Kv1.3 channel blockade enhances the phagocytic function of RAW264.7 macrophages

This study aimed to comprehend the largely unknown role of voltage-gated potassium channel 1.3(Kv1.3) in the phagocytic function of macrophages. We found that blocking of the Kv1.3 channel with 100 pmol L-1 Stichodactyla helianthus neurotoxin(Sh K) enhanced the phagocytic capacities of both resting and lipopolysaccharide(LPS)-stimulated RAW264.7 macrophages in the chicken erythrocyte system. In the fluorescein isothiocyanate(FITC)-labeled Escherichia coli k-12 system, Sh K increased the phagocytic capacities of resting RAW264.7 cells, but not of the LPS-stimulated cells, as LPS alone stimulated almost saturated phagocytosis of the macrophages. Sh K increased the nitric oxide(NO) production in LPS-activated cells, but not in resting RAW264.7 cells. There was no effect of Sh K alone on the cytokine secretions in resting RAW264.7 cells, but it suppressed IL-1β secretion in LPS-stimulated RAW264.7 cells. At a concentration of 100 pmol L-1, Sh K did not affect the viability of the tested cells. Kv1.3 was expressed in RAW264.7 cells; this expression was downregulated by LPS, but significantly upregulated by disrupting caveolin-dependent endocytosis with filipin III. In addition, cytochalasin D, an inhibitor of actin polymerization, did not affect the Kv1.3 expression. Thus, blocking of the Kv1.3 channel enhances the phagocytic capacity and NO production of this cell line. Our results suggest that Kv1.3 channel serves as a negative regulator of phagocytosis in macrophages and can therefore be a potential target in the treatment of macrophage dysfunction.     

红毛五加多糖单一组分AHP-Ⅲ对巨噬细胞的免疫调节作用及其机制

探讨红毛五加多糖(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharide)单一组分AHP-Ⅲ(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharideⅢ)对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的激活作用及机制。不同浓度AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞,中性红试验检测细胞吞噬能力;ELISA和Griess法检测其IL-6、TNF-α和NO的释放量;RT-qPCR检测iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平。在实验浓度范围内,AHP-Ⅲ可显著增强RAW 264.7细胞的吞噬能力(P<0.05);促进RAW 264.7分泌NO、TNF-α和IL-6(P<0.05或P<0.001);并显著增加RAW 264.7细胞中IL-6、TNF-α和iNOS mRNA的表达量,呈剂量依赖性;Western blot结果表明,AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞后,NF-κB中的p65、IKKβ、IκBα磷酸化水平明显升高。结果显示红毛五加多糖AHP-Ⅲ对小鼠巨噬细胞RAW 264.7具有显著激活作用。     

阻断Kv1.3和K_(Ca)3.1钾通道对单核/巨噬细胞增殖和趋化功能的影响

电压门控钾通道Kv1.3和钙激活钾通道KCa3.1是单核/巨噬细胞上的两种钾通道。本文旨在研究阻断Kv1.3和KCa3.1钾通道对于单核/巨噬细胞增殖和趋化功能的影响。用趋化实验检测单核/巨噬细胞对Ly-6Chi单核细胞(炎症型单核细胞)的趋化作用,用CCK8试剂盒检测单核/巨噬细胞的增殖情况,用ELISA法检测趋化因子CCL7的浓度变化,用趋化实验检测趋化因子CCL2和CCL7对炎症型单核细胞的趋化作用。结果显示,结果显示,分别用KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和Kv1.3强效阻断剂Sh K阻断这两种钾离子通道后,单核/巨噬细胞对Ly-6Chi单核细胞的趋化能力降低;Sh K使单核/巨噬细胞增殖受到显著抑制。用TRAM-34和Sh K孵育过的Ly-6Chi单核细胞对CCL2的敏感性下降。以上结果提示,Kv1.3和KCa3.1钾通道在单核/巨噬细胞活化、增殖和趋化过程起重要作用,这两种钾通道有望成为自身免疫性疾病和急性心肌梗死后心肌重塑调节的靶点。     

