CRF-2基因表达较模型组上调(P<0.05);在皮层逍遥散组CRF-1基因表达较应激组则显著上调(P<0.01).结论:逍遥散组对慢性束缚应激中枢神经肽CRF的调节位点在下丘脑、垂体、海马和皮层,充分证实逍遥散的调节靶点与下丘脑、边缘系统及皮层中枢有关.     

AMPA受体和相关蛋白在束缚应激大鼠相关脑区的表达变化及逍遥散对其影响

目的：观察海马及杏仁核α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体亚基和相关调节蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用。方法：使用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用Western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回（DG）和杏仁核的AMPA受体亚基GluR2/3及N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白（NSF）、PKC作用蛋白1（PICK1）蛋白表达的情况。结果：7 d应激可使DG和杏仁核的GluR2/3、NSF表达显著降低（P均〈0.05）,使PICK1在CA1区的表达量显著增多（P〈0.05）,逍遥散对PICK1变化显示出一定调节作用。21 d应激可使CA1区的GluR2/3、NSF表达升高,其中GluR2/3有显著性差异（P〈0.01）,而在杏仁核表达有降低趋势,逍遥散对其均有显著调节作用（均为P〈0.05）,21 d应激使杏仁核PICK1表达量出现升高趋势,逍遥散可显著降低其表达（P〈0.05）。结论：AMPA受体在短期重复应激和慢性应激状态下反应不同,海马和杏仁核反应相反,逍遥散对慢性应激状态下AMPA受体表达的调节作用较短期重复应激强。     

应激性高血压大鼠脑干及下丘脑-垂体-肾上腺轴中肾上腺髓质素及其受体mRNA表达的改变

采用逆转录-聚合酶链式反应检测了慢性足底电击结合噪声应激致高血压大鼠下丘脑、延髓、中脑、垂体和肾上腺等组织中编码肾上腺髓质素的肾上腺髓质素前肽原(preproadrenomedullin,ppADM)基因以及ADM的特异性受体组件降钙素受体样受体(calcitonin-receptor-like receptor,CRLR)和受体活性调节蛋白2和3(receptor-activty-modifying proteins,RAMP2和RAMP3)表达的变化.我们观察到:与对照组相比,以3-磷酸甘油醛脱氢酶作为内参照,15 d足底电击结合噪声应激引起下丘脑、垂体和肾上腺中ppADM mRNA表达上调,而在延髓和中脑表达明显下调(P＜0.01或P＜0.05);CRLR基因表达量正常时在下丘脑相对较高,应激15 d后CRLR表达在延髓、中脑和下丘脑下调(P＜0.01或P＜0.05),而在垂体和肾上腺的表达无明显变化;应激后RAMP2基因在延髓和下丘脑表达上调,而在肾上腺表达显著下调(P＜0.01),其他部位无明显变化;RAMP3基因在对照组大鼠的中脑和下丘脑表达较高,在应激性高血压大鼠的下丘脑和垂体表达上调(P＜0.01或P＜0.05),而在中脑和肾上腺表达下调(P＜0.05),在延髓中的表达变化无统计学差异.上述结果提示:慢性足底电击结合噪声应激引起明显的中枢和下丘脑-垂体-肾上腺轴ADM及其受体组件CRLR/RAMP2或CRLR/RAMP3基因的表达变化.但慢性应激后中枢源性ADM及其受体的表达变化对应激和血压的调节以及在应激致高血压中的确切作用及机制尚待进一步研究.     