黄芪甲苷Ⅳ对内毒素诱导RAW264.7细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:研究黄芪皂苷Ⅳ对LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及机制.方法:测定细胞活力判断心肌细胞损伤的程度.TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10的释放以及NF-кB蛋白、Akt和磷酸化Akt表达用以研究作用机制.结果:黄芪皂苷Ⅳ对LPS引起的RAW264.7细胞损伤具有显著的抑制作用,1,3和10μM黄芪皂苷Ⅳ可显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α,IL-1β和IL-6的生成,促进IL-10的释放.黄芪皂苷Ⅳ剂量依赖性地增加了由LPS刺激而引起的RAW264.7细胞NF-kB蛋白的表达,抑制了LPS所致的p-Akt蛋白表达的升高.结论:黄芪皂苷Ⅳ可通过Akt-NF-kB途径调控促炎因子和抗炎因子表达的失衡,有效发挥对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用.     

连翘脂素对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的影响

为研究连翘脂素的抗炎效应及其抗炎机制,以地塞米松作为阳性对照,建立脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,检测炎症因子的释放及相关蛋白和mRNA的表达,以期提高对连翘脂素抗炎作用的全面认识并为连翘脂素临床开发提供有力的科学依据。实验采用Griess法检测细胞上清液中NO含量,ELISA法检测TNF-α和IL-6的含量,Westernblot法检测iNOS、COX-2蛋白的表达,RT-qPCR法检测iNOS、COX-2mRNA的表达。与LPS组比较,连翘脂素组和地塞米松组可以明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO、TNF-α和IL-6的量,并呈现浓度依赖关系。Westrenblot和RT-qPCR结果显示连翘脂素能抑制LPS诱导的iNOS、COX-2的蛋白表达以及mRNA的表达,并呈浓度依赖关系。实验研究表明连翘脂素能够明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子的释放,iNOS、COX-2蛋白及mRNA的表达从而抑制炎症反应。     

2-环戊氨基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内ROS水平与NO的分泌

炎症反应过程中有效控制巨噬细胞一氧化氮(niric oxide,NO)的过度分泌和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,对抑制LPS诱导的巨噬细胞过度活化和巨噬细胞介导的急性炎症反应具有重要的临床意义。该研究检测了以5,8-二甲氧基-1,4-萘醌(5,8-dimethoxy-1,4-naphthoquinone,DMNQ)为中间体,通过有机合成反应获得的6种新萘醌类衍生物对LPS诱导的RAW264.7细胞NO分泌和细胞内ROS水平的抑制效果及其机理。结果显示,在6种新合成的化合物中,2-环戊氨基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌具有明显抑制RAW264.7细胞NO分泌和细胞内ROS水平的效果,同时不影响细胞的吞噬能力。另外,通过对细胞信号传导通路的分析发现,#6化合物能够有效地抑制ROS依赖性的ERK和JNK磷酸化水平,最终发挥降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO分泌和i NOS蛋白质表达的作用。     

恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探

初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNF-α(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素-6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNF-α及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抑制脂多糖诱导的巨噬细胞促炎因子TNF-α和IL-1β基因表达

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)具有抗氧化、抗癌、抗炎等多种生物学特性,但对巨噬细胞中表达TNF-α及IL-1β的报告尚存在争议.本文旨在探索EGCG对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β基因表达的影响.MTT结果显示,0~100μmol/L EGCG对RAW264.7细胞活力没有影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA分析显示,1 mg/L LPS可显著升高小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264.7细胞Tnf-α和Il-1βmRNA和蛋白水平,EGCG单独处理对巨噬细胞Tnf-α和Il-1β的基因表达与蛋白生成没有影响,但可以抑制LPS诱导的巨噬细胞Tnf-α和Il-1β的基因表达与蛋白生成,并存在剂量依赖效应.上述结果提示,EGCG可以剂量依赖方式抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎细胞因子Tnf-α和Il-1β的表达,这可能与EGCG的抗炎效应有关.     