产前束缚应激子代大鼠海马神经颗粒素表达降低

神经颗粒素（neurogranin,NG）是脑特异性突触后蛋白,参与在学习记忆功能中起核心作用的信号转导通路及突触可塑性。本研究旨在探讨产前束缚应激对子代大鼠海马NG表达的影响。连续7d对孕晚期大鼠进行束缚应激,建立产前束缚应激模型,分为对照雌、雄组,应激雌、雄组。采用免疫组化方法观察NG在产前束缚应激子代大鼠海马不同亚区的分布特点;采用蛋白免疫印迹方法检测产前束缚应激子代大鼠海马NG蛋白的表达。结果显示：各组子代大鼠海马各区均有NG蛋白表达,CA1和CA3区表达高于齿状回（dentate gyrus,DG）;应激组雌、雄子代大鼠海马NG的表达明显低于对照组（P〈0．01）,应激组雌性子代比雄性子代减少更显著,对照组雌、雄子代之间无差异。免疫组化与蛋白免疫印迹方法所得结果一致。上述结果表明,NG在产前束缚应激子代大鼠海马表达降低,并且雌性比雄性降低明显,NG对产前束缚应激子代大鼠有差异性调制,NG表达减少可能与产前束缚应激子代大鼠学习记忆能力下降有关。     

金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力影响的干预研究

目的:研究金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力的影响及作用机理.方法:用成年雄性SD大鼠80只随机分成4组:空白对照组(正常组)、金匮肾气丸组、男宝胶囊组、模型组.除正常组外,其他组大鼠用氢化可的松注射液制造肾阳虚模型.正常组和模型组用等体积蒸馏水灌胃,治疗组用相应剂量的药物灌胃,持续给药30d.检测各组大鼠左侧睾丸、脾脏、胸腺质量,测血清睾丸酮(T)、促黄体生成激素(LH)、促卵泡生成激素(FSH)水平,精子密度、精子活率改变情况.结果:模型组左侧睾丸、脾脏、胸腺质量低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P.∞.05 o模型组血清T、LH、FSH水平低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P＜0.05).模型组精子密度、精子活率低于正常组、金匮肾气丸组和男宝胶囊组(P＜0.05).结论:金匮肾气丸和男宝胶囊对肾阳虚证雄性大鼠生殖能力有较好的治疗作用.     

西酞普兰对慢性应激大鼠额叶皮质神经细胞bax mRNA、bcl-2 mRNA表达及凋亡的影响

目的:探讨西酞普兰对慢性应激大鼠的额叶皮质神经细胞bax、bcl-2 mRNA表达的影响。方法:取24只雄性SD大鼠随机分为对照组(不进行任何处理)、应激组(应激+生理盐水灌胃)、实验组(应激+西酞普兰灌胃),采用强迫游泳制造慢性应激模型(15 min/d,共4周),用原位杂交技术检测bax、bcl-2 mRNA表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡,尼康图像分析(NIS DR)软件测量各指标阳性细胞数量。结果:应激组较对照组,大鼠额叶皮质bax mRNA阳性表达细胞明显增多(P0.01)、染色加深;bcl-2 mRNA阳性表达细胞明显减少(P0.01)且染色变浅,且TUNEL阳性细胞数量增多(P0.01),染色增强。而实验组较应激组大鼠,额叶皮质bax mRNA阳性表达细胞减少(P0.01)、染色变浅,bcl-2 mRNA阳性表达细胞明显增多(P0.05),染色加深,且TUNEL阳性细胞数量减少(P0.01),染色减弱。结论:大鼠额叶皮质神经细胞bax mRNA和bcl-2 mRNA的表达水平受到慢性应激的影响,导致细胞凋亡加剧,西酞普兰能够有效调控额叶皮质神经细胞bax和bcl-2 mRNA的表达水平,拮抗细胞凋亡,这可能是西酞普兰防治慢性应激引起的神经精神疾病的相关机制之一。     