人参根提取物增强巨噬细胞RAW264.7的自噬水平并提高其增殖和吞噬能力

研究人参根提取物对巨噬细胞RAW264.7的增殖能力、吞噬能力和自噬水平的影响以及其相关性。用细胞计数试剂(CCK-8)检测不同浓度的人参根以及加入对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响;采用中性红吞噬实验检测人参根提取物对巨噬细胞吞噬活性的影响;采用吖啶橙染色法(AO染色法)检测自噬体的形成;采用免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3B、ATG7的表达变化以及自噬通路相关蛋白AMPK、AKT、mTOR及ULK1磷酸化的变化。引入自噬诱导剂rapamycin和自噬抑制剂CQ探讨人参根提取物影响细胞自噬与细胞增殖、吞噬能力的相关性。结果显示,与空白对照组比较,各组人参根提取物可促进巨噬细胞RAW264.7的增殖及吞噬作用;参根提取物能够增加巨噬细胞RAW264.7酸性自噬体的数量,提高LC3B、ATG7的表达、增加AMPK和ULK1的蛋白磷酸化水平,时降低AKT,mTOR的磷酸化水平。Rapamycin进一步增强巨噬细胞的增殖以及吞噬能力,而CQ则减弱了人参根提取物所引起的巨噬细胞的增殖以及吞噬能力提高。以上结果表明人参根提取物可能通过增强巨噬细胞RAW264.7的自噬水平,提高其增殖和吞噬能力,具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

太子参多糖对RAW 264.7巨噬细胞免疫调节作用的初步研究

目的:探讨不同浓度太子参多糖(PHPs)对RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞的免疫调节作用。方法:以不加任何样品的培养基为空白对照组,以脂多糖(LPS)为阳性对照组,同时用多粘菌素B(PMB)来排除LPS对PHPs的污染。当PHPs作用巨噬细胞RAW264.7 24 h后,通过研究PHPs对巨噬细胞释放NO及细胞因子TNF-a生成的影响来评价太子参多糖的免疫调节作用。结果:太子参多糖具有较明显的促进巨噬细胞释放NO的作用,可显著增加TNF-α的释放。结论:太子参多糖对RAW264.7小鼠单核巨噬细胞具有潜在的免疫调节活性。     

广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用受体TLR4和TLR2的影响

确定广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用受体,探索广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫调节机制。采用MTT法测定不同浓度广叶绣球菌β-D-葡聚糖对巨噬细胞RAW264.7增殖活力的影响,筛选出促进巨噬细胞增殖能力最强的浓度。用筛选出的β-D-葡聚糖浓度作用巨噬细胞RAW264.7;TLR4抗体和TLR2抗体分别作用巨噬细胞RAW264.7 1h,再用含有β-D-葡聚糖的细胞培养液培养。收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量;提取细胞内总RNA,采用RT-PCR测定巨噬细胞TLR4 mRNA表达量;提取巨噬细胞总蛋白,采用蛋白免疫印迹western blot测定TLR4的蛋白表达。广叶绣球菌β-D-葡聚糖能够促进巨噬细胞RAW264.7增殖,增加NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量,提高TLR4 mRNA表达和蛋白表达,差异极显著（P<0.01）。TLR4抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量明显下降,差异极显著（P<0.01）。TLR2抗体作用细胞后,NO、IL-6、TNF-α、IFN-β的生成量下降,但差异不显著。广叶绣球菌β-D-葡聚糖可以通过细胞表面受体TLR4激活信号转导通路,增强下游细胞因子的释放,从而调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能。TLR2可能不是广叶绣球菌β-D-葡聚糖的免疫受体。     

黄芩苷对脂多糖诱导的巨噬细胞NF-κB活化和炎症因子表达的影响

目的:研究黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞核因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)表达的影响.方法:分别用LPS(终浓度1μgomL-1)和LPs+黄芩苷(终浓度10,50,100μmol moloL-1)处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,用RT-PCR法和Elisa法检测细胞及其上清液中TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白的表达变化,用Western Blot法检测细胞核内NF-κB p65蛋白含量变化.结果:LPS刺激RAW264.7细胞可导致NF-κB激活,上调TNF-α、IL-6表达;黄芩苷预处理能降低LPS诱导的NF-κB出活化和TNF-α、IL-6表达.结论:黄芩苷可通过抑制NF-κB活化,下调LPS诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-6的生成,发挥抗炎作用.这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一.     

结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白ESAT-6增强巨噬细胞吞噬功能

【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenictarget of 6 kDa)对巨噬细胞吞噬功能的影响。【方法】用重组质粒pFLAG-ESAT-6和pFLAG-EGFP转染RAW264.7细胞,经G418筛选,PCR、RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达flag-ESAT-6和flag-EGFP的RAW细胞系,然后用流式细胞术观察各稳转细胞系吞噬荧光微球的能力,并用共聚焦显微镜和菌落计数法检测稳转细胞系吞噬大肠杆菌(Escherichia coli)的能力。【结果】获得了稳定表达flag-ESAT-6的RAW-E6细胞系和表达flag-EGFP的RAW-EGFP细胞系;流式细胞术检测结果表明RAW-E6吞噬荧光微球的能力显著强于野生型细胞系RAW264.7和对照细胞系RAW-EGFP;菌落计数和激光共聚焦分析表明RAW-E6细胞系吞噬E.coli的能力也显著强于RAW264.7和RAW-EGFP。【结论】通过胞内表达发现结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6能够增强巨噬细胞的吞噬功能,这将为深入理解结核分枝杆菌的致病机制提供新的思路。     

灵芝菌丝体冻干粉对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞相关因子分泌及蛋白表达的影响

通过体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,脂多糖(LPS)诱导刺激,考察了不同浓度灵芝菌丝体冻干粉(FDPGLM)处理后细胞活力、NO和IL‐6水平、Toll样受体4(TLR4)和i NOS m RNA表达、IκBa和磷酸化核转录因子κB(NF‐κB)p65蛋白表达之间的差异。结果显示:相对于LPS诱导来说,FDPGLM能以剂量依赖的方式显著抑制LPS诱导引起的NO和IL‐6水平上升(P0.01),显著下调TLR4 mRNA表达(P0.01),并显著抑制IκBa蛋白降解和NF‐κB p65蛋白磷酸化(P0.01),由此推测在LPS诱导的RAW264.7细胞中,FDPGLM可能经由TLR4/NF‐κB信号途径抑制促炎基因的激活并抑制促炎细胞因子比如IL‐6的分泌,提示FDPGLM在抗炎药理作用上的应用前景。     

余甘子不同溶剂提取物抗炎活性的研究

本试验旨在筛选出余甘子不同溶剂提取物的最佳抗炎活性部位。试验以水、乙醇、乙酸乙酯和石油醚为提取溶剂得到余甘子不同溶剂提取物(水提取物分成三个组分:水(1)组分分子量小于6000;水(2)组分分子量在6000到10000之间;水(3)组分分子量大于10000),采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型;以NO分泌量和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)释放量为指标,筛选出余甘子不同溶剂提取物最佳抗炎活性部位。余甘子不同溶剂提取物在浓度25~400μg/m L之间对细胞无明显细胞毒性(P0.05)。与模型组相比,水(1)、水(2)和乙醇提取物能显著抑制LPS诱导巨噬细胞分泌NO(P0.05)。在细胞因子实验中,乙醇提取物极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-1β和TNF-α(P0.01);乙酸乙酯提取物抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-6的效果最佳。综合评价得出余甘子乙醇提取物作为筛选出的最佳抗炎活性部位,其极显著抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌NO和细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6),可以作为后续分离鉴定抗炎活性物质单体的活性部位。     

人羊膜上皮细胞对脂多糖刺激下的RAW264.7 细胞向M1 极化的预防作 用及其初步作用机制

目的:本实验探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,h AECs)预防RAW264.7细胞在脂多糖(LPS)刺激后向M1极化的作用以及可能机制。方法:采用流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测细胞释放NO浓度,Real-time PCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、精氨酸酶1(arginase-1,Agr-1)及甘露糖受体(mannose receptor,MR又称CD206)等基因表达情况,Western blotting检测RAW264.7胞质蛋白p-IκBα以及胞核蛋白NF-κB的表达。结果:RAW264.7培养基组与h AECs条件培养基干预组的凋亡率分别为5.68%±2.3%、6.68%±2.1%(p0.05)。LPS刺激组与h AECs条件培养基干预组两组的迁移率分别为42.03±0.07%、14.71±0.04%(p0.05);LPS刺激组与h AECs干预组两组NO释放量分别为27.73±10μM、13.33±6.43μM(p0.05);Real Time-PCR结果显示,h AECs干预组M1型巨噬细胞相关基因如IL-1β、TNF-α、iNOS以及INF-β的表达显著下调,M2型巨噬细胞相关基因如Arg-1、CD206、CD36等表达上调(p0.01)。Western blotting结果显示,hAECs干预组RAW264.7中胞质蛋白p-IκBа以及胞核蛋白NF-κB的蛋白含量降低。结论:h AECs与RAW264.7预培养能有效预防LPS刺激下RAW264.7向M1极化,其机制可能是通过抑制IκBα蛋白磷酸化来降低核内NF-κB的含量,从而抑制了M1型相关基因的表达。     