产前应激子代大鼠海马核转录因子-кB表达的性别差异

;本研究采用免疫组织化学和Western blot检测NF-кB p65/p50在产前应激子代海马的表达,并探讨其表达是否存在性别差异.研究结果显示,在雌性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著低于对照组(P＜0.01),而海马各区p50表达均显著高于对照组(P＜0.01),中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异(P＜0.01).在雄性子代,中、晚期应激组海马齿状回p65表达显著高于对照组(P＜0.01),晚期应激组海马各区p50表达均显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01),中、晚期应激组间p65和p50表达均有显著差异(P＜0.01).雌、雄子代比较,对照组雌、雄p65表达差异极显著(P＜0.01),p50仅在海马CA1区表达差异极显著(P＜0.01);中期应激组雌、雄子代大鼠海马p65/p50表达无显著差异;晚期应激组雌、雄海马p65/p50表达均有极显著差异(P＜0.01).Western blot与免疫组织化学结果基本一致.结果表明,产前不同时期的应激显著影响子代海马NF-кB p65和p50表达,且有性别差异,这可能是产前应激对子代雌、雄大鼠学习记忆能力影响差异的机制之一.     

雌、孕激素对贝美格致痫大鼠大脑皮层、海马Glu和GABA免疫反应细胞的影响

采用免疫细胞化学双PAP法,观察雌二醇（E2）、孕酮（P）对贝美格（Bemegride,Be）腹腔致痫大鼠顶叶大脑皮层、海马CA1、CA3区Glu和GABA免疫反应细胞的影响。图像分析结果显示：Be致痫组皮层、海马Glu免疫反应平均阳性细胞数及光密度较正常组明显增加（P＜0.01）;CABA细胞数及光密度减少（P＜0.01）。给予E2后,Be致痫大鼠大脑皮层、海马Glu阳性细胞数目增多,光密度增高（P＜0.01）,GABA阳性细胞数目减少、光密度降低（P＜0.05,P＜0.01）而给予P后,致痫组GABA阳性细胞数目增多、光密度增高（P＜0.01）,Glu阳性细胞数目减少、光密度减低（P＜0.01）。提示雌、孕激素的致痫、抗痫作用与其调节脑内GABA和Glu系统的兴奋性有关。     

非编码的mRNA

非编码的mRNA是近年发现的一类不含典型ORF的mRNA.目前已发现或克隆的这类基因主要有：H19基因,XIST基因,XLSIRT基因,His-1基因,bic基因,rox1和rox2基因等.它们与胚胎发育,肿瘤发生及X染色体失活密切相关.     

mRNA turnover

Nuclear RNA-binding proteins can record pre-mRNA processing events in the structure of messenger ribonucleoprotein particles (mRNPs). During initial rounds of translation, the mature mRNP structure is established and is monitored by mRNA surveillance systems. Competition for the cap structure links translation and subsequent mRNA degradation, which may also involve multiple deadenylases.     

真核生物mRNA非翻译区结构特征与mRNA翻译

真核生物中蛋白质合成通常在翻译水平受到调控,而mRNA非翻译区与mRNA翻译之间关系密切。真核生物mRNA非翻译区长度、mRNA二级结构、GC含量、顺式作用元件与反式作用因子、mRNA帽端结构和多聚腺苷酸尾等结构对翻译具有重要的调控作用。本文就真核生物mRNA非翻译区结构特征对其翻译的影响做一综述。     

mRNA展示技术

mRNA展示技术是一种新兴的体外筛选多肽和蛋白质的有力工具.在筛选过程中,mRNA与其编码的多肽或蛋白质共价结合,形成mRNA-蛋白质融合体,能在大容量的多肽文库(1013～1015)中筛选具有特定生物学功能的多肽和蛋白质.目前,mRNA展示技术主要应用于各种靶分子的多肽和蛋白质适体的发现以及蛋白质相互作用机制的阐明和分析.由于其自身的巨大发展潜力,mRNA展示技术具有更为广阔的应用前景.     

mRNA差异显示

分离差异表达的基因是研究生命调节过程的重要手段,mRNA差异显示技术是一种能成功分离差异表达基因的方法,文章对该方法的基本原理、方法步骤及其应用作了较为详细的介绍。