IFITM3在脓毒症模型及胆碱能抗炎模型中的表达

目的:探讨干扰素诱导的跨膜转运蛋白3(IFITM3)在LPS刺激的RAW264.7细胞系的脓毒症模型中的表达以及胆碱能抗炎模型中的表达。方法:用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞24、48、72 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,给予50μM胆碱能受体激动剂GTS-21以及同时给予100 n M胆碱能受体拮抗剂α-BGT刺激细胞24 h后,用Western-Blot法检测各组细胞IFITM3蛋白表达水平。用ELISA法检测IL-1β的方法验证脓毒症模型和胆碱能抗炎模型的建立。结果:(1)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞后再给予50μM GTS-21,IFITM3蛋白表达明显升高(P0.001);而给予100 nMα-BGT后,IFITM3蛋白表达明显降低(P0.001)。结论:LPS刺激的RAW264.7细胞IFITM3蛋白表达降低。给予胆碱能激动剂GTS-21后能够逆转LPS诱导的IFITM3表达的降低,给予胆碱能受体拮抗剂α-BGT则能阻断这种现象。IFITM3有可能在脓毒症中发挥保护作用,并且参与了胆碱能抗炎通路抗炎过程的调节。     

Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活行

应用脂多糖(LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强,以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力,也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性.TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用.实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用.结果证实TLR2能介导LPS的功能,而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程,提示LPS激活巨噬细胞吞噬能力的提高与诱导表达TRAIL等细胞因子有关.     

Toll样受体抗体抑制脂多糖激活巨噬细胞的吞噬活性

应用脂多糖(LPS)激活巨噬细胞后其吞噬能力大大增强, 以此为模型发现TLR2的多抗能部分抑制LPS激活巨噬细胞吞噬金葡萄球菌的能力, 也能部分阻断对U937细胞的吞噬活性. TRAIL或TNFα多克隆抗体同样能起到类似作用. 实验还发现低浓度血清培养亦在一定程度上抑制LPS激活巨噬细胞的吞噬作用. 结果证实TLR2能介导LPS的功能, 而某些血清因子参与了介导LPS的信号转导过程, 提示LPS激活巨噬细胞吞噬能力的提高与诱导表达TRAIL等细胞因子有关.     

Kruppel样因子4对内毒素所致IL-6基因表达的调控及机制研究

探讨Kruppel样因子4(KLF4)对内毒素所致白介素(IL-6)的基因表达以及释放的影响,并对其调控机制做了初步研究．使用RT-PCR和Western blot检测KLF4 mRNA和蛋白质的表达．采用KLF4过表达的RAW264.7巨噬细胞株或反义寡核苷酸技术抑制内源性KLF4的表达,用RT-PCR和ELISA检测内毒素(LPS)刺激后IL-6 mRNA和蛋白质的表达．采用荧光素酶报告基因检测RAW264.7细胞中KLF4过表达对IL-6基因启动子报告基因转录活性的影响．使用EMSA法检测细胞中KLF4与IL-6基因启动子区KLF4元件的结合．结果表明：LPS可以诱导RAW264.7巨噬细胞KLF4的表达以及IL-6蛋白表达．KLF4过表达明显抑制IL-6的mRNA和蛋白质的表达,而KLF4缺失使这种作用消失．荧光素酶报告基因的结果显示,KLF4可以抑制LPS所致的IL-6基因启动子的转录活性．EMSA显示KLF4不能与IL-6启动子区的KLF4结合元件直接结合．结果表明,LPS可以促进RAW264.7小鼠巨噬细胞KLF4的表达和IL-6的释放．KLF4能抑制LPS诱导的IL-6表达和释放,其机制是抑制IL-6启动子的转录活性,但KLF4的抑制作用不是通过直接与IL-6基因的启动子区相结合而实现的．